微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制第1頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四

前言在實(shí)際工作中存在許多復(fù)雜因素影響微生物學(xué)檢驗(yàn),可能給檢驗(yàn)結(jié)果帶來偏差甚至錯誤,因此必須對影響檢驗(yàn)結(jié)果的諸多因素采取控制手段保證檢驗(yàn)結(jié)果的正確性,不斷完善微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制.第2頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四主要內(nèi)容1檢驗(yàn)人員2儀器.設(shè)備3檢驗(yàn)培養(yǎng)基,試劑4檢驗(yàn)環(huán)境5采樣6樣品的接收和預(yù)處理7檢驗(yàn)質(zhì)量8校驗(yàn)的執(zhí)行9參考菌株及其保存10實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外部質(zhì)量控制11檢驗(yàn)報(bào)告及結(jié)果質(zhì)量控制第3頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四1檢驗(yàn)人員(1)微生物檢驗(yàn)不能完全依賴全自動鑒定儀器,檢驗(yàn)工作中每一步驟均需要有高度的主觀分析和判斷能力,與個人的經(jīng)驗(yàn).技能和微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識水平密切相關(guān).(2)除要求微生物檢驗(yàn)人員必須具備嚴(yán)肅認(rèn)真的工作態(tài)度,精密細(xì)致的觀察和操作習(xí)慣,注重個人衛(wèi)生外,還必須訓(xùn)練掌握微生物檢驗(yàn)技術(shù).(3)檢驗(yàn)人員應(yīng)執(zhí)行上崗前培訓(xùn)制度,上崗前培訓(xùn)合格方能上崗操作,還要主動參加學(xué)習(xí),培訓(xùn),講座,學(xué)習(xí)新技術(shù),掌握微生物學(xué)檢驗(yàn)方法,標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)法律法規(guī)第4頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四1檢驗(yàn)人員(4)參與編寫測試程序及儀器操作程序,學(xué)習(xí)質(zhì)量保證體系知識和計(jì)量學(xué)基本知識(5)參加各類水平測試和盲樣測試,提高檢測水平和分析問題,解決問題的能力(6)微生物學(xué)檢驗(yàn)室負(fù)責(zé)人應(yīng)定期對檢驗(yàn)人員進(jìn)行專業(yè)知識和操作熟練程度的考核,提高檢驗(yàn)人員的素質(zhì).第5頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四3培養(yǎng)基為保證干粉培養(yǎng)基質(zhì)量指標(biāo)，在實(shí)際工作中應(yīng)注意；（1）加強(qiáng)包裝的密封性能；（2）使用時盡量縮短開蓋時間；（3）一般干性培養(yǎng)基放在低溫干燥的環(huán)境中保存，對于易受潮的品種，啟用后宜放入干燥器中保存；（4）由于配制水分不同，啟用次數(shù)或時間增加，干粉培養(yǎng)基的pH值可能會有所變化，應(yīng)隨時略加調(diào)整。第6頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四3培養(yǎng)基培養(yǎng)基的配制應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行操作，并做好原始記錄。為保證培養(yǎng)基必須在玻璃容器，搪瓷或鋁鍋中進(jìn)行，如用銅，鐵器皿，會對微生物生長有毒害作用；配制培養(yǎng)基時應(yīng)按檢驗(yàn)項(xiàng)目規(guī)定的配方添加，不得隨意增減或更改培養(yǎng)基成分。此外，要用專用的角匙取藥品，避免交叉污染而影響檢驗(yàn)結(jié)果；第7頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四3培養(yǎng)基培養(yǎng)基配制最好用蒸餾水或去離子水，避免使用自來水，因其中含有氯等抗菌物質(zhì)；不同類型的微生物對pH值的要求不同，配制培養(yǎng)基時應(yīng)測調(diào)值，如測定結(jié)果與所要求的值不符，則用1NNaOH或1NHCL溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。第8頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四3培養(yǎng)基效果試驗(yàn)是指按不同的培養(yǎng)基接種相應(yīng)的菌株，觀察細(xì)菌的發(fā)肓，菌落形狀，色素，溶血等特征，據(jù)此判斷培養(yǎng)基是否符合要求。

