甲狀腺功能的免疫學檢測

甲狀腺功能的免疫學檢測第1頁/共31頁甲狀腺功能的免疫學檢測第2頁/共31頁A.甲狀腺概述B.甲狀腺功能的調(diào)節(jié)與病理失調(diào)C.臨床實驗室甲狀腺檢測D.檢測干擾因素及不正常模式解釋E.促甲狀腺激素實驗檢測進展F.游離甲狀腺激素分析的現(xiàn)狀及評價第3頁/共31頁甲狀腺的外觀A.甲狀腺概述甲狀腺位于頸部甲狀軟骨前下方，是人體最大的內(nèi)分泌腺體。主要分泌T3、T4等甲狀腺激素。第4頁/共31頁.甲狀腺激素甲狀腺激素主要指甲狀腺腺泡細胞分泌的甲狀腺素(Thyroxine，T4)及三碘甲狀腺原氨酸(Triiodothyroxine，T3)，兩者的化學名稱分別是3，5，3’，5’-四碘甲腺原氨酸和3，5，3’-三碘甲狀腺原氨酸?；瘜W本質(zhì):酪氨酸衍生物生理作用:

甲狀腺激素對細胞中許多生理和生化活動都有影響,包括生長的調(diào)節(jié)和對各種食物代謝的調(diào)節(jié),他們主要調(diào)節(jié)代謝率,尤其在肝、心、腎中活性特別高.他們通過對代謝的興奮作用來加強呼吸,是恒溫脊椎動物強制性加溫的主要調(diào)節(jié)者.第5頁/共31頁a.甲狀腺腺泡聚碘主動運輸,Na＋-K＋-ATP酶b.碘的活化

甲狀腺過氧化物酶（TPO）c.酪氨酸碘化與甲狀腺激素的合成

甲狀腺球蛋白（TG）d.甲狀腺激素的貯存、釋放與運輸貯存:以膠質(zhì)形式貯存于濾泡腔;貯存量大,可供機體利用50－120天之久。釋放:吞噬細胞逆相的攝粒作用釋放入血運輸:在血液中兩種存在形式

1)與血漿蛋白結(jié)合

2)呈游離狀態(tài).

甲狀腺激素的代謝第6頁/共31頁第7頁/共31頁

T3、T4由TG釋放入血.T3半衰期為9h,T4為190h.在外周組織,大部分T3由T4轉(zhuǎn)化而來.同時生成少量rT3.其中0.3%T3以FT3形式存在,0.03%T4以FT4存在。第8頁/共31頁a.下丘腦-腺垂體對甲狀腺的調(diào)節(jié)b.甲狀腺激素的反饋調(diào)節(jié)c.甲狀腺的自身調(diào)節(jié)d.甲狀腺功能紊亂

B.甲狀腺功能的調(diào)節(jié)第9頁/共31頁a.下丘腦-腺垂體對甲狀腺的調(diào)節(jié)

b.甲狀腺激素的反饋調(diào)節(jié)

c.甲狀腺激素的自身調(diào)節(jié)第10頁/共31頁可能原因:1)特定生理階段的甲狀腺生理適應(yīng)反應(yīng),如兒童、老年、孕期。2)非甲狀腺疾病引起的適應(yīng)性功能改變，如下丘腦－垂體軸功能紊亂，潛在的系統(tǒng)性疾病。3)原發(fā)性甲狀腺紊亂如甲狀腺功能正常的甲狀腺腫、Graves病、自律性甲狀腺結(jié)節(jié)、甲狀腺功能減退、自身免疫性甲狀腺炎。d.甲狀腺功能紊亂第11頁/共31頁C.臨床實驗室甲狀腺檢測

1.循環(huán)血液中甲狀腺激素濃度測定2.丘腦－垂體－甲狀腺軸功能檢查第12頁/共31頁甲功血清學檢查主要包括:

T4,FT4,T3,fT3,TG,TM(TPO)T4,FT4:

T4為甲狀腺直接分泌.其分泌指標的高低直接反映甲狀腺功能狀態(tài).增高表示功能亢進,降低表示功能減低.但T4受結(jié)合蛋白的影響較大.FT4代表了血清中T4的活性成分,反應(yīng)了激素產(chǎn)生和激素清除的真實狀態(tài).T3,FT3:

近80%的外周T3是由外周T4轉(zhuǎn)化而來,20%是由甲狀腺直接分泌.T3同樣受結(jié)合蛋白濃度變化的影響.FT3活性是FT4的五倍.血中T3,FT3濃度反映了T4向T3的轉(zhuǎn)化狀況.T3和FT3對甲減診斷意義很小.FT3及FT4升高提示甲狀腺功能亢進，降低提示甲狀腺功能低下；第13頁/共31頁TSH:

如果下丘腦和垂體前葉功能正常,TSH濃度反映了組織中甲狀腺激素的狀態(tài).TSH濃度與FT4呈負相關(guān).促甲狀腺激素主要用于診斷和鑒別甲狀腺功能低下，原發(fā)性甲狀腺功能低下時其升高，繼發(fā)性甲狀腺功能低下時其降低.1.作為原發(fā)性甲亢或甲減的一線檢測.2.對繼發(fā)性甲狀腺功能障礙,與FT4聯(lián)合測定.3.對先天性甲減的篩查.4.在甲狀腺替代或抑制治療中,用于治療監(jiān)測.

