《分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》期末樣卷標(biāo)準(zhǔn)答案1doc

《分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》期末樣卷標(biāo)準(zhǔn)答案[1]doc溫州醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)《分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》期末考試卷樣卷一標(biāo)準(zhǔn)答案（卷面100分，占總成績(jī)70%）考試日期：2022年6月1日考試時(shí)間：13：30-15：00考試方式：閉卷一．_名詞解釋__（本大題共_10_題，每題_4__分，共__40__分。）.基因組單倍體細(xì)胞中的全套染色體為一個(gè)基因組.蛋白質(zhì)組指由一個(gè)基因組，或一個(gè)細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì).回文結(jié)構(gòu)一種旋轉(zhuǎn)對(duì)稱結(jié)構(gòu)，在軸的兩側(cè)序列相同而反向。短的回文結(jié)構(gòu)可能是一種特別的信號(hào)，如限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)。較長(zhǎng)的回文結(jié)構(gòu)容易轉(zhuǎn)化成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。.肽質(zhì)量指紋圖譜蛋白質(zhì)被識(shí)別特異酶切位點(diǎn)的蛋白酶水解后得到的肽片段的質(zhì)量圖譜。由于每種蛋白的氨基酸序列（一級(jí)結(jié)構(gòu)）都不同，當(dāng)?shù)鞍妆凰夂?，產(chǎn)生的肽片段序列也各不相同，因此其肽質(zhì)量指紋圖也具有特征性.生物芯片指將大量探針?lè)肿庸潭ㄓ谥С治锷虾笈c標(biāo)記的樣品分子進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)每個(gè)探針?lè)肿拥碾s交信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。.分子生物學(xué)從分子水平研究生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能從而闡明生命現(xiàn)象本質(zhì)的科學(xué)。其主要研究領(lǐng)域包括蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-核酸和蛋白質(zhì)-脂質(zhì)（即生物膜）。.PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraeChainReaction），簡(jiǎn)稱PCR,是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段。可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。口8.BLAST是一個(gè)用來(lái)比對(duì)生物序列的一級(jí)結(jié)構(gòu)的算法。.ddNTP雙脫氧核苷三磷酸，與dNTP的區(qū)別在于脫氧核糖的C3位置缺少-OH，ddNTP可以在聚合酶的作用下可與多核苷酸鏈的3'一OH之間形成磷酸二酯鍵，但不能與下一個(gè)核苷酸縮合，使多核苷酸鏈的延伸終止。.基因病遺傳物質(zhì)（基因）發(fā)生改變導(dǎo)致的疾病二．___簡(jiǎn)答題__（本大題共_6_題，每題_8_分，共__48__分。）.試述真核生物基因組特點(diǎn)；答：（1）真核生物基因組DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合形成染色體，儲(chǔ)存于細(xì)胞核內(nèi)，除配子細(xì)胞外，體細(xì)胞內(nèi)的基因的基因組是雙份的，即有兩份同源的基因組。（2）真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順?lè)醋?。一個(gè)結(jié)構(gòu)基因經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯生成一個(gè)mRNA分子和一條多肽鏈。（3）存在重復(fù)序列，重復(fù)次數(shù)可達(dá)百萬(wàn)次以上。（4）基因組中不編碼的區(qū)域多于編碼區(qū)域。（5）大部分基因含有內(nèi)含子，因此，基因是不連續(xù)的。9（6）基因組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于原核生物的基因組，3某10。（錯(cuò)一點(diǎn)扣1.5分）.試述重組子結(jié)構(gòu)特征的篩選的方法；答：（1）重組子大小鑒別篩選：獲得外源DNA后，分子量較原來(lái)載體大得多，可利用限制性核酸內(nèi)切酶法鑒別。（2）直接酶切鑒定：結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳（3）PCR篩選法：提取重組子DNA，以外源基因兩端的互補(bǔ)序列為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增外源口DNA.（4）核酸雜交技術(shù)篩選：將DNA的克隆片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素薄膜上，應(yīng)用特異的核酸探針進(jìn)行原位雜交檢測(cè)。（每點(diǎn)2分）.