基因擴(kuò)增試驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控SOP

本文格式為Word版，下載可任意編輯——基因擴(kuò)增試驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控SOP****醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件試驗(yàn)室操作規(guī)程文件編號：版本：生效日期：臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序第1頁共8頁

室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP-22)

1目的：了解并控制試驗(yàn)室檢測的縝密度的變化

2適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光定量檢測，使用Line-Gene基因擴(kuò)增儀試驗(yàn)室3操作人：****4操作：

4.1自制室內(nèi)質(zhì)控品：

a)自制室內(nèi)質(zhì)控品來自臨床收集的已知HBV陽性血清大約（1×10拷貝），

每收到一份凍存于-20℃。收集到約35ml時，取出樣品，置室溫復(fù)融。將各管倒入無菌帶蓋的小三角燒瓶中充分混勻。

b)將以上的混合血清，以每管120ul，分裝于0.5ml離心管內(nèi)，分裝若干

管。剩余血清根據(jù)廢物處理及生物防護(hù)操作程序處理。

c)將上述取約23管裝一小袋，其余20管裝一小袋。共分成若干小代。23

管一小袋置于-20℃冰箱，其余置于-70℃超低溫冰箱保存，用完一小袋，就從-70℃轉(zhuǎn)移1小袋到-20℃冰箱備用。

4.2基線測定及計算RCV：

在準(zhǔn)備開展質(zhì)控工作當(dāng)月的第一天取上述23管中的三管復(fù)溶，隨病人標(biāo)本一起測定，其次天取兩管復(fù)溶，隨病人標(biāo)本一起測定，以后每天隨病人標(biāo)本測定一管，20

_

天后計算各項目的測定結(jié)果的x

4-6

、s、cv此處的cv即Rcv。

(?x)2ncv?RCV的計算公式：

?xx?n_其中x為

s??(x?x)n?12s??x2?n?1s100%xRCV測定中所得23份結(jié)果的均值。Σ表示總和。

n表示結(jié)果的份數(shù),n-1為自由度。4.3繪制RCV圖a)

______

計算x+2S、2S、x+3S、3S并在質(zhì)控圖的縱坐標(biāo)上標(biāo)出x、x-x-x±2S、

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_

x±3S

的位置，并將其具體值標(biāo)在左側(cè)標(biāo)尺上。

_

線，用藍(lán)筆畫出x±3S

_

b)用紅線筆畫出x±2S

線，即成一張“空圖〞。

還應(yīng)填齊圖紙上方的各項，如：試驗(yàn)項目、質(zhì)控品來源及批號、起止日期、主要儀器等，還應(yīng)填上RCV中測定所得的X、S、CV，測定過程中的特別狀況，（附圖2）。4.4室內(nèi)質(zhì)控：

a)根據(jù)上述質(zhì)控圖，取一小袋上述血清作下月及以后的質(zhì)控，每次試驗(yàn)時隨病標(biāo)本測定一管。

b)在圖紙下方“日期〞的上一行相應(yīng)的日期欄內(nèi)將“測定值〞按原始記錄填入，邊填寫邊核對。注意數(shù)據(jù)順序應(yīng)嚴(yán)格依照實(shí)際操狀況，不得顛倒。未做測定的天數(shù)在圖上留出空格，由于這樣可以真實(shí)反應(yīng)狀況，便于分析誤差原因。

c)畫出每個檢測值所對應(yīng)的圖點(diǎn)。4.5室內(nèi)質(zhì)控圖的使用方法：4.5.1描點(diǎn)a)

_

圖中x線為靶線

_

x±2s

_

為警告線，x±3s

，

為失控線。

對于同一批號的質(zhì)控血清不管使用幾個月，其質(zhì)控圖均不變化。只要將圖紙上方的“起止日期〞項填入每個月的實(shí)際起止日期即可。

b)每天將該批號質(zhì)控血清按有關(guān)規(guī)定程序復(fù)融隨行病人的標(biāo)本同時檢測。將“日期〞、“測定值〞和“操〞如實(shí)記錄在圖下方的相應(yīng)位置，并按前面的方法畫出圖上的對應(yīng)點(diǎn)，用直線將該點(diǎn)與前一天的點(diǎn)連接起來。c)

_月底計算當(dāng)月全部質(zhì)控血清檢測結(jié)果的x

、s、cv，并進(jìn)行圖形分析和

小結(jié)，將質(zhì)量控制圖存入質(zhì)控資料檔案。4.5.2圖形分析：

失控的判斷標(biāo)準(zhǔn)：將質(zhì)控品隨日常標(biāo)本共同處理并將質(zhì)控品結(jié)果如實(shí)記錄做好的RCV圖中描點(diǎn)。

_

a)若結(jié)果在x±2S_

b)若結(jié)果在x±2S

線內(nèi)，報告可發(fā)出。

_

線外和x±3S

線以內(nèi)或出現(xiàn)連續(xù)6點(diǎn)以上在一側(cè)等規(guī)律變

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化，應(yīng)向有關(guān)負(fù)責(zé)人反映并積極尋覓原因，但當(dāng)天檢測結(jié)果可以發(fā)出。d)