質(zhì)控菌株

ATCC

生長情況

金黃色葡萄球菌25923+++大腸桿菌25922+++第9頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四7檢驗(yàn)質(zhì)量除按國家標(biāo)準(zhǔn)方法對所需檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行檢測外，在實(shí)際工作中還應(yīng)注意以下幾個方面，否則會影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性：（1）在定量檢驗(yàn)時用重量法還是用體積法，檢驗(yàn)結(jié)果會有誤差，因?yàn)榇酥夭坏扔?的樣品，1ml和1g的化驗(yàn)結(jié)果絕不會相等.一般固態(tài)的樣品宜用重量法,液體樣品宜用體積法.但對粘性液體(如酸奶),如用體積法,會粘附一定量的樣品在吸管上,因此此類樣品最好用重量法.第10頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四7檢驗(yàn)質(zhì)量(2)如檢樣需用用無菌水或無菌生理鹽水稀釋,則最好用均質(zhì)器或組織碎機(jī),以8000`10000轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速處理1min,制成均勻的菌懸液.(3)樣品稀釋時,常會滯留少量樣品在吸管內(nèi)外,應(yīng)多加注意.吸入液體后,應(yīng)沿管壁慢慢注入遞增的稀釋中,特別注意此時吸管尖端切不可碰到稀釋液中.第11頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四7檢驗(yàn)質(zhì)量(4)在培養(yǎng)基注入檢樣,菌懸液時,注意培養(yǎng)基溫度宜在45℃

-50℃

之間,并使培養(yǎng)基與檢樣,菌懸液充分混合.(5)微生物培養(yǎng)時,應(yīng)根據(jù)要求選擇正確的培養(yǎng)溫度和時間.(6)應(yīng)用無菌水或無菌生理鹽水作空白對照,如果在空白對照中檢出細(xì)菌,則可認(rèn)為培養(yǎng)基質(zhì)量存在問題或在操作過程中存在污染情況.另外,采用標(biāo)準(zhǔn)菌種作陽性對照,觀察培養(yǎng)基的質(zhì)量情況.(7)整個檢驗(yàn)過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作.(8)及時檢查結(jié)果,做好原始數(shù)據(jù)記錄.第12頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四9參考菌株及其保存實(shí)驗(yàn)室要準(zhǔn)備好足夠種類和數(shù)量的參考菌株,滿足培養(yǎng)基,試劑盒和試劑質(zhì)量測試的需要.保存菌株要定期傳代,注意無菌操作,使菌株不污染,不死亡,不丟棄.應(yīng)設(shè)專人妥善保管,菌株保存箱應(yīng)加鎖放置適宜環(huán)境,取出使用應(yīng)登記;保存菌株應(yīng)建冊登記,基本項(xiàng)目應(yīng)包括菌種名稱,分離來源,分離日期,傳代日期,保存方法,主要性狀,保管者,領(lǐng)用者等;對保存菌種,經(jīng)傳代數(shù)次后應(yīng)進(jìn)行一次系統(tǒng)生化反應(yīng),血清學(xué)期成績特性等生物學(xué)性狀觀察,檢查其是否發(fā)生變異.第13頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四9參考菌株及其保存常見的參考菌株保存方法：細(xì)菌(1)營養(yǎng)要求不高的需氧細(xì)菌在胰胨大豆瓊脂斜面上能存活1年.(2)需氧或厭氧菌的長期儲存需冷凍干燥,或存放在-70℃(3)營養(yǎng)要求不高的凍干菌種每隔5年要解凍分離重新凍干.(4)細(xì)菌低溫冰凍保存時可懸浮于消毒去脂牛奶,含15%甘油的胰胨大豆肉湯或無菌馬血中.第14頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四9參考菌株及其保存真菌(1)酵母菌按營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌同樣處理.(2)霉菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面上4℃儲存6個月-1年,斜面上覆蓋消毒石蠟油可在室溫下長期存放.第15頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四菌種保藏的方法1定期移植保藏方法:將菌種接種于適宜的斜面或液體培養(yǎng)基,也可進(jìn)行穿刺培養(yǎng),等生長成健壯的菌體(對數(shù)期細(xì)胞,有性孢子或無性孢子)后,將菌種放置4℃冰箱保藏,每間隔一定時間需要重新移植培養(yǎng)一次.芽孢桿菌3-6個月移種一次,其它細(xì)菌每月移種一次.第16頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四2液體石蠟保藏法:這種方法是定期移值保藏法的補(bǔ)充,在生長良好的斜面表面覆蓋一層無菌的石蠟,液面高出培養(yǎng)基1cm,將其置試管架上以直立狀態(tài)低溫保藏,液體石蠟可以防止水分蒸發(fā),隔絕氧氣,所以能延長保藏的時間.第17頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四3沙管保藏法,土壤保藏法4麩皮保藏法.5蒸餾水保藏法6液氮超低溫保藏法7甘油保藏法第18頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四8冷凍干燥保藏法

