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文檔簡介

實驗十DNA的限制性內(nèi)切酶酶切

一、實驗目的了解核酸限制性內(nèi)切酶的特點及其對DNA的酶切過程學會設計構(gòu)建體外重組DNA分子的方法，并根據(jù)目的基因合理選擇載體與限制性內(nèi)切酶以及DNA的酶切技術二、實驗原理EcoRI限制性內(nèi)切酶的識別與切割順序為：5’……G↓AATTC……3’3’……CTTAA↑G……5’XholI限制性內(nèi)切酶的識別與切割順序為：5’……C↓TCGAG……3’3’……TAGCT↑C……5’四、實驗步驟酶切體系：質(zhì)粒DNA5ulEcoRⅠ1ulXholⅠ1ul2×BufferH2ulSw11ulTotal20ul蓋緊上述兩個1.5ml離心管的蓋子，在振蕩器上充分混勻2秒鐘，立即于離心機內(nèi)離心一下，以將管壁上的液體集中于管底。將離心管放置37℃水浴鍋中反應3小時。在酶切反應的同時，制備1.0%的瓊脂糖凝膠，并準備好電泳裝置。五、實驗結(jié)果根據(jù)電泳結(jié)果，描述酶切的結(jié)果與效果。M12←4900bp←1518bp

AnalysisofrecombinantexpressionvectorwithrestrictionenzymeM.

DNAMarker(LambdaDNA/HindIII+EcoRIMarkers)1.pGEX6p-1-hly/BamHI/XhoI2.pGEX6p-1/EcoRI重組質(zhì)粒pGEX6p-1-hly酶切結(jié)果b

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