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（完整版）微生物室sop文件細菌室操作規(guī)程鶴壁市中醫(yī)院檢驗科（完整版）微生物室sop文件目錄第一篇細菌室操作程序文件TOC\o"1-5"\h\z細菌室人員崗位職責 。1標本采集及保存要求 3顯微鏡檢查法操作規(guī)程 5細菌室標本操作流程 6細菌的形態(tài)檢查操作規(guī)程 86,細菌生化反應(yīng)鑒定及其它實驗操作規(guī)程 117,細菌的接種與培養(yǎng)方法操作規(guī)程 1 78.支原體培養(yǎng)、鑒定及藥敏操作規(guī)程 1 99,血液感染病原體檢驗操作規(guī)程 2 0.中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染病原體檢驗操作規(guī)程 2 211,下呼吸道感染病原體檢驗操作規(guī)程 2 4.尿路感染病原體檢驗操作規(guī)程 2 6.消化道感染病原體檢驗操作規(guī)程 2 9.膿汁及病灶分泌物細菌學檢驗操作規(guī)程 3 1.生殖系統(tǒng)標本的處理 3 3.抗菌藥物敏感試驗 3 4第二篇醫(yī)院微生物感染控制檢測.消毒滅菌效果監(jiān)測 37.環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測 。38（完整版）微生物室sop文件.采樣及檢查原貝U o o o 39.各部位的消毒 4 3細菌室人員崗位職責1、上班后先搞好室內(nèi)衛(wèi)生、核查各個培養(yǎng)箱、冰箱的工作溫度是否在設(shè)定的范圍內(nèi)，并做好記錄。檢查各種儀器工作是否正常，做好記錄。2、接收樣本：核對各樣本號與申請單聯(lián)號是否一致，如不一致馬上與病房聯(lián)系以便作出相應(yīng)的處理，如退單或重送樣本等，并做好聯(lián)系情況的記錄。核查各送檢樣本是否符合要求。①痰液樣本：先看外觀、再直接涂片鏡檢，以白細胞225個/低倍鏡視野，而上皮細胞W10個/低倍鏡視野，為合格痰液。②無菌體液樣本:檢查各種無菌體液樣本的盛放器皿是否符合要求。③容易干燥的樣本：對一些容易干燥的樣本如大便、咽拭子、膿液拭子、泌尿生殖道拭子等是否已經(jīng)干燥.對不符合要求的樣本必需與臨床聯(lián)系，以便作出相應(yīng)處理，方法如聯(lián)號不符的樣本，做好記錄.對符合的樣本進行原始單的登記.3、樣本編號:對符合的樣本作出編號，普通細菌培養(yǎng)：痰液、咽拭子、血液增菌培養(yǎng)、尿液、胸、腹水、腦脊液、膽汁、膿液、泌尿生殖道拭子、大便致病菌培養(yǎng)。在各種培養(yǎng)基上及申請單上編號的同時均需明確標明接種日期。4、樣本接種：①血液、骨髓、腹水、關(guān)節(jié)液等：增菌培養(yǎng)瓶；②痰液、咽拭子：血平板、麥康凱平板；③尿液:血平板、麥康凱平板；（完整版）微生物室sop文件大便致病菌：$$平板；腦脊液：血平板、巧克力平板；分泌物的淋球菌培養(yǎng)接種：淋球菌專用平板；支原體培養(yǎng)+藥敏：按說明書接種支原體專用培養(yǎng)基。對以上接種樣本的當前編號應(yīng)記錄于登記本上。此外對痰、膿液、腦脊液等在接種的同時應(yīng)對其沉渣進行革蘭染色，如有細菌和或何種細菌為主立刻通知臨床，并做好記錄。5、查對昨天移種平板申請單及原始登記本，確定標本移種是否正確。觀察血液增菌培養(yǎng)瓶，如發(fā)現(xiàn)有細菌生長，馬上涂片革蘭染色，將細菌的染色特性及形態(tài)報告給臨床，并做好記錄，同時進行移種。