暨南大學(xué)色譜08其次次

本文格式為Word版，下載可任意編輯——暨南大學(xué)色譜08其次次2023/9級(jí)《色譜分析》其次次作業(yè)

一、選擇題

1．衡量色譜柱柱效性能的指標(biāo)是（C）A．分開度B．容量因子C．塔板數(shù)D．分派系數(shù)

2．在液相色譜中，范氏方程中的哪一項(xiàng)對(duì)色譜柱效能的影響可以忽略不計(jì)？（B）A．渦流擴(kuò)散項(xiàng)B．分子擴(kuò)散項(xiàng)C．滾動(dòng)區(qū)域的滾動(dòng)項(xiàng)傳質(zhì)阻抗D．中止區(qū)域的滾動(dòng)項(xiàng)傳質(zhì)阻抗

3．在正相色譜法中，如增加滾動(dòng)相極性，則（Ａ）A．樣品的k降低，tR降低B．k增加，tR增加C．相鄰組分的α增加D．對(duì)α基本無影響

4．用色譜法進(jìn)行定量分析中，要求混合物每一個(gè)組分都出峰的是（Ａ）A．歸一化法B．外標(biāo)法C．內(nèi)標(biāo)法D．內(nèi)加法

5．對(duì)于正相液相色譜法，不能用作滾動(dòng)相的溶劑是（Ｄ）A．氯仿B．乙醚C．正已烷D．水

6．內(nèi)標(biāo)法定量的優(yōu)點(diǎn)是（Ｂ）A．不需要校正因子B．對(duì)進(jìn)樣量要求不嚴(yán)格C．樣品配制簡(jiǎn)單D．內(nèi)標(biāo)物易得

7．液相色譜中通用型檢測(cè)器是（Ｃ）A．紫外吸收檢測(cè)器B．熒光檢測(cè)器C．示差折光檢測(cè)器D．熱導(dǎo)池檢測(cè)器

8．以HPLC法測(cè)定復(fù)方藥物中的微量成分，宜采用的定量方法是（Ｂ）A．歸一化法B．內(nèi)標(biāo)法C．外標(biāo)工作曲線法D．外標(biāo)一點(diǎn)法

9．采用ODS柱分析有機(jī)弱堿混合物樣品，當(dāng)以某比例的乙腈-水為滾動(dòng)相時(shí)，樣品的容量

因子較小，若想使容量因子適當(dāng)增加，應(yīng)如何調(diào)整滾動(dòng)相的組成？（Ｄ）A．增加滾動(dòng)相中乙腈的比例B．減小滾動(dòng)相中水的比例C．在滾動(dòng)相中參與少量醋酸D．在滾動(dòng)相中參與少量氨水

二、問答題

1．Martin和Synge在二十世紀(jì)四十年代所提出的色譜領(lǐng)域兩個(gè)遠(yuǎn)見有何重要意義？答：他們的宏偉之處在于提出的兩個(gè)遠(yuǎn)見：

（１）滾動(dòng)相可以用氣體代替液體以獲得更高效分開

（２）在液相色譜中，使用小粒徑填料以及高壓傳輸可以獲得最小的理論塔板高度Ｈ。第一個(gè)遠(yuǎn)見導(dǎo)致了氣相色譜法的誕生，其次個(gè)遠(yuǎn)見則促進(jìn)了高效液相色譜的誕生。

2．高效液相色譜與氣相色譜在滾動(dòng)相上有何區(qū)別？

答：ＧＣ：滾動(dòng)相為惰性氣體，組分與滾動(dòng)相無親和力。

ＨＰＬＣ：滾動(dòng)相為液體，滾動(dòng)相與組分間具親和力，這為提高柱選擇性、改善分開增

加了因素，且滾動(dòng)相種類較多，選擇余地廣；滾動(dòng)相極性和ｐＨ值選擇對(duì)分開起重要作用，選不同比例兩種以上液體作為滾動(dòng)相可以增大選擇性。3．HPLC與GC中影響分開R的因素有何不同？答：ＧＣ：柱選擇項(xiàng)主要受固定相影響（分開關(guān)鍵）柱容量項(xiàng)主要受柱溫影響。

