藥典微生物限度修訂培訓(xùn)知識(shí)

主要內(nèi)容一中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整二新的微生物檢驗(yàn)理念三實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃與建設(shè)四（仲裁）中檢院判斷藥品污染的方案五培訓(xùn)總結(jié)第一頁，共50頁。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整1.調(diào)整內(nèi)容章節(jié)內(nèi)容目的無菌檢查法質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系基本與國外接軌微生物限度檢查法滅菌法強(qiáng)調(diào)微生物檢驗(yàn)的驗(yàn)證及過程控制抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則對(duì)滴眼劑的質(zhì)控水平大幅度提高微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則部分品種特別是抗生素品質(zhì)的無藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則菌檢查法由附錄走入各論第二頁，共50頁。2.具體內(nèi)容——無菌檢查一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整中國藥典2010版無菌檢查法修訂方案無菌檢查法中對(duì)以真菌為檢查目的改良馬丁培養(yǎng)基修訂為以需氧菌為檢查目的地的胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基（TSB）為研究工作已由上海市藥檢所牽頭完成。第三頁，共50頁。WHO規(guī)程在取樣量、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件等主要方面與現(xiàn)行USP、EP無菌檢查法一致。WHO規(guī)程的并沒有明確規(guī)定硫乙醇培養(yǎng)基必須雙份雙溫度分別培養(yǎng)，相反倒是推薦單一的硫乙醇培養(yǎng)基在20℃～25℃培養(yǎng)。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整比較第四頁，共50頁。2.具體內(nèi)容——微生物限度檢查一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整將與ICH、(USP/EP/JP)全面接軌2010版中國藥典第二增補(bǔ)本將于2013年10月1日頒布微生物限度檢查法修訂方案肯定會(huì)在2015年版中國藥典收載，擬提前頒布，爭取必要的過渡期第五頁，共50頁。1）檢驗(yàn)體系變更；2）限度標(biāo)準(zhǔn)變更，有“數(shù)量”向“數(shù)量級(jí)”轉(zhuǎn)變；3）控制菌結(jié)果判斷趨向多樣化；4）以“OOS”代替復(fù)試…一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第六頁，共50頁。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整比較計(jì)數(shù)法藥典2010版Chp.修訂版2010版Chp.分類依據(jù)營養(yǎng)條件微生物類別項(xiàng)目1需氧菌總數(shù)胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA)細(xì)菌數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基項(xiàng)目2霉菌及酵母菌總數(shù)沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA)霉菌及酵母菌數(shù)玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基特點(diǎn)客觀、嚴(yán)謹(jǐn)檢驗(yàn)條件不能滿足控制要求第七頁，共50頁。微生物計(jì)數(shù)定義變化修訂前修訂后細(xì)菌數(shù)——營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基細(xì)菌修訂為需氧菌總數(shù)（TAMC)霉菌和酵母菌——玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基霉菌和酵母菌數(shù)修訂為霉菌和酵母菌總數(shù)(TYMC)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整需氧菌總數(shù)：生長在胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）上所有的菌落（包括霉菌和酵母菌）。霉菌和酵母菌總數(shù)：一般指生長在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的所有菌落（包括細(xì)菌）。第八頁，共50頁?？刂凭鷻z查法編號(hào)2010版Chp.修訂版2010版Chp.1*耐膽鹽的革蘭氏陰性菌大腸菌群2*大腸埃希菌大腸埃希菌3*沙門菌沙門菌4*銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌5*金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌6梭菌梭菌7白色念珠菌白色念珠菌*：培養(yǎng)基體系有明顯變化一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第九頁，共50頁。結(jié)果判斷項(xiàng)目2010版Chp.修訂版2010版Chp.微生物計(jì)數(shù)法控制標(biāo)準(zhǔn)（接受限度）101（20）10(10)102（200)100(100)控制菌檢查法結(jié)果較少的生化實(shí)驗(yàn)或采用其他事宜方法進(jìn)一步鑒定應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定實(shí)驗(yàn)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第十頁，共50頁。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整增加新的計(jì)數(shù)方法——MPN法最可能計(jì)數(shù)法（MPN法）用于微生物計(jì)數(shù)時(shí)精確度較差，僅在供試品需氧菌總數(shù)沒有適宜計(jì)數(shù)方法時(shí)使用，不適用霉菌計(jì)數(shù)。第十一頁，共50頁。3.調(diào)整背景一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整醫(yī)藥產(chǎn)品的發(fā)展一百多年來人們努力提高在“有菌的環(huán)境”生成“無菌的產(chǎn)品”的能力，事實(shí)證明這一努力至今充滿挑戰(zhàn)！第十二頁，共50頁。2006年，齊二藥——亮菌甲素注射液導(dǎo)致多名患者腎功能衰竭，13名患者死亡；2006年，安徽華源生物藥業(yè)公司——克林霉素注射液導(dǎo)致11名患者死亡；2008年，江西博雅生物制藥公司——靜脈注射用人免疫球蛋白，6人注射后死亡；2009年至今…一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整1）國內(nèi)第十三頁，共50頁。2006年7月～8月發(fā)生震驚全國的“欣弗事件”一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整奪命的“欣弗”第十四頁，共50頁?！靶栏ナ录睂?duì)我國藥品生成監(jiān)管產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響，直接推動(dòng)了新的藥典方案和新版GMP規(guī)定的出臺(tái)。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整“欣弗事件”將永遠(yuǎn)成為無菌藥品生成的典型反面教材！第十五頁，共50頁。2）國際2012年10月，美國新英格蘭合成制藥中心生成的注射用類固醇霉菌污染，造成數(shù)百人感染真菌腦炎，至年底統(tǒng)計(jì)已死亡39人。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第十六頁，共50頁。在50支密封藥瓶中檢測出曲霉菌和突臍蠕孢菌兩種真菌。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第十七頁，共50頁。3）發(fā)展趨勢——全球化的微生物檢驗(yàn)