6、觀察平板，挑取可疑菌落涂片革蘭染色，并做好細菌的鑒定與藥敏實驗工作.7、檢查各種培養(yǎng)基及試劑的庫存量，做好需配制培養(yǎng)基或購買試劑的交班工作.8、定期做好本室所用鑒定和藥敏試條的質(zhì)控，做好記錄。9、每天必須消毒平板、基礎(chǔ)培養(yǎng)基等用于常規(guī)醫(yī)院感染監(jiān)測，另外根據(jù)具體情況即時準備好各種中和劑、無菌瓶等，對48小時的空氣培養(yǎng)出報告，同時注意是否有致病菌、菌落數(shù)是否超標.10、工作完成后注意對工作臺面進行消毒、室內(nèi)進行消毒。（完整版）微生物室sop文件標本采集及保存要求1、總則：用于細菌培養(yǎng)的標本在收集時應(yīng)注意嚴格無菌操作和及時送檢，檢測后標本應(yīng)妥善保存。2、臨床標本的采集下呼吸道分泌物（痰液）令患者早上起床后用清水瀨口，不要刷牙，立即從下部呼吸道咳出第一口痰，吐在無菌塑料痰盒中，及時送檢。尿液（中段尿）護理人員協(xié)助采取中段尿約3ml入無菌塑料盒中，及時送檢。2。3、糞便取有粘液、膿血部分的糞便置無菌塑料盒中及時送檢。2。4、眼、耳、鼻、喉拭子將棉拭子沾取少許無菌生理鹽水（如沾取的太多，可在無菌生理鹽水瓶壁上擠去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒懸于無菌塑料盒中，及時送檢。膿液（完整版）微生物室sop文件用沾有生理鹽水的棉拭子沾取膿液，要盡量多取一些，然后將棉拭置于無菌塑料盒中，及時送檢。血液2。6。1、凡懷疑菌血癥和敗血病的患者，采血培養(yǎng)時，應(yīng)盡量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素，應(yīng)盡量選擇抗菌素在體內(nèi)濃度最低時采血，應(yīng)在病人第二次使用抗菌素之前采集血培養(yǎng)標本。當然在病人發(fā)熱或寒顫時采集也可。2。6.2、成人每次采血5~10m1，小兒采血3~5ml。3、嚴格消毒病人采血部位和血培養(yǎng)瓶口，抽一定量血液后，無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，輕輕搖勻。2。6.4、從抽血到接種入瓶，動作要快，防止血液凝固，同時要及時送檢。穿刺液胸腹水、心包液、關(guān)節(jié)腔液、鞘膜積液，嚴格無菌抽取后，注入含肝素抗凝的無菌試管中，輕輕顛倒試管10余次，使肝素與穿刺液混勻達到抗凝的目的，或直接無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)及時送檢。膽汁由?？漆t(yī)生以無菌方法取引流液10m1注入無菌塑料盒內(nèi)。2。9、腦脊液以無菌方法取腦脊液3?5ml,置無菌試管內(nèi)，常溫保存送檢，如只做培養(yǎng)可直接無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，及時送檢.2。10、生殖器官標本陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無菌塑料盒內(nèi)送檢。如疑為淋病奈瑟菌感染，做培養(yǎng)檢查時，采集的標本應(yīng)床旁接種并及時放入孵箱培養(yǎng)。2。11、燒傷標本（完整版）微生物室sop文件以無菌棉拭子直接采取多個部位創(chuàng)面的膿汁分泌物放入無菌塑料盒中。2。12、支原體（解脲、人型）培養(yǎng)+藥敏的標本采集2。12。1、支原體對干、熱抵抗力差，標本采集后應(yīng)盡快接種支原體運送培養(yǎng)基送檢。、男性：用細的無菌棉拭子沾取無菌鹽水少許深入尿道口內(nèi)2~2。5cm。3、臨床標本的保存細菌室標本原則上要求及時送檢、及時處理，不得保存。顯微鏡檢查法操作規(guī)程顯微鏡檢查是細菌鑒定工作中的一重要手段，有助于細菌的初步鑒別，同時對下一步鑒定工作起著重要的指導作用。