2023年植物組織培養(yǎng)期末題

一、填空題（每空0.5分，共10分）

1.植物組織培養(yǎng)按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)。

2.在組織培養(yǎng)中，IAA等植物激素必須用過濾法滅菌，而接種室空間可采用紫外線法滅菌

或熏蒸法滅菌。

3.植物的胚胎培養(yǎng)，涉及胚培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)以及試管受精等四個內(nèi)容。

4.1960年，英國學(xué)者Cocking用真菌纖維素酶分離原生質(zhì)體成功，從而開創(chuàng)原生質(zhì)體培

養(yǎng)技術(shù)。

5.對植物材料進(jìn)行表面滅菌時?，常采用的滅菌藥劑為75%酒精、次氯酸鈉、升汞。

6.器官培養(yǎng)時，其營養(yǎng)器官的培養(yǎng)有離體根的培養(yǎng)、離體莖的培養(yǎng)、離體葉的培養(yǎng)三種

方式。

7.大多數(shù)植物組織培養(yǎng)的適宜溫度范圍是20~30℃,培養(yǎng)基的pH值范圍是5.6~5.8。

8.用烘箱迅速干燥洗凈后的玻璃器皿時溫度可以設(shè)在80℃的溫度范圍內(nèi)，而若用它高溫

干燥滅菌則需在150℃的溫度下廣3小時。

二、單項選擇題（每題2分，共10分）

1.下列不屬于生長素類的植物激素是A。

A6-BA；BIAA；CNAA；DIBA

2.在原生質(zhì)體的培養(yǎng)中，滲透穩(wěn)定劑的作用是A。

A穩(wěn)定原生質(zhì)體的形態(tài)而不使其被破壞；B支持作用；C提供營養(yǎng)；D調(diào)節(jié)PH

值

3.MS培養(yǎng)基中，下列不屬于大量元素的鹽是C。

ANH4NO3；BKNO3；CZnSO"7HQ；DMgSO..7H,0

4.下列實(shí)驗中也許獲得單倍體植株的是D。

A小麥的莖尖培養(yǎng)；B番茄花柱培養(yǎng)；C玉米胚乳培養(yǎng)；D玉米花粉培養(yǎng)

5.同一植株下列B部位病毒的含量最低。

A葉片細(xì)胞；B莖尖生長點(diǎn)細(xì)胞；C莖節(jié)細(xì)胞；D根尖生長點(diǎn)細(xì)胞

三、判斷題（對畫J,錯畫X。每題2分，共10分）

1.幼嫩的組織比成熟的老組織脫分化難。（X）

2.對于具有瓊脂糖的培養(yǎng)基而言，在pH值高于6.5時，培養(yǎng)基不能很好地凝

固；低于5.0時，培養(yǎng)基會變硬。（X）

3.常用的生長素作用的強(qiáng)弱順序為：2,4-D>NAA>IAA>IBA。（X）

4.由性細(xì)胞發(fā)育而成的胚叫做胚狀體，而由體細(xì)胞發(fā)育而成的胚叫做合子胚。

（X）

5.通過花藥培養(yǎng)所獲得的植株一定都是單倍體。（X）

四、名詞解釋（每題3分，共15分）

1.培養(yǎng)基母液：在配制培養(yǎng)基時，預(yù)先配制好不同組分的濃溶液，分別是使用

濃度的10倍或100倍，甚至1000倍。這些母液涉及無機(jī)鹽、維生素以及在水溶

液中穩(wěn)定的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。

2.植物細(xì)胞全能性：植物細(xì)胞具有該植物體所有遺傳的也許性，在一定條件下

如同受精卵同樣，具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力

3.植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)：指能影響植物的細(xì)胞分化、分裂及發(fā)育，和影響植物的

形態(tài)建成、開花、結(jié)實(shí)、成熟、萌發(fā)等生理生化過程，對外植體愈傷組織的誘導(dǎo)

和器官分化起著重要和明顯的調(diào)節(jié)作用，其中以生長素類和細(xì)胞分裂素類最為常

用。

4.細(xì)胞脫分化：使以分化的細(xì)胞失去已分化細(xì)胞的典型特性，或消除了細(xì)胞分

工，使之回復(fù)到分生組織狀態(tài)或胚性細(xì)胞狀態(tài)，從而恢復(fù)細(xì)胞分化的能力。

5.無菌操作：在無菌的空間環(huán)境下，對植物材料進(jìn)行組織培養(yǎng)操作

五、簡答題（每題5分，共25分）

1.培養(yǎng)基的重要成分及作用？

不管液體培養(yǎng)還是固體培養(yǎng)，大多數(shù)植物組織培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基都是由

水、無機(jī)營養(yǎng)物（無機(jī)鹽）、碳源、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、瓊脂和有機(jī)附加物

等幾大類物質(zhì)組成。培養(yǎng)基中的水是植物細(xì)胞各種生理、生化反映的介質(zhì)，起著

維持細(xì)胞一定滲透壓與膨壓的作用，并為植物機(jī)體提供氫、氧元素；無機(jī)鹽涉及

大量元素和微量元素，重要提供無機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)；碳源是培養(yǎng)基中作為植物材料生