試述酵母雙雜交技術(shù)原理；答、酵母的細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)蛋白間相互作用的遺傳系統(tǒng)將兩個(gè)待測(cè)蛋白分別與這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域建成融合蛋白，并共表達(dá)于同一個(gè)酵母細(xì)胞內(nèi)。如果兩個(gè)待測(cè)蛋白間能發(fā)生相互作用，就會(huì)通過(guò)待測(cè)蛋白的橋梁作用使AD與BD形成一個(gè)完整的轉(zhuǎn)錄激活因子并激活相應(yīng)的報(bào)告基因表達(dá)。通過(guò)對(duì)報(bào)告基因表型的測(cè)定可以很容易地知道待測(cè)蛋白分子間是否發(fā)生了相互作用。（4分）4.試述TaqMan技術(shù)原理；口答、（1）Taqman技術(shù)主要用于熒光定量PCR法，TaqMan探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。（2分）（2）探針設(shè)計(jì)為與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì)，帶有一個(gè)熒光發(fā)光分子和一個(gè)熒光淬滅分子。熒光基團(tuán)連接在探針的5’端，而淬滅劑則在3’末端。（2分）（3）當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)，聚合酶的5'3'得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離，從而在激光下產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的熒光，這種熒光隨著PCR擴(kuò)增過(guò)程呈動(dòng)態(tài)增強(qiáng)。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來(lái)的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。（4分）.簡(jiǎn)述自動(dòng)核酸序列分析和DHPLC分析在臨床檢測(cè)的不同應(yīng)用價(jià)值；口答、基于Sanger雙脫氧鏈終止法的原理（1分），采用4種帶有不同琥珀酰熒光素標(biāo)記的終止物ddNTP，可以在同一個(gè)反應(yīng)管中進(jìn)行末端終止測(cè)序反應(yīng)，并于變性聚丙烯酰胺凝膠的同一泳道中進(jìn)行電泳檢測(cè)，從而降低了測(cè)序泳道間遷移率差異對(duì)精確性的影響。（4分）對(duì)DNA序列的識(shí)讀也在電泳過(guò)程中完成，即當(dāng)帶有某種熒光素標(biāo)記的單鏈DNA片段電泳到激光探頭的檢測(cè)范圍時(shí)，激光所激發(fā)的熒光信號(hào)被探測(cè)器接收，經(jīng)計(jì)算機(jī)分析數(shù)據(jù)，于記錄紙上以紅、黑、藍(lán)和綠四種顏色打印出帶有不同熒光素染料標(biāo)記終止物ddNTP標(biāo)示的DNA片段峰譜，繼而自動(dòng)排出DNA序列。（3分）口.試述三大核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)；答：國(guó)際核苷酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)：（1）EMBLBank（英國(guó)）：歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室（EuropeanMolecularBiologyLaboratory）核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)，為歐洲最主要的核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)，世界兩大核酸數(shù)據(jù)庫(kù)之一。目前此數(shù)據(jù)庫(kù)由其分支機(jī)構(gòu)一EBI（theEuropeanBioinformaticIntitute，歐洲生物情報(bào)研究所）維護(hù)。（2）GenBank（美國(guó)）：美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)情報(bào)中心（NCBI，NationalCenterforBiotechnologyInformation）基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)。美國(guó)最主要的核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)，世界兩大核酸數(shù)據(jù)庫(kù)之一。DNADataBankofJapan（日本）：DNAdatabaeofJapan（Mihima）,位于日本的核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)，為亞洲主要的核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)國(guó)家遺傳研究所。（錯(cuò)一點(diǎn)扣3分）三．___問(wèn)答題__（本大題共__1__題，共__12__分。）兩個(gè)片段，它們與人類皰疹病毒（HHV）高度同源，卻不同于已知的七類HHV病毒中的任何一類，被命名為HHV-8。請(qǐng)據(jù)此設(shè)計(jì)分離HHV-8的實(shí)驗(yàn)方法，并對(duì)其進(jìn)行鑒定或診斷。答：從AIDS患者的Kapoi肉瘤細(xì)胞中分離出總DNA分