有時通過形態(tài)學檢查可得到初步診斷，如痰中的抗酸桿菌和泌尿生殖道分泌物中的淋病奈瑟菌等。顯微鏡檢查有不染色標本檢查法和染色標本檢查法兩種.1、不染色標本的檢查：不染色標本主要用于檢查細菌的動力及運動狀況。1。1、壓滴法：用接種環(huán)取細菌懸液2環(huán)，置于清潔載玻片中央，覆上蓋玻片，于高倍鏡下觀察.制片時菌液要適量，不可有氣泡，不可外溢.1.2、懸滴法：取潔凈的凹窩載玻片及蓋玻片各1塊，將凹孔四周的平面上涂上一層凡士林，取一環(huán)菌液置蓋玻片中央，將凹窩載玻片的凹面向下，對準于蓋玻片的液滴上，然后迅速翻轉(zhuǎn)（完整版）微生物室sop文件玻片，用小鑲子輕壓蓋玻片使之與凹孔邊緣粘緊。鏡下觀察時先低倍后高倍，不可壓碎蓋玻片。有動力的細菌可見細菌從一處移到另一處，無動力的細菌呈布朗運動而無位置的改變.螺旋體由于菌體纖細、透明，需用暗視野顯微鏡觀察其形態(tài)、活動。2、染色標本檢查法：通過對標本的制片及染色，能觀察細菌的形態(tài)、大小、排列、染色特性以及莢膜、芽胞、異染顆粒等結(jié)構(gòu)，有助于細菌的初步鑒定.2。1、快速革蘭染色法2.1.1、操作見試劑說明書2.1。2、結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。2。1。3、注意事項：染色關(guān)健在于涂片和脫色，涂片不宜過厚，固定不宜過熱，脫色不宜過度，菌齡為18?24小時為佳。2。2、抗酸染色法2。2.1、操作見試劑說明書2.2.2、結(jié)果：抗酸桿菌呈紅色。2。2。3、注意事項:每一張玻片只能涂一份標本且不能在染色缸中染色，以免造成不同標本間的交互污染從而導致陰陽性結(jié)果混淆，至無紅色液體流下.3、墨汁負染鏡檢：背景著色而菌體不著色的染色法，用以觀察新型隱球菌的寬厚莢膜等.菌室標本操作流程1、標本的接受標本接受的時間：原則上全天任何時間均可。1。2、標本的接受：接受標本者要認真核對標本的數(shù)量、標本與檢驗單要求是否相符以及標本的質(zhì)量等。1.3、把接受的標本編號。（完整版）微生物室sop文件2、臨床標本的接種檢驗?zāi)康氖羌毦囵B(yǎng)+藥敏試驗.各臨床標本的培養(yǎng)基選擇如下:1培養(yǎng)基的選擇標本類型培養(yǎng)基血血培養(yǎng)瓶中段尿血平板、麥康凱平板腦脊液血平板、巧克力平板穿刺液血平板、麥康凱平板膽汁血平板、麥康凱平板呼吸道標本血平板、麥康凱平板糞便標本SS平板病灶分泌物血平板、麥康凱平板2、生殖器標本根據(jù)臨床醫(yī)生所寫的檢驗項目接種相應(yīng)的平板，操作如下：淋球菌培養(yǎng)接種淋球菌平板；念珠菌培養(yǎng)接種沙保羅培養(yǎng)基；支原體培養(yǎng)則按《支原體培養(yǎng)的操作規(guī)程》操作；作普通細菌培養(yǎng)，則接種血平板和巧克力平板;衣原體抗原檢測的按《衣原體抗原檢測的操作規(guī)程》進行檢驗.2。2、接種的方法：標本做分區(qū)劃線。2。3、檢驗?zāi)康臑檎铱顾釛U菌的按《找抗酸桿菌的操作規(guī)程》進行檢驗。3、所接種的平板必須寫上標本的編號和接種的日期，然后根據(jù)要求進行培養(yǎng)。4、標本的培養(yǎng)條件、溫度、時間平板 培養(yǎng)條件、溫度、時間