新的GPM

新的藥典方案

新的ISO標(biāo)準(zhǔn)

WHO微生物實(shí)驗(yàn)室PQ認(rèn)證Youdorightthewrongthing!一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第十八頁，共50頁。Pre-QualificationofqualitycontrollaboratoriesWHOPQ認(rèn)證WHO自2004年建立預(yù)認(rèn)證程序，聯(lián)合國機(jī)構(gòu)評(píng)價(jià)使用質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室的指導(dǎo)原則（2004年發(fā)布WHOTRS，No.917，Annex4，2007年修訂WHOTRS，No.943，Annex5，目前仍在修訂中）蓋茨全球基金項(xiàng)目一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第十九頁，共50頁。WHOgoodpracticesforpharmaceuticalmicrobiologylaboratories(GPML)1.Personnel人員2.Environment環(huán)境3.Validationoftestmethods檢測方法驗(yàn)證4.Equipment儀器設(shè)備5.Reagentsandculturemedia試劑和培養(yǎng)基6.Referencematerialsandreferencecultures菌株7.Sampling抽樣8.Samplehandlingandidentification樣本處理和判斷9.Disposalofcontaminatedwaste污染廢棄物處理一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第二十頁，共50頁。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整WHOgoodpracticesforpharmaceuticalmicrobiologylaboratories(GPML)10.Qualityassuranceofresultsandqualitycontrolofperformance

