實(shí)驗(yàn)七人體性染色質(zhì)體的觀察課件

實(shí)驗(yàn)七人體性染色質(zhì)小體的觀察2009年11月一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆杖梭w性染色質(zhì)的檢測(cè)方法；觀察人體性染色質(zhì)的形態(tài)特征及存在部位；為進(jìn)一步研究人體染色體的畸變與疾病提供參考條件；了解雌性哺乳動(dòng)物X染色體失活假說(shuō)和劑量補(bǔ)償效應(yīng)的機(jī)制。1949年M.L.Barr等研究發(fā)現(xiàn)雌貓神經(jīng)細(xì)胞核膜內(nèi)凝縮的深染小體[性染色質(zhì)體(sex-chromatinbody)或巴氏小體(Barrbody)]，而雄性個(gè)體細(xì)胞中則沒有。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)：所有哺乳類雌體細(xì)胞中都可以見到這一結(jié)構(gòu)。二、實(shí)驗(yàn)原理Barr小體的數(shù)目=n-1（n為X染色體數(shù)目）正常女人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為1；正常男人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為0；XXX女人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為2；XXXX女人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為3。為什么正常男女之間的X染色質(zhì)存在差異？為什么女性兩個(gè)X染色體上的每個(gè)基因座的兩個(gè)等位基因所形成的產(chǎn)物，不比只有一個(gè)X染色體半合子男性的相應(yīng)基因產(chǎn)物多？為什么某一X連鎖的突變基因在純合子女性的病情并不比半合子的男性嚴(yán)重？

定義：具有兩份或兩份以上的基因量的個(gè)體與只有一份基因量的個(gè)體的基因表達(dá)趨于一致的遺傳效應(yīng)。

舉例：雌性哺乳動(dòng)物一條X染色體異染色質(zhì)化（失活），只有一條X染色體具有活性，使雌雄動(dòng)物雖然X染色體數(shù)目不同但基因產(chǎn)物的劑量是平衡的。

補(bǔ)償方式

劑量補(bǔ)償效應(yīng)

（dosagecompensationeffect）哺乳動(dòng)物

X染色體隨機(jī)失活或父源X染色體失活有袋動(dòng)物

父源X染色體失活黑腹果蠅

雄性個(gè)體X染色體基因表達(dá)水平加倍秀麗線蟲

雌性個(gè)體兩條X染色體基因表達(dá)水平減半染色質(zhì)常染色質(zhì)：折疊程度低，處于伸展?fàn)顟B(tài)，染色時(shí)著色淺。DNA主要是單一序列和中度重復(fù)序列。處于常染色質(zhì)狀態(tài)是基因轉(zhuǎn)錄的必要條件。異染色質(zhì)折疊程度高，處于凝縮狀態(tài)，染色時(shí)著深。組成型異染色質(zhì)：除復(fù)制期外，均處于凝縮狀態(tài)，處于中期染色體的著絲粒區(qū)、端粒、次縊痕等節(jié)段。具有明顯的遺傳惰性，不轉(zhuǎn)錄也不編碼蛋白。兼性異染色質(zhì)：指某些細(xì)胞或某一發(fā)育階段，原來(lái)的常染色質(zhì)凝縮失去基因轉(zhuǎn)錄活性而成。雌性哺乳動(dòng)物一條X染色體異染色質(zhì)化，在上皮細(xì)胞中形成巴氏小體、在多核白細(xì)胞中形成“鼓槌”。內(nèi)容：

①巴氏小體是一條失活的X染色體；哺乳動(dòng)物雌性個(gè)體兩條X染色體的其中一條在受精后失活；②兩條X染色體中哪一條失活是隨機(jī)的；在同一哺乳動(dòng)物的體細(xì)胞中，有些父源X染色體失活，有些為母源失活。③失活在胚胎早期發(fā)生(人類在胚胎發(fā)育16天時(shí))，失活的X染色體在以后分裂中不會(huì)復(fù)活；當(dāng)生殖細(xì)胞形成時(shí)，失活的染色體可恢復(fù)。