（完整版）微生物室sop文件血平板孵箱、35—37℃、18-24小時巧克力平板孵箱、（完整版）微生物室sop文件血平板孵箱、35—37℃、18-24小時巧克力平板孵箱、35—37℃、18-24小時淋球菌平板孵箱、35-37℃、18—24小時沙保羅平板孵箱、28-31℃、24—36小時其他的平板孵箱、35—37℃、18-24小時5、根據(jù)生長在平板上的細菌菌落形態(tài)、菌落涂片、染色、鏡檢等來綜合判斷細菌形態(tài)和染色性質(zhì)，按各屬鑒定的作業(yè)指導書進行各菌屬的常規(guī)鑒定及藥敏試驗。6、結(jié)果的報告確認細菌鑒定及藥敏試驗結(jié)果后，進行檢驗驗單結(jié)果報告的存盤、打印.7、對各類細菌培養(yǎng)標本除特殊要求外，我室一般操作完后按要求進行無害化處理。細菌的形態(tài)檢查操作規(guī)程（完整版）微生物室sop文件1、不染色標本的檢查壓滴法和懸滴法。主要用于檢查生活狀態(tài)下的細菌的動力及運動狀況。將特制好的標本置于顯微鏡載物臺中央，先以低倍鏡觀察,再用高倍鏡觀察。結(jié)果：有鞭毛的細菌呈穿梭似流星狀運動（有明顯的方向性）；無鞭毛的細菌呈布朗運動（只在原地顫動而無位置的改變）。2、細菌染色標本的檢查染色的第一步是制作涂片。菌落涂片時，先取生理鹽水l滴，置玻片上，用接種針挑取菌落，在鹽水中涂布。涂片時必須注意應(yīng)輕輕操作。猛烈的動作會改變菌細胞原有的排列形式，或造成細菌鞭毛脫落，影響結(jié)果的準確性。制備的涂片應(yīng)自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定溫度不宜過高，以玻片背面接觸手背不燙為準，否則可能使細胞形態(tài)改變。將固定后的涂片進行染色.革蘭染色本染色是最基本的染色法，可用于標本涂片或菌落涂片。染色結(jié)果將細菌分為革蘭陽性（紫色）和革蘭陰性（紅色）兩類.試劑（1）結(jié)晶紫溶液TOC\o"1-5"\h\zA液： 結(jié)晶紫 2g95%乙醇 20mlB液： 草酸銨 0。8g蒸餾水 80ml需在用前24h將A液、B液混合，過濾后裝入試劑瓶內(nèi)備用。（2）碘液碘 lg碘化鉀 2g9

(完整版)微生物室sop(完整版)微生物室sop文件300ml碘與碘化鉀混合并研磨，加入幾毫升水，使其逐漸溶解，然后研磨，繼續(xù)加入少量蒸餾水至完全溶解。最后補足水量。300ml也可用少量蒸餾水，先將碘化鉀完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。(3)脫色液：95%乙醇。(4)復染液TOC\o"1-5"\h\z貯存液：沙黃 2.5g95%乙醇 100ml應(yīng)用液：A液 10ml蒸餾水 90ml染色方法：.涂片經(jīng)火焰固定，加結(jié)晶紫液染1由汨，清水沖去染液。.加碘液染1min,水洗..加脫色液，不時搖動約10?30s,至無紫色脫落為止，水洗..加復染液，染30s,水洗。.干后鏡檢。2。2、抗酸染色抗酸染色直接用于痰標本時，可以適當增加標本涂片的厚度，以提高檢出率。染厚涂片時，須掌握復染色時間.如果背景過深，影響鏡檢。奴卡菌及放線菌可呈弱抗酸性，取培養(yǎng)菌落涂片染色時，呈現(xiàn)兩種現(xiàn)象，視野中有些菌陽性，另外一些則陰性；有時同一個菌體上，紅色的深淺亦有不同，觀察時應(yīng)予注意.試劑(1)、石炭酸復紅溶液10

(完整版)微生物室sop文件(完整版)微生物室sop文件堿性復紅乙醇飽和溶液10mlTOC\o"1-5"\h\z5%石炭酸溶液 90ml(2)、脫色劑濃鹽酸 3ml95%乙醇 97ml(3)、復染液(呂弗勒美藍液)美藍乙醇飽和溶液 30ml10%氫氧化鉀 0。1m1蒸餾水 100ml染色方法(1)、涂片經(jīng)火焰固定，加石炭酸復紅溶液，徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn)，切不可沸騰，持續(xù)約5min(若染色奴卡菌需要加長時間)，水洗。(2)、加脫色劑，不時搖動玻片至無紅色脫落為止，水洗。(3)、加復染液，染0.5?lmin,水洗。(4)、干后鏡檢.分枝桿菌呈紅色，背景為藍色。