動物細胞融合與單克隆抗體

動物細胞融合與單克隆抗體第1頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三(1)(1)(2)(3)(4)(5)回顧：植物體細胞雜交過程示意圖第2頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三A細胞B細胞人工誘導雜交細胞動物細胞融合（也稱細胞雜交）：是指兩個或多個細胞融合形成一個單核細胞的過程。一、動物細胞融合概念第3頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三細胞膜的流動性滅活的病毒、PEG、電激等融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞2、誘導的手段？3、融合后細胞的類型？4、AB雜種細胞遺傳物質(zhì)有什么特點？三種AA、AB、BB含兩種生物的遺傳物質(zhì)動物細胞融合過程1、原理？第4頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三動物細胞融合技術的意義和應用第5頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三比較項目細胞融合的原理細胞融合的方法誘導手段用途植物體細胞雜交細胞膜的流動性細胞的全能性纖維素酶、果膠酶去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動、聚乙二醇克服遠源雜交不親和，獲得雜種植株動物細胞融合細胞膜的流動性用胰蛋白酶使細胞分散后誘導細胞融合除應用植物細胞雜交手段外，還有滅活病毒獲得雜種細胞、制備單克隆抗體比較動、植物細胞雜交技術第6頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三【例1】能使動物細胞融合的特有的誘導因子是（）A.離心B.滅活的病毒C.電刺激D.振動【例2】融合后的雜交細胞的遺傳物質(zhì)有何特點（）具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息B.能無限增殖C.可形成新個體D.培養(yǎng)過程會貼壁【例3】動物細胞融合的作用中最重要的是（）A.克服遠源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細胞

BB初試牛刀A第7頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細胞是漿細胞（即效應B細胞）。溫故知新二、單克隆抗體強調(diào)：效應B淋巴細胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞，下文將其簡稱為B淋巴細胞第8頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原反復注射動物從動物的血清中分離抗體該法制備抗體的缺點：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個問題呢？單克隆抗體！第9頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念

人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內(nèi)的B細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細胞只分泌一種化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細胞進行無性繁殖，即克隆。單克隆抗體的概念單克隆抗體：單個B細胞克隆產(chǎn)生的單一、特異性強的抗體問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設計一個方案。第10頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術設計方案：動物細胞融合技術單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細胞1975年英國科學家米爾斯坦和柯勒的實驗第11頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三BB

、B瘤、瘤瘤

（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細胞才能存活獲得產(chǎn)生相應抗體的B細胞（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。第12頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三雜交細胞滅活的病毒等手段培養(yǎng)骨髓瘤細胞B淋巴細胞經(jīng)免疫的小鼠雜交瘤細胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體第13頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三單克隆抗體的應用：1、診斷試劑——最廣泛應用準確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點：

特異性強，靈敏度高，并能大量制備。第14頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三“生物導彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導向，藥物為彈頭2、治療疾病和運載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”，準確殺傷癌變細胞。第15頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法－－滅活病毒一個新細胞－－雜交瘤細胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢本節(jié)小結(jié)重點第16頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三【例4】科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞B.不經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D.不經(jīng)過免疫的B淋巴細胞【例5】單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的（）B淋巴細胞B．T淋巴細胞C．骨髓瘤細胞D．雜交瘤細胞A初試牛刀D第17頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三【例6】用動物細胞工程技術獲取單克隆抗體，下列實驗步驟中錯誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞B．用纖維素酶處理B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞C．用聚乙二醇作誘導劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合D．篩選雜交細胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B初試牛刀×第18頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三謝謝第19頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三

2002年12月30日，

兩場籌備了10年的“太空婚禮”首次在神舟四號飛船上舉行，植物細胞“新人”—黃花煙草和革新一號煙草葉肉細胞原生質(zhì)體，動物細胞“新人”是小鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，兩批新人同時在“產(chǎn)房”—電融合儀內(nèi)孕育新生命?！疤栈槎Y”這兩場“太空婚禮”實質(zhì)是哪兩項細胞工程技術？植物體細胞雜交技術動物細胞融合技術第20頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三閱讀課本P52及識圖2-23第21頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三(1)若A細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則B細胞是取自小鼠體內(nèi)的

細胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細胞之前，應給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過程是一個_____________過程，該過程的進行常用_____________或_____________的誘導。(3)假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成

種類型的C細胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細胞用于培養(yǎng)，D細胞的名稱是

，其特點是_________________________________________。效應B

抗原

細胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇性3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

雜交瘤細胞第22頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三(4)在培養(yǎng)時通過________分裂方式大量繁殖。D細胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項）__________________________________。（5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點是_________________。特異性強、靈敏度高

有絲無菌、無毒的環(huán)境；充足的營養(yǎng)；適宜的溫度和pH；適宜的氣體環(huán)境

第23頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三15、（1）單克隆抗體是指

。（2）制備單克隆抗體的步驟：①將__________注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細胞，其中至少1個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。②將步驟①獲得的B淋巴細胞與步驟②培養(yǎng)的骨髓瘤細胞在_________________的誘導下融合。③將誘導后產(chǎn)生的多種細胞，放在_______培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。④這樣獲得的雜交瘤細胞既具有B淋巴細胞_____________的能力，又具有________________的本領。⑤檢測和分離帶有抗X抗體的陽性細胞，培養(yǎng)板中每孔放一個細胞進行培養(yǎng)。⑥將陽性細胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體?；瘜W性質(zhì)單一，特異性強的抗體

抗原

聚乙二醇選擇性

無限增殖

產(chǎn)生專一抗體第24頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：①體外培養(yǎng)法，可獲得10μg/mL的抗體；②動物體內(nèi)誘生法可獲得5~20mg/mL的抗體。你選擇的方法及原因是

。（4）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因為它是用小鼠的_______細胞制備的，其化學本質(zhì)是___________，應用于人體，會作為

產(chǎn)生

，解決這個問題的方法是_____________________________。大量生產(chǎn)選①，小規(guī)模生產(chǎn)選②效應B蛋白質(zhì)異物免疫反應采用人的效應B細胞制備第25頁，共27頁，2023年，2月20日，星期三15、右圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌抗體的實驗方案。據(jù)圖回答：

（1）該方案能達到預期效果嗎？

。原因是

______________________________________________。

（2）圖中②為

過程，常用

作為誘導劑。該細胞繼承了__________________