實(shí)驗(yàn)一普通生物顯微鏡的使用

實(shí)驗(yàn)一普通生物顯微鏡的使用第1頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

1.了解普通光學(xué)顯微鏡和體視顯微鏡的基本構(gòu)造及功用，并正確掌握使用和維護(hù)方法。

2.觀察一些真核細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，學(xué)習(xí)基本生物繪圖方法。3.學(xué)習(xí)臨時(shí)裝片的制作方法。第2頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四二、實(shí)驗(yàn)原理：（一）、顯微鏡概述：

顯微鏡是觀察細(xì)胞的主要工具。根據(jù)光源不同，可分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見(jiàn)光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。第3頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（二）、顯微鏡的發(fā)明：

1.最早由荷蘭眼鏡商在1600年前后制造的，它的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，放大倍數(shù)只有10～30倍，可以觀察一些小昆蟲(chóng)，如跳蚤等，因而有人稱它為“跳蚤鏡”。這種顯微鏡是用光線照明的，屬于光學(xué)顯微鏡。第4頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四2.英國(guó)物理學(xué)家羅伯特·虎克（RobertHooke，

1635—1703）研制出能夠放大140倍的光學(xué)顯微

鏡，并用它來(lái)觀察軟木薄片，發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞。第5頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四3.1673年有個(gè)名叫列文.虎克（AntonivanLeeuwenhoek）的荷蘭人用自己制造的顯微鏡觀察到了被他稱為“小動(dòng)物”的微生物世界。他也被稱為微生物的開(kāi)山祖。第6頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四4.1938年，德國(guó)工程師魯斯卡（ErnestRuska,

1906-1988)

制造出世界第一臺(tái)透射電子顯微鏡

（TEM）。1952年，英國(guó)工程師CharlesOatley

制造出第一臺(tái)掃描電子顯微鏡（SEM）第7頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（三）、顯微鏡的分辨率:

分辨率：也稱為分辨力，它是指能把兩個(gè)物點(diǎn)分辨清楚的最小距離。分辨率數(shù)值越高，分辨距離越大，則分辨率越低。反之亦然。所以，分辨率是以分辨距離來(lái)表示的。其計(jì)算公式為:D=0.61入/N·AN·A·=n·sina/2

式中D為分辨率，A為光波波長(zhǎng)，N·A·為物鏡的數(shù)值孔徑(鏡口率)。

第8頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四

在物鏡上，有鏡口率(N.A.)的標(biāo)志，它反應(yīng)該鏡頭分辨力的大小，其數(shù)字越大，表示分辨率越高。各物鏡的鏡口率如下表：

物鏡鏡口率(N.A.)工作距離(mm)10×0.255.4040×0.650.39100×1.300.11顯微鏡的總放大倍數(shù)=目鏡放大倍數(shù)×物鏡放大倍數(shù)

公式為:M=K1×

K2

第9頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四焦點(diǎn)深度:

顯微鏡調(diào)焦到看清標(biāo)本某一點(diǎn)時(shí)，不僅是這一物點(diǎn)，而且它的上下兩側(cè)也能看清楚的厚度叫做焦點(diǎn)深度。要看到標(biāo)本的全厚度，必須調(diào)節(jié)螺旋仔細(xì)地從上到下進(jìn)行觀察。第10頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四三、材料和儀器：儀器：普通光學(xué)顯微鏡、體視鏡（附顯微用品：擦鏡紙、香柏油、二甲苯、載玻片、蓋玻片）材料與器材：新鮮酵母液、滴管、鑷子、培養(yǎng)皿、標(biāo)本盒（內(nèi)有各種裝片）第11頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四四、實(shí)驗(yàn)步驟：（一）普通顯微鏡的使用及維護(hù)：I.光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造普通生物顯微鏡由2部分構(gòu)成：①：光學(xué)部分：包括物鏡、目鏡、光源、聚光器，是顯微鏡的主體。②：機(jī)械部分：包括鏡筒、鏡臂、鏡座、鏡臺(tái)(載物臺(tái)）、調(diào)節(jié)旋鈕、物鏡轉(zhuǎn)換器等，用于固定材料和觀察方便。第12頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四II.顯微鏡的使用

1.

