胚胎干細胞的分離培養(yǎng)技術(shù)

胚胎干細胞的分離培養(yǎng)技術(shù)第一頁，共十五頁，2022年，8月28日第六節(jié)胚胎干細胞技術(shù)

EmbryonicStemcells(EScells)一、概述哺乳動物胚胎干細胞（embryonicstemcells,ES細胞）一般是指從早期胚胎經(jīng)體外分化抑制培養(yǎng)分離出來的具有全能性的細胞。ES細胞是由Evans和Kauf-man1981年首次從延遲小鼠囊胚中分離出來的多能性細胞，當時稱之為EK細胞。以后稱之為胚胎干細胞。第二頁，共十五頁，2022年，8月28日人胚胎干細胞分離技術(shù)途徑ICMPGCs第三頁，共十五頁，2022年，8月28日ES細胞的特點：ES細胞具有胚胎細胞的特性，在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小、核大，核仁突出，培養(yǎng)時呈克隆狀生長；在功能上，ES細胞具有發(fā)育的全能性，即具有分化為成年動物體內(nèi)任何一種細胞類型的能力。ES細胞具有細胞系的特征，在飼養(yǎng)層上能維持未分化狀態(tài)并實現(xiàn)自我更新。因為可無限增殖，也可冷凍保存。第四頁，共十五頁，2022年，8月28日二、胚胎干細胞研究的意義ES細胞在哺乳動物個體發(fā)生發(fā)育規(guī)律的研究中極有價值的工具；ES細胞是研究細胞分化的理想手段；圖ES細胞是研究基因功能的首選細胞；Es細胞作為生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物的主要途徑之一；ES細胞治療技術(shù)將引起一場醫(yī)學革命；ES細胞可用于研究細胞癌變機理和新藥物的篩選。第五頁，共十五頁，2022年，8月28日二、胚胎干細胞研究的歷史1、1981年Evans和Kaufman獲得小鼠ES細胞系2、1988年Doetschman獲得倉鼠ES細胞系3、1994年Wheeler和Robert獲得豬ES細胞系4、1998年Thomson獲得人的ES細胞系5、2007年日本的Yamanaka研究小組和美國的JamesThomson研究小組分別獲得誘導多能性干細胞（inducedpluripotentstemcell，iPS細胞）第六頁，共十五頁，2022年，8月28日四、胚胎干細胞分離培養(yǎng)的基本程序(一)選擇抑制細胞分化的培養(yǎng)體系1、飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系2、條件培養(yǎng)體系3、培養(yǎng)液中添加分化抑制因子體系第七頁，共十五頁，2022年，8月28日四、胚胎干細胞分離培養(yǎng)的基本程序（二）早期胚胎的選擇（三）胚胎干細胞的分離（四）胚胎干細胞的保持（五）胚胎干細胞的鑒定（六）胚胎干細胞的分化潛力驗證第八頁，共十五頁，2022年，8月28日五、胚胎干細胞技術(shù)目前存在的問題和發(fā)展遠景1、根據(jù)細胞的分化特點建立更有效的培養(yǎng)體系2、加強胚胎干細胞體外誘導分化研究3、提高家畜胚胎干細胞的分離水平4、加速胚胎干細胞在醫(yī)學上的應(yīng)用第九頁，共十五頁，2022年，8月28日第七節(jié)嵌合體Chimera

嵌合體動物：指由2個以上不同的受精卵或3個以上的配子相結(jié)合，有不同基因型的細胞群所構(gòu)成的復(fù)合體。嵌合體動物制作方法：1、集合（凝集）法：在卵裂階段使2個以上的胚胎發(fā)生粘著和結(jié)合。2、注入法：在臨近著床的胚泡期，用顯微操作方法將另一個體的細胞注入到囊胚腔中。

第十頁，共十五頁，2022年，8月28日研究現(xiàn)狀：

家畜的嵌合體不但已在個體間和品種間取得成功（綿羊、牛等），而且在異種間也得到了活的后代，如綿山羊人工嵌合體，該技術(shù)對遺傳學研究具有重要意義，塑造特異性狀的新奇物種，從而為動物園展示了新的前景，嵌合體也被用來研究免疫學系統(tǒng)的機理。第十一頁，共十五頁，2022年，8月28日哺乳動物嵌合體生產(chǎn)基本方法示意圖12第十二頁，共十五頁，2022年，8月28日小鼠胚胎囊胚腔注入嵌合法第十三頁，共十五頁，2022年，8月28日嵌合體豬Femalepiglet6899developedfromaDuroc-Pietrainblastocyst(redandblackpigmentation)injectedwithGermanLand-racePGCs(whitepigmentationonheadandlegs).

(B)Chimericpiglets7003(male)and7006(female)withredareasacrossthebackdevelopedfrom‘‘red’’DuroccellsinjectedintoLandraceblastocy