ＨＰＬＣ：柱選擇項(xiàng)主要受滾動(dòng)相性質(zhì)影響（分開關(guān)鍵）

分開相種類確定后，柱容量項(xiàng)主要受滾動(dòng)相配比（洗脫能力）的影響

4．寫卓越譜分開方程，結(jié)合該方程談?wù)勅绾翁岣吒咝б合嗌V的分開度？答：R?14N??1?k1?k

H?A?C?u，ｎ：采用粒度小、填充均勻的固定相

采用粘度小、低流速的滾動(dòng)相

??K2K1Ws?k2k1?tR'2tR'1?VR'2VR'1，?：調(diào)整滾動(dòng)相種類、極性和ｐＨ值（受柱溫度影響?。?/p>

tR't0k?Wm?CsVsCmVm?K?VsVm?，ｋ：調(diào)整滾動(dòng)相和固定相配比（受柱溫影響?。?/p>

5．試解釋以下名詞：

ODS柱；化學(xué)鍵合相；封尾鍵合相；鍵合相色譜；檢測(cè)限；溶劑梯度洗脫答：

ODS柱：十八烷基硅烷載體表面的硅醇基鍵合，構(gòu)成十八烷基硅烷鍵合光相?；瘜W(xué)鍵合相：通過化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面而構(gòu)成的固定相。

封尾鍵合相：用化學(xué)反應(yīng)的方式將鍵合相的載體表面剩余的硅醇基除去，這種鍵合相稱封尾鍵合相。

鍵合相色譜：以化學(xué)鍵合相為固定相的液相色譜分析法。

最重要、應(yīng)用最廣泛的高效液相色譜法，目前已經(jīng)完全取代了液液分派色譜法，與液液分派色譜相比，ｋ的影響因素相像。

檢測(cè)限：又叫敏感度，是響應(yīng)值恰為２倍噪音時(shí)所需要的樣品。敏感度同時(shí)考慮了檢測(cè)器的噪音和靈敏度，是儀器整體性能的綜合量度。溶劑梯度洗脫：滾動(dòng)相的溶劑強(qiáng)度變化的洗脫方式；滾動(dòng)相的溶劑強(qiáng)度和組成變化影響組分的保存和選擇性。

6．封尾鍵合相具有什么特點(diǎn)？鍵合相進(jìn)行封尾處理的目的是什么？答：封尾鍵合相具有的特點(diǎn)：僅有分派作用，無吸附作用穩(wěn)定性好，并具有強(qiáng)疏水性。

鍵合相進(jìn)行封尾處理的目的是：防止剩余硅羥基對(duì)極性物質(zhì)產(chǎn)生過分吸附而改變鍵合相分開性能，鍵合反應(yīng)后用小分子烷化劑進(jìn)行封尾處理以消除剩余硅羥基，提高鍵合相穩(wěn)定性和色譜分開重復(fù)性。

7．采用HPLC對(duì)一組鄰苯二甲酸酯類化合物進(jìn)行分析，采用滾動(dòng)相為四氫呋喃:異辛烷(5%:95%,V/V)，得到色譜圖如下：

A.Dibutylphthalate鄰苯二甲酸二丁酯B.Dimethylphthalate鄰苯二甲酸二甲酯C.dinonylphthalate鄰苯二甲酸二壬酯D.diethylphthalate鄰苯二甲酸二乙酯

試回復(fù)以下問題

（１）預(yù)計(jì)該組鄰苯二甲酸酯類化合物在正相高效液相色譜柱上的洗脫順序？答：Ｃ－＞Ａ－＞Ｄ－＞Ｂ

（2）假使?jié)L動(dòng)相換成甲苯：異辛烷(5%:95%,V/V)，請(qǐng)預(yù)計(jì)色譜圖的變化狀況答：整體洗脫能力差，保存時(shí)間增加。

8．試推測(cè)以下每組化合物在RP-BPC上的洗脫順序：（1）

COOHCH3OHABCD

（2）

(CH2)4

COOHCOOHCH2COOH(CH2)2COOH(CH2)3CH3CH3CH3CH3GHEF

答：

（１）Ｂ－＞Ｄ－＞Ｃ－＞Ａ（２）Ｂ－＞Ｃ－＞Ｄ－＞Ａ

9．IPC，ISC和IEC中參與pH一定的緩沖溶液的作用有何不同？IPC參與pH一定緩沖液的作用是

對(duì)于較弱酸堿,調(diào)理pH值改善離子化程度,以改變保存值與分開選擇性,,控制在pH值在2-7以保證鍵合相穩(wěn)定.