冷凍干燥保藏法一般過程1安瓿管---酸洗，水洗---烘干----滅菌2配制保護(hù)劑----分裝----滅菌3菌種---培養(yǎng)---制備菌懸液（加入2）----分裝安瓿管----預(yù)凍----真空干燥----裝在歧管上抽真空-----火焰上熔封安瓿管口----檢測真空----保藏第19頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四10實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外質(zhì)量控制

一)內(nèi)部質(zhì)量控制為保證實(shí)驗(yàn)室連續(xù)評價結(jié)果的可靠性和精密度,必須對所用方法的重復(fù)性及再現(xiàn)性定期測定對于不同的控制系統(tǒng),實(shí)驗(yàn)室必須建立限值,超過限值應(yīng)采取糾偏措施.第20頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四10實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外質(zhì)量控制實(shí)踐中內(nèi)部質(zhì)量控制可包括:(1)系統(tǒng)地使用一式雙份的菌落計(jì)數(shù)測定;(2)由同一檢驗(yàn)人員和幾個檢驗(yàn)人員作平行樣:(3)定期或不定期進(jìn)行盲樣測試.第21頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四10實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外質(zhì)量控制（二)外部質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加外部的質(zhì)量控制活動,對其開展的每一項(xiàng)檢測均應(yīng)參加相應(yīng)的室間質(zhì)量控制.對有關(guān)實(shí)驗(yàn)室或管理機(jī)構(gòu)發(fā)出的測試樣品應(yīng)嚴(yán)格地當(dāng)作普通樣品一樣處理,這樣一種方法有助于實(shí)驗(yàn)室每天測試的準(zhǔn)確性和重復(fù)性,是對實(shí)驗(yàn)室所用的方法,試劑,設(shè)備,人員能力的測試.第22頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四10實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外質(zhì)量控制從室間樣品測試中的錯誤可以發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的不足之處,對工作人員的教育改進(jìn)可以提高實(shí)驗(yàn)室的檢測質(zhì)量.對返回的室間測定評級中存在的問題應(yīng)當(dāng)召集體員工討論,改進(jìn)措施(包括方法的改變,員工的改變,員工的再訓(xùn)練,培養(yǎng)基和試劑購買來源的更換等)應(yīng)當(dāng)記錄在案.第23頁，共26頁，2023年，2月20日，星期四10實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外質(zhì)量控制某些項(xiàng)目缺少室間質(zhì)量控制,實(shí)驗(yàn)室可以設(shè)置室內(nèi)質(zhì)量控制,每半年自行評估一次,經(jīng)常參加微生物實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)控活動,有助于加強(qiáng)檢測人員的基本功訓(xùn)練,增強(qiáng)樣品檢測過程中“量”的概念.實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)控可在國內(nèi)外范圍進(jìn)行,有能力的實(shí)