檢測結(jié)果質(zhì)量保證和檢測過程質(zhì)量控制11.Testingprocedures檢測方法12.Testreports檢測報(bào)告（原始記錄）第二十一頁，共50頁。ICH人用藥注冊(cè)技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)歐盟、美國和日本三方的藥品管理部門和制藥企業(yè)協(xié)會(huì)1990年發(fā)起——三方的制藥產(chǎn)品占世界市場份額的70%～80%一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第二十二頁，共50頁。ICH工作內(nèi)容協(xié)調(diào)質(zhì)量（Q)、安全（S）、療效（E）的技術(shù)要求。建立統(tǒng)一的質(zhì)量技術(shù)要求：質(zhì)量控制、檢驗(yàn)技術(shù)、檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)等；減少國際貿(mào)易的障礙；統(tǒng)一醫(yī)藥產(chǎn)品進(jìn)入國際市場的技術(shù)門檻，促進(jìn)國際間藥品在同一技術(shù)平臺(tái)的公平競爭；ICH4QB（藥典互認(rèn)）附錄4A、4B、4C已經(jīng)得出結(jié)論：美國、歐盟和日本藥典中的微生物限度檢驗(yàn)方法協(xié)調(diào)統(tǒng)一！一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第二十三頁，共50頁。PDG（PharmacopoeialDiscussionGroup)藥典討論組1989年，由歐洲藥品質(zhì)量管理局。美國藥典委員會(huì)和日本藥局方三方代表組成了PDG；宗旨：使三方藥典的科技水平保持一致，服務(wù)ICH，保證公眾用藥安全；角色：ICH的重要技術(shù)支撐一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第二十四頁，共50頁。各國藥典對(duì)微生物限度檢查協(xié)調(diào)的內(nèi)容及結(jié)構(gòu)示例USP36<61>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProducts:MicrobialEnumerationTests(非無菌產(chǎn)品的微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法)<62>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProduct:Testsforspecifiedmicroorganisms(非無菌產(chǎn)品的微生物檢查：控制菌檢查法)<1111>MicrobiologicalAttributesofNonsterilePharmaceuticalProduct(非無菌產(chǎn)品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn))一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第二十五頁，共50頁。各國藥典對(duì)微生物限度檢查協(xié)調(diào)的內(nèi)容及結(jié)構(gòu)示例EP7.0<2.6.12>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProducts:MicrobialEnumerationTests(非無菌產(chǎn)品的微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法)<2.6.13>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProduct:Testsforspecifiedmicroorganisms(非無菌產(chǎn)品的微生物檢查：控制菌檢查法)<5.1.4>MicrobiologicalAttributesofNonsterilePharmaceuticalProduct(非無菌產(chǎn)品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn))一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第二十六頁，共50頁。中國藥典重大事項(xiàng)1995年版首次收載微生物限度檢查法，沿用86版&89版衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)2000年版首次收載微生物限度檢查標(biāo)準(zhǔn)2005年版首次收載方法驗(yàn)證，標(biāo)準(zhǔn)分列在三部藥典，對(duì)含生藥原粉制劑增加大腸菌群的控制，用于深部組織的制劑增加厭氧菌檢查。PDG完成微生物檢查的方法&標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一2010年版首次收載培養(yǎng)基適用性檢查，眼用制劑修訂為無菌要求，陰道&尿道給藥制劑增加白色念珠菌的控制。ICH成員國收載協(xié)調(diào)方法&標(biāo)準(zhǔn)2010年修訂版基本與ICH微生物檢查法接軌，涵蓋標(biāo)準(zhǔn)和方法的整體變化一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第二十七頁，共50頁。中國藥典與ICH接軌原因：中國雖然不是ICH成員國，但與國外制藥行業(yè)交往日益增多，且中國想進(jìn)入國際市場，藥品檢驗(yàn)方法和標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一勢在必行，微生物檢查法亦如此。國內(nèi)現(xiàn)狀已具備與ICH接軌的技術(shù)基礎(chǔ)：2005年版Chp.收載方法驗(yàn)證；2010版Chp.收載培養(yǎng)基適用性要求。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整第二十八頁，共50頁。檢驗(yàn)結(jié)果判斷：結(jié)果→過程控制（注重環(huán)節(jié)）二、新的微生物檢驗(yàn)理念環(huán)境保證培養(yǎng)基保證無菌性檢查靈敏度檢查過程控制SOP操作方法驗(yàn)證有效的方法有效的結(jié)果可靠的結(jié)論結(jié)果判斷第二十九頁，共50頁。過程監(jiān)控是溯源的基礎(chǔ)二、新的微生物檢驗(yàn)理念廠房與設(shè)施物料驗(yàn)證質(zhì)量管理機(jī)構(gòu)與人員設(shè)備衛(wèi)生管理生產(chǎn)管理空氣凈化技術(shù)生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生公用工程衛(wèi)生原料衛(wèi)生輔料衛(wèi)生包裝材料衛(wèi)生清潔驗(yàn)證滅菌驗(yàn)證設(shè)備驗(yàn)證工藝衛(wèi)生監(jiān)測環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測個(gè)人衛(wèi)生監(jiān)測體檢管理生產(chǎn)人員衛(wèi)生衛(wèi)生培訓(xùn)工藝用水衛(wèi)生

設(shè)備清潔清潔規(guī)程

衛(wèi)生管理制度防止污染與混淆的措施微生物控制第三十頁，共50頁。MDD系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果偏離規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)一般屬于OOS情況，但是，涉及微生物相關(guān)檢驗(yàn)項(xiàng)目的偏差處理，F(xiàn)DA的OOS指南已經(jīng)明確說明并不適用。MDD是英文MicrobialDataDeviations的簡寫，意思就是實(shí)驗(yàn)室微生物相關(guān)檢驗(yàn)數(shù)據(jù)偏差。由于微生物相關(guān)檢驗(yàn)項(xiàng)目固有的復(fù)雜性，F(xiàn)DA的OOS指南避開了這個(gè)話題。二、新的微生物檢驗(yàn)理念第三十一頁，共50頁。USP<1117>專論《BestMicrobiologicalPractice》第三部分關(guān)于分析結(jié)果的解釋，列出了涉及微生物數(shù)據(jù)偏差（MDD）的疑難問題。二、新的微生物檢驗(yàn)理念微生物是無處不在的，也是污染的主要來源。分析人員污染微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目的分析結(jié)果也是可能的。在不同樣品之間或者樣品不同部位之間，微生物可能沒有均勻分布。微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目具有顯著的內(nèi)在變異性。第三十二頁，共50頁。微生物數(shù)據(jù)有時(shí)不容易理解與人類相關(guān)的微生物群落被廣泛用于許多測試。人員污染是始終被關(guān)心的問題。樣品或環(huán)境中的微生物并非均勻分布。微生物檢測可變范圍大：可能在±0.5lg左右