ISC參與pH一定緩沖液的作用是

分析弱酸樣品,滾動(dòng)相參與少量弱酸,分析弱堿性樣,滾動(dòng)相參與少量弱酸,來抑制樣品的解離.增加保存時(shí)間和k

IEC參與pH一定緩沖液的作用是

pH值降,弱電解質(zhì)離解減少,使溶質(zhì)的離解被抑制,使保存時(shí)間降少,Ks降低

10．空間排阻色譜法的英文縮寫是什么？簡(jiǎn)述其分開原理以及洗脫順序?答：空間排阻色譜法的英文縮寫是ＳＥＣ。其分開原理：利用凝膠的孔徑與被分開組分分子線團(tuán)尺寸相對(duì)大小關(guān)系而對(duì)高分子溶液進(jìn)行分開分析，分開過程類似于分子篩：留下小的，排出大的。

洗脫順序：洗脫順序取決于分子線團(tuán)尺寸；大粒徑的分子先洗脫下來，由于難以進(jìn)入凝膠孔隙中，所以路徑最短，保存時(shí)間最短，ｋ最小。

11．什么叫做凝膠的滲透極限？什么叫做凝膠的排阻極限？什么叫做凝膠的選擇性滲透？答：

1)當(dāng)凝膠的孔穴都能全部接受樣品分子時(shí)（分子量大），[Xs]?[Xm],Kp?1：凝膠的＂

滲透極限＂－全滲透，VR?VO?VS?VT最大

2)當(dāng)凝膠的孔穴都不能接受樣品分子時(shí)（分子量小），Xs?0,Kp?0；凝膠的＂排阻極

限＂－全排斥，VR?V0最小

3)不同尺寸的分子的Kp在0~1之間：凝膠的＂選擇性滲透＂，VR?V0~V0?VS

12．簡(jiǎn)述UVD，RID，F(xiàn)D，ELSD，ECD，MSD等高效液相色譜檢測(cè)器的主要特點(diǎn)。答：ＵＶＤ：不破壞樣品，與其它檢測(cè)器串聯(lián)，可用于制備樣品受流速和溫度變化影響小，適于梯度洗脫

滾動(dòng)相的截止波長(zhǎng)必需小于樣品的檢測(cè)波長(zhǎng)（缺點(diǎn)）選擇性檢測(cè)器

可直接用于定量分析的濃度型檢測(cè)器

ＤＲＩＤ：受溫度、壓力、滾動(dòng)相組成影響很大，不適于梯度流脫通用性檢測(cè)器

可進(jìn)行定量分析的濃度型檢測(cè)器

ＦＤ：與ＵＶＤ相比：有極高的靈敏度和良好的選擇性，最靈敏的ＨＰＬＣ檢測(cè)器，特別適于痕量分析。

是可直接用于定量分析的濃度檢測(cè)器ＥＬＳＤ：通用性的質(zhì)量型檢測(cè)器ＥＣＤ：選擇性的檢測(cè)器

可進(jìn)行定量分析的濃度型檢測(cè)器

ＭＳＤ：軟電離：產(chǎn)生準(zhǔn)分子離子，易確定分子量碰撞誘導(dǎo)解離：多級(jí)質(zhì)譜提供豐富結(jié)構(gòu)信息

LC-MS接口技術(shù)是解決離子化問題的關(guān)鍵通用性、濃用性以及質(zhì)量型檢測(cè)器

13．為何說檢測(cè)限是衡量檢測(cè)器性能的重要指標(biāo)？

答：敏感度又叫檢測(cè)限，是響應(yīng)值恰為２倍噪音時(shí)所需要的樣品。

敏感度同時(shí)考慮了檢測(cè)器的噪音和靈敏度，是儀器整體性能的綜合量度敏感度全面反映了檢測(cè)器的質(zhì)量，是衡量檢測(cè)器性能的重要指針?biāo)粌H取決檢測(cè)器性能，還與色譜操作條件、儀器的穩(wěn)定性有關(guān)

14．在高效液相色譜分開中，為何有時(shí)需要進(jìn)行溶劑梯度洗脫？答：

擅長(zhǎng)分開寬ｋ值范圍的繁雜混合物，且分析時(shí)間短改善分開，提高靈敏度，提高檢測(cè)性能可以降低難洗脫溶質(zhì)對(duì)色譜柱的污染但簡(jiǎn)單引起基線漂移，不太適合定量。

15．簡(jiǎn)述薄層色譜的基本操作程序？答：

1)展出容器的準(zhǔn)備

2)薄層板的準(zhǔn)備：包括薄層板的古鋪制、自然枯燥以及活化3)點(diǎn)樣

4)薄屠板的溶劑預(yù)平衡和展開5)定性（定性）／洗脫（半定量）

三、計(jì)算題1．在一根3m長(zhǎng)的色譜柱上分開一個(gè)混合試樣，組分1和2的保存時(shí)間分別為12分鐘和17分鐘，滾動(dòng)相保存時(shí)間為1分鐘，組分2的峰底寬亦為1分鐘。（1）求兩組分的調(diào)整保存時(shí)間。