長發(fā)育的能源；維生素類與植物體內(nèi)各種酶的形成有關(guān)；生長調(diào)節(jié)物質(zhì)是培養(yǎng)基

中不可缺少的關(guān)鍵物質(zhì)，對外植體愈傷組織的誘導(dǎo)和器官分化起著重要和明顯的

調(diào)節(jié)作用；瓊脂的重要作用是使培養(yǎng)基在常溫下凝固，但不參與代謝；有機(jī)附加

物涉及各種氨基酸，是培養(yǎng)基中重要的有機(jī)氮源。

2.什么是廣義的和狹義的植物組織培養(yǎng)？

廣義的植物組織培養(yǎng)泛指將植物體的各種結(jié)構(gòu)成分，如植物細(xì)胞、植物原生

質(zhì)體、植物組織以及植物器官甚至幼小植株放在離體的、無菌的人工環(huán)境中讓其

生長發(fā)育的方法。也叫離體培養(yǎng)或試管培養(yǎng)。涉及植株的培養(yǎng)、植物胚胎培養(yǎng)、

植物器官培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)、植物細(xì)胞培養(yǎng)、植物原生質(zhì)體培養(yǎng)。狹義的植物

組織培養(yǎng)是指對植物小塊組織的培養(yǎng)。

3.簡述脫除植物病毒的方法。

脫除植物病毒的方法有四種：1.莖尖培養(yǎng)脫毒法；2.熱解決脫毒法；3.微體

嫁接離體培養(yǎng)脫毒法；4.珠心組織脫毒法。莖尖培養(yǎng)脫除病毒的依據(jù)：病毒在植

物體內(nèi)分布是不均一的，越接近生長點(diǎn)病毒濃度越稀，因此可采用小的莖尖離體

培養(yǎng)而脫除植物病毒。熱解決脫毒法的原理：熱解決法并不殺死病毒，只能鈍化

病毒的活性，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或增殖停止，而失去侵染的能力；同時

可以加速植物細(xì)胞的分裂，使植物細(xì)胞在與病毒繁殖的競爭中取勝。微體嫁接離

體培養(yǎng)脫毒法原理：把極小的莖尖作為接穗嫁接到種子實(shí)生苗砧木上，然后連同

砧木一起在培養(yǎng)基上培養(yǎng)。珠心組織脫毒法的原理:病毒是通過維管組織傳播的，

而珠心組織與維管組織沒有直接聯(lián)系，故可以通過珠心組織培養(yǎng)獲得無病毒植

株。

4.植物組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的pH值起什么作用?假如pH值過高或過低會有什

么后果？

植物組織培養(yǎng)中，一般調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至一合適的范圍，其作用是：一

方面提供大多數(shù)植物材料規(guī)定的弱酸性環(huán)境，以便能進(jìn)行正常的生理生化活動，

另一方面是影響固體培養(yǎng)基的凝固限度。一般調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至5.0-6.0的范

圍，pH值過高或過低都會導(dǎo)致植物材料不能正常生長發(fā)育，并且pH值過高會

導(dǎo)致固體培養(yǎng)基的過硬，不利于營養(yǎng)成分的吸取，pH值過低則導(dǎo)致固體培養(yǎng)基

不能正常凝固。

5.單倍體育種的技術(shù)流程。

選擇親本一有性雜交-F1產(chǎn)生的花粉離體培養(yǎng)獲得單倍體植株一誘導(dǎo)染色

體加倍獲得可育純合子一選擇所需要的類型。

6.人工種子的制作方法。

1.選取合適的植物材料，切取植物組織

2.脫分化哺育愈傷組織

3.將培養(yǎng)液制作成為人工胚乳，

4.將愈傷組織以及人工肝胚乳放入具有一定透氣透水性的人工種皮中。

六、論述題（每題10分，共30分）

1.請你設(shè)計一個組培實(shí)驗室，都需要哪些儀器設(shè)備，說明你設(shè)計組培實(shí)驗室的

各分室及其所需儀器設(shè)備的作用。

1.一個標(biāo)準(zhǔn)的組織培養(yǎng)實(shí)驗室應(yīng)當(dāng)具有進(jìn)行下列工作所必需的設(shè)施與儀

器：1）玻璃器皿、塑料器皿和其他實(shí)驗器皿的清洗和貯存；2）培養(yǎng)基的制備、

滅菌和貯存；3）植物材料的無菌操作；4）將培養(yǎng)物保持在溫度、光照、也許時

尚有濕度可控的條件下；5）培養(yǎng)物的觀測。

植物組織培養(yǎng)的實(shí)驗室，通常涉及通用實(shí)驗室、無菌操作室（接種室）、恒

溫培養(yǎng)室、檢查培養(yǎng)情況并做記錄的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗室。通用實(shí)驗室重要用于植物組