第14頁/共31頁抗甲狀腺球蛋白抗體(TGAb)抗甲狀腺微粒體抗體(TMAb)

診斷橋本甲狀腺炎,原發(fā)性甲減或甲低,兩種抗體同時檢測可提高抗甲狀腺自身抗體的陽性檢出率。第15頁/共31頁D.檢測中干擾因素及不正常模式分析經(jīng)典模式：甲亢：TT3,TT4,FT3,FT4,↑

TSH↓

診斷價值：FT3>FT4>TT3>TT4甲低：T3,T4,FT3,FT4↓

TSH↑

診斷價值：FT4=TSH>TT4>FT3>TT3甲狀腺分析中的生物和干擾因素第16頁/共31頁第17頁/共31頁1.綜述

TSH是垂體前葉嗜堿細胞合成分泌的糖蛋白激素.除TSH外,該細胞還分泌FSH,LH.目前共識:1)因結(jié)構(gòu)接近而出現(xiàn)功能類似作用.如HCG分泌過多引起甲亢.2)結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)在試驗中可能出現(xiàn)交叉反應(yīng).TSH血清中濃度為2-11mU/L,半衰期,60分鐘.由垂體前葉分泌.呈脈沖式釋放,每2-4h波動一次.清晨高午后低.是調(diào)節(jié)甲狀腺功能的主要激素.化學本質(zhì):糖蛋白.兩個亞基.α,β。Mr:28,000生理功能:促進甲狀腺激素的合成和釋放.E促甲狀腺激素實驗檢測進展第18頁/共31頁時間典型分析方法功能靈敏度第一代1965-1980RIA1.0-2.0第二代1980-1985IRMA0.1-0.2第三代1985-ICMA0.01-0.022.TSH分析法發(fā)展歷史第19頁/共31頁

第3代TSH免疫分析技術(shù)——免疫化學發(fā)光分析具有靈敏度高、自動化程度高、所需時間短、無放射性污染等特點，現(xiàn)已從實驗室研究進入常規(guī)臨床診斷應(yīng)用，并形成一定的市場規(guī)模，包括拜耳、雅培、羅氏、PE等公司已有多種自動分析儀器的面市，國內(nèi)一些科研單位也已自行研制開發(fā)了一些簡單的化學發(fā)光和熒光免疫檢測儀器。此外，TSH參考物質(zhì)的建立，使TSH檢測方法的評價將更加科學和統(tǒng)一，檢測技術(shù)也將會不斷地改進和發(fā)展，為臨床提供更準確可靠的數(shù)據(jù)。與之呼應(yīng)，檢測市場需要大量與之配套的檢測試劑體系?？紤]到目前化學發(fā)光和時間分辨熒光分析儀器幾乎全部為國外廠商生產(chǎn)，而絕大多數(shù)廠商采用儀器加試劑盒捆綁銷售的壟斷模式，并在儀器中人為設(shè)置排它性檢測程序，從而抬高了配套試劑盒價格，增加了檢測成本。開發(fā)國產(chǎn)低價、穩(wěn)定、通用的人血TSHICMA和TRIFMA試劑盒不僅具有較高的科學意義和學術(shù)價值，同時也具有廣闊的市場應(yīng)用前景。第20頁/共31頁靈敏度的提高導致TSH正常值范圍不斷的修正.從RIA的2.0-15.2mIU/L到近來大部分報告的0.4-4.0mIU/L.

至少說明了三個問題:

1.正常血清中的TSH水平為對數(shù)正態(tài)(log-gaussion)分布.

2.高靈敏度TSH測定排除了亞臨床甲狀腺疾病患者,而以往這些患者均被劃入正常人范圍.