（2）用組分2求有效塔板數(shù)及有效塔板高度（3）求兩組分的容量因子（4）求相對(duì)保存值（5）求分開度

（6）若使兩組分剛好完全分開，柱子至少多長(zhǎng)？答:

（１）求兩組分的調(diào)整保存時(shí)間。

'tR1?tR1?to?12?1?11min'tR2?tR2?to?17?1?16min

（２）用組分2求有效塔板數(shù)及有效塔板高度

neff?16?(H?Lneff?tR2W3')2?16?(161)2?4096

4096?0.00073m

（３）求兩組分的容量因子

由tR1?t0(1?k1)得k1?tR1totR2to?1?121171?1?11

k2??1??1?16

（４）求相對(duì)保存值

α?k2k1?1611?1.455

（５）求分開度

n40961.455?116???1??k2???R??????4.709?????4?1?k41.4551?16???2?

（６）若使兩組分剛好完全分開，柱子至少多長(zhǎng)？若要使兩組分剛好完全分開,則R=1.5

L/H1.5?L?0.3m4???1??k2??????????1?k2?????L/0.000734?1.455?11.455?161?16

2．Glajch三角形法則相關(guān)計(jì)算：

（1）正相色譜10%CHCL3/己烷二元溶劑體系中氯仿分開效果不好，試選擇等溶劑強(qiáng)度的新的溶劑系統(tǒng)并計(jì)算其組成？

SolventP’hexane0.1ether2.8dichloromethane3.1chloroform4.1

答:

由題意得,

φdichlormethane?φchlorform?PchlorformPdichloromethane'?10%*4.13.1?0.132

即新的二元系統(tǒng)是13.2%二氯甲烷/己烷

（2）反相色譜的三角形等洗脫面一點(diǎn)滾動(dòng)相組成為70%的甲醇/水，試根據(jù)Glajch三角形法則計(jì)算三角形中其它各點(diǎn)滾動(dòng)相的組成。SolventSwatermethanolacetonitriletetrahydrofuron答:

由題意得,

φφ?φ?SmetholStetrahydro'furan'acetonitrile03.03.24.5?φmethol?SmetholSacetonitrile'?70%*33.2?0.656

tetrahydrofuranmethol?70%*34.5?0.4671.70%甲醇/水2.65.6%乙腈/水3.46.7%四氫呋喃/水4.0.35甲醇:0.33乙腈5.0.33乙腈:0.23四氫呋喃6.0.33甲醇:0.23四氫呋喃

7.0.23甲醇:0.22乙腈:0.15四氫呋喃8.0.47甲醇:0.10乙腈:0.075四氫呋喃9.0.11甲醇:0.44乙腈:0.075四氫呋喃10.0.11甲醇:0.10乙腈:0.31四氫呋喃

3．用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定復(fù)方APC片劑中三組分的含量對(duì)照品溶液的配制：確鑿稱取阿司匹林、非那西丁、咖啡因及內(nèi)標(biāo)物撲熱息痛的標(biāo)準(zhǔn)品各0.220，0.150，0.035和0.035g，分置100mL容量瓶中，用乙醇-氯仿（1：1）溶解，定容。

樣品溶液的配制：取10片研成細(xì)粉，確鑿稱取約一片量0.5005g，用上述溶劑屢屢萃取轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，加內(nèi)標(biāo)物撲熱息痛的標(biāo)準(zhǔn)品0.035g溶解，定容。

每個(gè)供試品溶液進(jìn)樣三次，每次2μL。對(duì)照液進(jìn)樣結(jié)果如下：A，S，P，C的峰面積平均值分別為154856，171222，692272和372221面積單位；樣品溶液進(jìn)樣結(jié)果如下：A，S，P，C的峰面積平均值分別為178024，202694，820968和407792面積單位。

（１）試用內(nèi)標(biāo)對(duì)比法求A，P和C的百分含量、標(biāo)示量%及每片中絕對(duì)含量；答：

A(%)?(AA/AS)樣品(A?mAA/AS)對(duì)照品m?178024/202694154856/171222?0.2200.5005?100%?42.68%P(%)?(AP/AS)樣品?mP?820968/202694?0.150(A?100%?30.02%P/AS)對(duì)照品m692272