織培養(yǎng)所需器具的洗滌、干燥和保存，培養(yǎng)基的配制、分裝和滅菌，化學(xué)試劑的

存放及配制，重蒸儲水的生產(chǎn)，待培養(yǎng)植物材料的預(yù)解決及培養(yǎng)物的常規(guī)生理生

化分析等操作。為了配制各種培養(yǎng)基，室內(nèi)必須有一個較大的平面工作臺及供放

置各種培養(yǎng)器具的櫥柜。室內(nèi)重要應(yīng)有滅菌設(shè)備、稱量設(shè)備、pH值測定設(shè)備、

蒸儲水器、烘箱、冰箱、藥品柜、攪拌器、無菌操作室重要用于植物材料的消毒

和接種，培養(yǎng)物的繼代轉(zhuǎn)移等等。它應(yīng)是無塵、無對流空氣的非常潔凈的實(shí)驗室。

室內(nèi)重要應(yīng)有超凈工作臺和通風(fēng)換氣設(shè)備。恒溫培養(yǎng)室是培養(yǎng)試管苗的場合，要

滿足外植體生長所需的溫度、光照、濕度和氣體等條件。室內(nèi)重要應(yīng)有培養(yǎng)架和

控制溫度和光照的設(shè)備，以及搖床、小型的光照培養(yǎng)箱。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗室重要用于

隨時觀測和記錄培養(yǎng)物的細(xì)胞學(xué)和形態(tài)解剖學(xué)的變化，可進(jìn)行顯微觀測、顯微攝

影和普通攝影、組織切片、細(xì)胞染色等工作。室內(nèi)重要應(yīng)有雙筒實(shí)體顯微鏡、普

通或超薄切片機(jī)、磨刀機(jī)、染色缸、烘片器以及照相沖洗設(shè)備。

2.請論述植物原生質(zhì)體的培養(yǎng)方法、操作流程、以及在體細(xì)胞雜交中的應(yīng)用。

植物組織培養(yǎng)的三大難題及解決辦法。

進(jìn)入二十一世紀(jì)以來，植物組織培源技術(shù)發(fā)展迅速，但是仍然存在一些問題，限制了其大規(guī)模應(yīng)

用，主要有以下方面的問題：

1污染現(xiàn)象及對策

在組織培養(yǎng)過程中，如果環(huán)境、培養(yǎng)基或外植體滅菌不徹底'操作過程不規(guī)范等，微生物則會

在培養(yǎng)基中滋生，并使培蕊物的生長受到影響甚至死亡。吳林森在對月季快繁出現(xiàn)的污染物分析，

發(fā)現(xiàn)主要是由腸桿菌屬、槨桿菌'地雷菌、曲客屬、毛零屬、根客屬等細(xì)菌和真菌引起感染。

在組織培養(yǎng)過程中嚴(yán)格的無菌操作是降低污染率的關(guān)鍵，選擇在植物生長旺盛期采用外植體并

進(jìn)行消毒，并在培源基中加入適里抗生素、殺菌劑。研究表明，在培養(yǎng)基中添加廣譜性殺菌劑，實(shí)

立開放式組織培養(yǎng)，簡化了組織培養(yǎng)環(huán)節(jié)，并將污染率控制在1。%以下，能有效的解決雜菌感染的

荷匾。

2幅變現(xiàn)象及對策

外植體在培養(yǎng)過程中切口產(chǎn)生的多酚類物質(zhì)被氧化成褐色的能類物質(zhì)，這就是褐變現(xiàn)象。目前

已在許多植物組織培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)有褐變現(xiàn)象，尤以木本植物組織培養(yǎng)申褐變嚴(yán)重。褐變現(xiàn)象主要發(fā)生

在外植體，外植體的部位不同，取材時期不同，褐變程度亦不同，如油棕用幼嫩器官或組織，胚等

作外植體進(jìn)行培藤，褐變較輕，而用高度分化的葉片作外植體，接種后很容易褐變。

選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w進(jìn)行預(yù)處理之后，選擇適宜的培養(yǎng)基，在黑暗或弱光下進(jìn)行培養(yǎng)，并在培養(yǎng)

基中加入活性磕可以防止細(xì)胞褐變的發(fā)生和發(fā)展；在外植體接種后1~2天既轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上,

使細(xì)胞在褐化之前及時轉(zhuǎn)移可以大大咸輕或避免褐化。

3玻璃化現(xiàn)象及對策

玻璃化指在組織培養(yǎng)過程中，有些植物的嫩莖、葉片往往會呈現(xiàn)半透明狀，水澧狀的現(xiàn)象，又

稱過度水化。坡璃苗的分化能力低下，難以培殖生根成畝，這是一種生理失調(diào)癥。目前已報道出現(xiàn)

玻璃化苗的植物已達(dá)7夠種。隨著坡璃化產(chǎn)生機(jī)理研究的深入，某些植物的玻璃化已得到了有

效的控制。主要措施有：（1）選擇不易玻璃化的基因型及部位做外植體；（2原取改善氧氣供應(yīng)狀況和

通氣條件，控制溫度，適當(dāng)?shù)蜏靥幚?，降低容器?nèi)相對濕度；（3）適當(dāng)提高蔗糠含里，降低培養(yǎng)基中

的水勢；減少細(xì)胞分裂素及生長素等方法均可減少玻璃苗的發(fā)生。

3.原生質(zhì)培養(yǎng)