因此，得到的結(jié)果與期望會(huì)有差異二、新的微生物檢驗(yàn)理念第三十三頁，共50頁。例如重復(fù)性誤差：7.5%（RSD）方法局限性

計(jì)數(shù)偏差：25～30cfu/皿，RSD為20%～18%

（USP34<1227>)

稱量誤差：

取10g

9.9～10.1g±1%容量誤差：取1ml＜1%培養(yǎng)基差異：＞10%

二、新的微生物檢驗(yàn)理念

第三十四頁，共50頁。MDD調(diào)查需要涉及的范圍MDD涉及的微生物類別的鑒別；實(shí)驗(yàn)室樣品和相關(guān)材料；實(shí)驗(yàn)室相關(guān)記錄；生產(chǎn)環(huán)境的監(jiān)控人員培訓(xùn)和健康情況；產(chǎn)品滅菌前的生物負(fù)荷；批生產(chǎn)記錄和輔助記錄；生產(chǎn)歷史（包括培養(yǎng)基灌裝歷史）二、新的微生物檢驗(yàn)理念第三十五頁，共50頁。原料藥來源和質(zhì)量；輔料來源和質(zhì)量（包括工藝用水和工藝用氣）；?生產(chǎn)現(xiàn)場。二、新的微生物檢驗(yàn)理念第三十六頁，共50頁。實(shí)驗(yàn)室偏差調(diào)查示意圖

二、新的微生物檢驗(yàn)理念儀器/設(shè)備試管失誤疲憊人員失誤滅菌釜操作培訓(xùn)培養(yǎng)基污染更換供應(yīng)商HEPA泄漏無合格證環(huán)境條件無菌服破裂檢驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)第三十七頁，共50頁。MDD調(diào)查結(jié)果分析和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室分析錯(cuò)誤

修訂完善的SOP、校驗(yàn)儀器、更換物料或消毒環(huán)境等分析方法變更

制定替代檢驗(yàn)方法SOP用于解決不確定的結(jié)果批次產(chǎn)品失敗

對(duì)于不合格產(chǎn)品按規(guī)程處理

二、新的微生物檢驗(yàn)理念第三十八頁，共50頁。二、新的微生物檢驗(yàn)理念MDD調(diào)查結(jié)果分析和評(píng)價(jià)人員或者環(huán)境因素影響

啟動(dòng)CAPA糾偏措施沒有發(fā)現(xiàn)根本原因1）基于MDD發(fā)生的可能原因采取CAPA措施；2）基于風(fēng)險(xiǎn)分析，對(duì)相關(guān)批次產(chǎn)品做出最后處理決定

第三十九頁，共50頁。新的檢驗(yàn)環(huán)境1）ICH要求：適宜的潔凈度環(huán)境；2）2010版GPM環(huán)境分級(jí)以A（百級(jí)）、B（千級(jí)）、C（萬級(jí)）、D（十萬級(jí)）定義；3）2010版Chp.修訂要求：微生物限度檢查應(yīng)在受控潔凈環(huán)境下的局部潔凈度不低于B級(jí)的單向流空氣區(qū)域（>D+B）；

二、新的微生物檢驗(yàn)理念第四十頁，共50頁。4）發(fā)展趨勢：檢驗(yàn)過程及環(huán)境，既要求防止樣品受污染，又要防止對(duì)環(huán)境和人員造成危害。合理劃分活動(dòng)區(qū)域以提高微生物實(shí)驗(yàn)室操作的安全性和可靠性。二、新的微生物檢驗(yàn)理念第四十一頁，共50頁。生物安全感染性微生物的危險(xiǎn)度等級(jí)危險(xiǎn)度1級(jí)（無或極低的個(gè)體和群體危害）危險(xiǎn)度2級(jí)（個(gè)體危害中等，群體危害低）

病原體能夠?qū)θ嘶騽?dòng)物致病，但對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員、社區(qū)、環(huán)境不易導(dǎo)致嚴(yán)重危害。實(shí)驗(yàn)室暴露也許會(huì)引起嚴(yán)重感染，但對(duì)感染有有效預(yù)防和治療措施，疾病傳播危害有限。二、新的微生物檢驗(yàn)理念第四十二頁，共50頁。二、新的微生物檢驗(yàn)理念生物安全感染性微生物的危險(xiǎn)度等級(jí)危險(xiǎn)度3級(jí)（個(gè)體危害高，群體危害低）危險(xiǎn)度4級(jí)（個(gè)體和群體危害均高）第四十三頁，共50頁。相應(yīng)的生物安全水平二、新的微生物檢驗(yàn)理念危險(xiǎn)度等級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室類