④雜合體雌性在伴性基因的作用上是嵌合體。證據(jù)：1）玳瑁貓毛皮上的黑色和黃色班塊——XOXo2）人類葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定GdA/GdBX-染色質(zhì)的形態(tài)特征及所在部位：X-染色質(zhì)的形態(tài)表現(xiàn)為一結(jié)構(gòu)致密的濃染小體；輪廓清楚；大小1～1.5μm；常附著于核膜邊緣或靠近內(nèi)側(cè)；形狀為凸形、三角形、卵形、短棒及雙球形等。正常女性口腔黏膜細(xì)胞中出現(xiàn)率：30～50%。巴氏小體1、器材：

顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、牙簽、解剖針等。2、試劑：改良苯酚品紅、60%醋酸、45%冰醋酸、95%乙醇3、實(shí)驗(yàn)材料：

女生口腔黏膜細(xì)胞（男生為對(duì)照）；女生毛囊細(xì)胞（男生為對(duì)照）三、實(shí)驗(yàn)用品1、口腔頰部粘膜細(xì)胞巴氏小體觀察（1）取干凈載玻片，用記號(hào)筆在將涂細(xì)胞的一面右上角做好標(biāo)記；（2）嗽口（三次），盡可能除去口中雜物；（3）用牙簽刮取頰部粘膜上皮細(xì)胞，棄第一次刮取物，在同一部位繼續(xù)刮??；（4）將刮得的細(xì)胞涂在干凈載玻片上，反復(fù)幾次，使玻片上的材料盡可能多些（每人做2張，1張女生的，1張男生的）；（5）空氣中干燥；（6）涂片區(qū)滴上100μl的60%冰醋酸固定5分鐘；（7）吸去冰醋酸，滴20μl改良苯酚品紅染色2分鐘；（8）壓片；（9）鏡檢。

四、實(shí)驗(yàn)操作X-染色質(zhì)的辨認(rèn)：

低倍鏡下檢出典型的可數(shù)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)：①核質(zhì)是網(wǎng)狀或細(xì)顆粒狀分布；②核膜清晰、核無(wú)缺損；③染色適度；④周圍無(wú)雜菌。在高倍鏡或油鏡下進(jìn)一步觀察。

注意：在女性間期細(xì)胞核內(nèi)側(cè)靠近核膜處有約1微米大小的反光極強(qiáng)的顆粒狀亮點(diǎn)，即為巴氏小體。材料不同，觀察結(jié)果可能有不同，且必須和核仁區(qū)別開來(lái)（核仁往往離核膜較遠(yuǎn)或接近核中央部位）。刮口腔上皮細(xì)胞前要漱口；涂片略干再加改良苯酚口紅；染色時(shí)間不要太長(zhǎng)，否則核質(zhì)著色深，X染色質(zhì)體不易區(qū)分；毛囊細(xì)胞要充分解離，壓片前可先用解剖針敲片，使細(xì)胞解離。五、注意事項(xiàng)分別觀察男女各50個(gè)可數(shù)細(xì)胞，計(jì)算顯示X染色質(zhì)所占百分比。（正常女性口腔粘膜細(xì)胞中約30～50%有一個(gè)巴氏小體，男性則低于1～2%。）觀察中選繪4～5個(gè)典型細(xì)胞，示明X染色質(zhì)體的形成和部位。正常男人的染色體組成是44+XY，而正常女人的染色體組成是44+XX，請(qǐng)按要求填寫下列表格：六、作業(yè)（實(shí)驗(yàn)結(jié)果）1、什么是劑量補(bǔ)償效應(yīng)？2、為什么巴氏小體一般出現(xiàn)在核膜邊緣？3、巴氏小體在人類遺傳學(xué)工作中有什么用途？七、思考題固體廢棄物丟到水槽旁的廢物桶中！每組同學(xué)：請(qǐng)?jiān)趯?shí)驗(yàn)后用擦鏡紙把鏡頭擦凈；如使用高倍鏡，則立即用擦鏡紙蘸二甲苯將鏡頭和載玻片擦凈，以免污染鏡頭。登記顯微鏡使用記錄本，到助教處登記實(shí)驗(yàn)記錄。把桌面整理好，最后經(jīng)助教檢查桌面后方可離