觀察前的準(zhǔn)備工作

①

.顯微鏡在使用之前應(yīng)檢查一下它的各個(gè)部件是否完整和正常，并對(duì)載物臺(tái)、目鏡、物鏡以及聚光器上端透鏡進(jìn)行必要的清潔工作。然后進(jìn)行調(diào)節(jié)。

②

.觀察時(shí)要雙眼同時(shí)睜開(kāi)，一邊觀察一邊進(jìn)行記錄或描繪。

③

.觀察時(shí)所用的材料、藥品和各種器具要預(yù)先備好第13頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四2.使用方法：（1）低倍鏡的使用：觀察任何標(biāo)本，均需從低倍鏡開(kāi)始。①檢查：檢查顯微鏡是否完好。②準(zhǔn)備：將顯微鏡放于前方略偏左，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕將載物臺(tái)下降，旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器使低倍鏡正對(duì)通光孔。③對(duì)光：④放標(biāo)本片：

⑤調(diào)節(jié)焦距⑥計(jì)算放大倍數(shù)：第14頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四錯(cuò)誤原因：如按上述操作，依然看不到圖象，可能有以下原因：A.轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)太快，超過(guò)焦點(diǎn)，需重新調(diào)節(jié)。B.物鏡未對(duì)準(zhǔn)通光孔。C.標(biāo)本沒(méi)放在視野內(nèi)，需移動(dòng)標(biāo)本片尋找觀察對(duì)象。D.光線太強(qiáng)或太弱。尤其觀察透明或未染色標(biāo)本時(shí)，應(yīng)將光線調(diào)稍暗些，有利觀察。第15頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（2）高倍鏡的使用：①依照上述操作步驟，先用低倍鏡找到清晰物象，②將需要觀察的部分移到視野中央，③眼睛從側(cè)面注視物鏡，移動(dòng)轉(zhuǎn)換器，換高倍鏡，④看目鏡，微調(diào)細(xì)調(diào)旋鈕，至看到清晰物象。

第16頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四錯(cuò)誤原因：如按上述操作，依然看不到圖象，可能有以下原因：A.觀察的標(biāo)本不在視野內(nèi)。應(yīng)在低倍鏡下找到后，移到視野中央，再換高倍鏡觀察。B.標(biāo)本放反了。C.焦距未調(diào)好。第17頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（3）油鏡的使用：

①先用低倍鏡觀察標(biāo)本情況。②換高倍鏡，把需觀察的部分移至視野中央。

③將聚光器升至最高位置，光圈開(kāi)至最大。④在蓋玻片所要觀察的位置滴一小滴香柏油，放于載物臺(tái)。⑤把油鏡移至工作位置。第18頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四⑥慢慢調(diào)節(jié)粗細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕，使載物臺(tái)緩慢上升，同時(shí)細(xì)心從側(cè)面觀察物鏡前端與標(biāo)本之間的距離。先使物鏡前端與油滴接觸，再慢慢上升載物臺(tái)，至物鏡前端接近而沒(méi)有碰觸到蓋玻片為止。（小心損傷油鏡或裝片）⑦眼睛從目鏡觀察，緩慢調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)旋鈕至看清標(biāo)本（注意只能下降載物臺(tái)）第19頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四⑧觀察完畢，下降載物臺(tái)，使油鏡離開(kāi)光軸，及時(shí)做好油鏡的清潔工作（先用干凈的擦鏡紙擦去大部分香柏油，再用二甲苯滴濕的擦鏡紙擦拭兩次，最后用干的擦鏡紙擦拭一次）。玻片上的油可用“拉紙法”擦去：把一小張擦鏡紙蓋在載玻片的油滴上，其上滴一兩滴二甲苯，趁濕把紙往外拉，連續(xù)幾次，即可擦凈（注意不要使用過(guò)多的二甲苯，并及時(shí)擦干凈上面的香柏油，以免使裝片受損）。第20頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四注意：如果不出現(xiàn)物象或者目標(biāo)不理想要重找，A.在加油區(qū)之外重找時(shí)應(yīng)按：低倍→高倍→油鏡程序。