3.單抗的應(yīng)用限制了與垂體其他糖蛋白激素發(fā)生的交叉反應(yīng).第21頁/共31頁F游離甲狀腺激素分析的現(xiàn)狀及評價一、游離甲狀腺激素分析的現(xiàn)狀

理想游離甲狀腺激素分析方法的實驗設(shè)計、選擇試劑材料以及操作過程，都不應(yīng)該會對游離的和結(jié)合的甲狀腺激素間的動態(tài)平衡產(chǎn)生干擾。但是當前的游離甲狀腺激素分析卻存在著各種各樣的影響因素，包括：檢測對象的生理、病理狀況、樣本中各種成分和藥物的干擾以及方法本身不足帶來的影響。這些因素降低了游離甲狀腺激素分析的有效性，在臨床上必須與其他指標聯(lián)合使用。第22頁/共31頁

人體血液中的甲狀腺激素T3、T4絕大部分與血漿蛋白結(jié)合，僅僅有大約0.3％的T3、0.03％的T4呈游離狀態(tài)存在于血液中。人們已經(jīng)確認，只有游離激素才能在體內(nèi)發(fā)揮甲狀腺激素特有的生理功能。所以測定FT3、FT4能更準確、靈敏的反映甲狀腺的功能狀態(tài)，并可避免TT3、TT4測定中因血里TBG等結(jié)合蛋白的濃度或結(jié)合活性變化而造成的干擾。 第23頁/共31頁

一個理想的FT4和FT3分析應(yīng)當符合以下條件：①直接測定游離激素；②不會因為激素結(jié)合蛋白濃度在人群中絕對或相對的變化而產(chǎn)生偏差；③不會因為激素結(jié)合蛋白與激素的親和力變化而產(chǎn)生偏差；④不會因為血清或血漿含有影響激素與結(jié)合蛋白結(jié)合的藥物存在而產(chǎn)生偏差。針對FT4和的常見分析方法有二種：游離指數(shù)方法和配基免疫分析。第24頁/共31頁二、游離甲狀腺激素分析方法的偏差

目前FT4和FT3各種分析方法在應(yīng)用中都存在偏差，偏差主要來源于游離和結(jié)合的甲狀腺激素之間的動態(tài)平衡被不同程度擾。1、T3和T4在血漿中主要以與蛋白結(jié)合形式存在，占極少比例的游離激素與結(jié)合激素之間保持著動態(tài)平衡，只有將血清中已結(jié)合的甲狀腺激素的解離降到最小，F(xiàn)T4和FT3才真正準確。。對于FT4和FT3分析，如果其取樣過程，所使用的各種試劑以及樣本檢測程序都不會影響游離一結(jié)合間的平衡，那么此方法一定能保證在正常人群血清結(jié)合蛋白濃度范圍中。但對于體外分析方法而言，則不可能做到這一點，尤其是分析血清，激素結(jié)合蛋白濃度低的樣本時更是如此。

2、影響游離甲狀腺激素分析有效性的因素第25頁/共31頁第26頁/共31頁

該表指出：在各種因素影響下，激素結(jié)合蛋白的濃度或激素結(jié)合蛋白親和力的變化，造成FT4和FT3和結(jié)合甲狀腺激素間的平衡受到擾動，使結(jié)果較正常參照值出現(xiàn)偏差。在FT4和FT3分析中，游離和結(jié)合激素間動態(tài)平衡被擾動的形式包括：①通過抗體或其他蛋白固定一部分游離激素造成結(jié)合激素的進一步解離：②由于加入分析試劑造成樣本被稀釋而引起的結(jié)合激素的解離。對于游離激素免疫分析，抗體或蛋白對游離激素的捕捉和方法本身的稀釋作用是兩個重要的影響因素。因此，要求我們在進行游離激素免疫分析時，盡可能的避免該動態(tài)平衡被擾動，達到較好的檢測效果。第27頁/共31頁3、游離甲狀腺激素分析方法的有效性評價

由于造成偏差的因素來源眾多，使用當前的FT4和FT3分析法，單獨的FT4和FT3指標不足以正確解釋樣本反映的甲狀腺功能狀況，一般都需要結(jié)合其他指標，如總激素水平、抗甲狀腺過氧化物酶抗體、TSH以及其他臨床指標。因此各種游離激素分析方法的有效性都是有限的。

第28頁/共31頁

對有效性的測試從幾個方面入手：①方法上結(jié)合蛋白依賴性：選擇確診的臨床樣本，尤其是結(jié)合蛋白濃度變化較大的樣本，與標準方法或平衡透析法比對，進行稀釋實驗和回收實驗；②抵抗干擾因素能力：加入干擾因素，對比加入前后的差異，包括前述的藥物、自身抗體等；③應(yīng)用范圍測試：流動病例組選擇TBG濃度異常的，含有自身抗體的樣本，家族性Alb障礙性高甲狀腺素血癥樣本以及含有干擾因素的樣本，以及總激素水平異常NTI病例。第29頁/共31頁4、游離甲狀腺激素分析的發(fā)展前景

對于游離甲狀腺激素分析，除了免疫分析，還有