_

若結(jié)果在x+3S

線以外，則為失控，應(yīng)馬上報告有關(guān)負(fù)責(zé)人訊速查找原因.

e)并將失控狀況、必要時復(fù)測標(biāo)本，然后方可發(fā)報告。并將失控狀況、查找過程及處理結(jié)果等詳細(xì)記錄登記。

4.5.3通過觀測圖形的規(guī)律變化進(jìn)行誤差分析，消除誤差來源

a)曲線漂移：提醒有系統(tǒng)誤差，確鑿度發(fā)生了一次性的向上或向下改變。這

種變化往往是由一個新的狀況引起的。如更換不同批號的試劑，啟用新批號的質(zhì)控血清、操作規(guī)程人員的變換等。在找原因時應(yīng)重點(diǎn)注意“漂移〞前的發(fā)生了哪些變動性的因素。

b)趨勢性的變化：向下或向上的趨勢說明確鑿度發(fā)生了漸漸的變化。這種變

化往往是由于一個逐漸改變的因素造成的。如質(zhì)控血清的降解，試劑效價的降低等。

c)連續(xù)多點(diǎn)分布在靶值同一則：目前，一般認(rèn)為質(zhì)控血清的檢測結(jié)果連續(xù)6

天以上出現(xiàn)在靶值同一則，則應(yīng)迅速查找原因，爭取盡快使之回復(fù)圍繞在靶值隨機(jī)分布的狀態(tài)。由于依照統(tǒng)計學(xué)的原理，由純隨機(jī)誤差狀況造成的這種可能性很小。連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一則的可能性小于1.5%.因此凡出現(xiàn)連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一則者均可能性存在非隨機(jī)誤差因素。假使與靶值偏離不大，不會給臨床使用帶來太大影響時，一般化驗(yàn)報告可以照常填發(fā)。

d)其它規(guī)律性變化：（周期性等）。

4.5.4通過圖形的資料對比進(jìn)行誤差分析，消除誤差來源

_

a)每個月的月底將該月的全部質(zhì)控血清檢測結(jié)果的x和

_

_

s

與該測定的x和

s

進(jìn)

行比較。如x發(fā)生了變化，說明確鑿度發(fā)生了變化提醒有非隨機(jī)誤差存在。假使當(dāng)月s不同則說明檢測的縝密度發(fā)生了變化。b)將使用同一批號的質(zhì)控血清的CT

_

值的x和

s按月份列出。假使x逐月上升，

_

則應(yīng)考慮保存不當(dāng)造成的試劑效價降低或質(zhì)控血清本身出現(xiàn)降解。假使各月份

_

x基本一致而

s逐月加大，則主要提醒常規(guī)工作的縝密度下降，應(yīng)重點(diǎn)從操作、

管理上找原因。

c)在數(shù)年中，把每個月的CV和失控規(guī)律列成表，可用作檢測質(zhì)量的歷史回想和

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趨勢性分析。4.6失控后的處理：

4.6.1分析原始數(shù)據(jù)及初步估計失控原因：發(fā)生失控時，對同批試驗(yàn)檢測的全部原始數(shù)據(jù)結(jié)合近期室內(nèi)質(zhì)控圖和平日經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行分析，估計失控原因的大體方向。4.6.2對具體檢測過程進(jìn)行回想性分析，分析有無特別狀況出現(xiàn)。

4.6.3通過選擇性復(fù)查進(jìn)一步分析判斷失控原因，決定處理方法。選擇性復(fù)查時應(yīng)包括下述樣品，以便一次性找出原因，及時發(fā)出報告:a)失控時使用的質(zhì)控血清。

b)重新開啟一瓶一致批號的質(zhì)控血清。c)失控時使用的標(biāo)準(zhǔn)品。

d)重新開啟一瓶一致批號的標(biāo)準(zhǔn)品。

e)少數(shù)幾個病人標(biāo)本（最好選擇已知病情近期曾做過該項目的病人標(biāo)本）通

過對復(fù)查結(jié)果的分析，找到失控原因，制定相應(yīng)的解決方案，使試驗(yàn)室重新在控并將失控狀況、原因和解決方案在檔案中詳細(xì)記錄（見表22）。4.7該程序的變動程序：本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：檢驗(yàn)科主任、室技術(shù)負(fù)責(zé)人。起草人

批準(zhǔn)人生效日期年月日****醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件試驗(yàn)室操作規(guī)程文件編號：版本：生效日期：臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序第5頁共8頁

表22臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室PCR試驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制失控原因及改正措施記錄

日期檢測項目操作人失控現(xiàn)象原因分析改正結(jié)果審核人

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附圖2

室內(nèi)質(zhì)控記錄圖

檢測項目：試劑廠家：試劑批號：主要儀器質(zhì)控品來源

_X：

SD：CV：起至日期年月日至年月日操作人：

3SD2SDx2SD3SD測定值****醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件試驗(yàn)室操作規(guī)程文件編號：版本：生效日期：臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量