B.在加油區(qū)內(nèi)重找應(yīng)按：低倍→油鏡程序，不得經(jīng)高倍鏡，以免油沾污鏡頭。

第21頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四3.顯微鏡使用后的復(fù)原：（1）下降聚光器約1cm，（2）使物鏡離開(kāi)光軸，使通光孔正隊(duì)兩個(gè)物鏡中間，提升載物臺(tái)至原來(lái)位置，（3）把載物臺(tái)上的標(biāo)本移動(dòng)器移至適當(dāng)位置，（4）關(guān)閉電源。第22頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四4、顯微鏡使用的注意事項(xiàng)（1）持鏡時(shí)必須是右手握臂、左手托座的姿勢(shì)，不可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。（2）輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)的邊緣，以免碰翻落地。（3）保持顯微鏡的清潔，光學(xué)和照明部分只能用擦鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機(jī)械部分用布擦拭。（4）水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和載物臺(tái)如果沾污應(yīng)立即擦凈。第23頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（5）放置玻片標(biāo)本時(shí)要對(duì)準(zhǔn)通光孔中央，且不能反放玻片，防止壓壞玻片或碰壞物鏡。（6）要養(yǎng)成兩眼同時(shí)睜開(kāi)的習(xí)慣，以左眼觀察視野右眼用以繪圖。（7）不要隨意取下目鏡，以防止塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。（8）使用完畢后，必須復(fù)原才能放回鏡箱內(nèi)。第24頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（二）、體視鏡的使用

體視顯微鏡又稱實(shí)體顯微鏡，它在觀察物體時(shí)能產(chǎn)生正立的三維空間影像。立體感強(qiáng)，成像清晰和寬闊，又具有長(zhǎng)工作距離，并可根據(jù)觀察物的特點(diǎn)選用不同的反射和透射光照明，是適用范圍非常廣泛的常規(guī)顯微鏡。

第25頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（三）、標(biāo)本的觀察“5”字片：低倍人血涂片：低倍高倍油鏡兔精蟲(chóng)涂片：低倍高倍單層扁平上皮：低倍高倍動(dòng)、植物細(xì)胞有絲分裂切片：低倍高倍日本血吸蟲(chóng)雌雄合抱裝片：肉眼低倍第26頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（四）、酵母臨時(shí)裝片的制作1.滴一滴鮮酵母液于干凈的載玻片上，2.輕輕蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡，3.低倍、高倍鏡下觀察。注意：觀察時(shí)注意光線不要太強(qiáng)，以免影響觀察效果。第27頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四（五）生物學(xué)繪圖方法：1.用2H鉛筆繪輪廓，用HB鉛筆描深，線條要光滑，2.圖及文字部分全部用鉛筆，文字用中文楷書(shū)，3.繪圖紙上端寫(xiě)清實(shí)驗(yàn)名稱，中部畫(huà)圖，下部寫(xiě)清所繪圖名稱、放大倍數(shù)，4.標(biāo)明圖中各部分名稱，用直線引線并標(biāo)在圖的右側(cè)，名稱較多時(shí)，可先標(biāo)在右側(cè)，再標(biāo)在左側(cè)，5.可用光滑黑點(diǎn)表示明暗不同，不可大面積涂黑。第28頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、作業(yè)：1.繪圖：繪出你用油鏡所觀察到的人紅細(xì)胞視野圖。2.思考題：（1）總結(jié)使用顯微鏡應(yīng)特別注意的幾個(gè)問(wèn)題。（2）從低倍物鏡轉(zhuǎn)高倍物鏡時(shí)應(yīng)注意哪幾點(diǎn)？（3）接物鏡上各銘文有何意義？（4）用油鏡觀察和嗣后的操作步驟。為什么要用香