注：奴卡菌、放線菌標本染色時，脫色劑改用2%硫酸水溶液。、墨汁莢膜染色用于觀察菌體有無莢膜結(jié)構(gòu)，借此鑒定某些菌，如新型隱球菌。傳統(tǒng)的方法是用印度墨汁，但目前國內(nèi)無售.常規(guī)工作可以用墨汁或墨水代替，但應(yīng)注意顆粒不能太粗，否則影響觀察結(jié)果。有人用5%黑色素水溶液做染料，效果較好。試劑印度墨汁或5%黑色素水溶液。染色方法11（完整版）微生物室sop文件將標本與1滴染色液在載玻片上混合，加上蓋玻片，輕輕壓一下，使標本混合液變薄。在低倍鏡下尋找有莢膜的菌細胞。找到后，轉(zhuǎn)換高倍鏡確認。細菌生化反應(yīng)鑒定及其它試驗操作規(guī)程1、氧化-發(fā)酵試驗（O-F試驗）原理：細菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型.可以進行無氧降解的，稱為發(fā)酵型（發(fā)酵型細菌在有氧無氧的條件下均能分解葡萄糖）。不分解葡萄糖的細菌稱為產(chǎn)堿型。方法：將待檢細菌同時穿刺接種兩支Hugh-Leifson培養(yǎng)基，其中一支培養(yǎng)基滴加無菌石蠟（或其它礦物油），高度不少于lcm。35℃，24小時或更長。結(jié)果：培養(yǎng)基變黃表示細菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，兩支培養(yǎng)基均無變化為產(chǎn)堿型或不分解糖型；兩支培養(yǎng)基均均產(chǎn)酸為發(fā)酵型。若僅不加石蠟的培養(yǎng)基產(chǎn)酸為氧化型。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細菌與非發(fā)酵細菌的鑒別，前者均為發(fā)酵型，而后者均為氧化型或產(chǎn)堿型。也可用于葡萄球菌與微球菌問的鑒別。2、B-半乳糖苷酶（ONPG）試驗12（完整版）微生物室sop文件原理：細菌產(chǎn)生半乳糖苷酶，分解鄰一硝基酚B-D-半乳糖苷（無色）生成鄰一硝基酚（黃色）。結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽性反應(yīng)，一般在20—30分鐘內(nèi)顯色.應(yīng)用：主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。3、七葉苷水解試驗原理：有的細菌可將七葉苷分解成葡萄糖和七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中的枸檬酸鐵的二價鐵離子反應(yīng)，生成黑色的化合物。結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不變色為陰性。應(yīng)用：主要用于。群鏈球菌與其它鏈球菌的鑒別。前者為陽性，后者為陰性。也可用于革蘭陰性菌與厭氧菌的鑒別。4.甲基紅試驗原理：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進一步分解，產(chǎn)生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基pH值降至4.5以下，加入甲基紅呈現(xiàn)紅色為陽性。若細菌分解葡萄糖產(chǎn)生的酸少，或產(chǎn)生的酸進一步轉(zhuǎn)化為其他產(chǎn)物，則培養(yǎng)基pH值仍在6.2以上，加入甲基紅呈現(xiàn)黃色為陰性。結(jié)果：呈現(xiàn)紅色為陽性，橘紅色為弱陽性。黃色為陰性。應(yīng)用：主要用于鑒別大腸桿菌與產(chǎn)氣桿菌，前者陽性，后者陰性。此外腸桿菌科中變形桿菌屬、沙門菌屬、枸檬酸桿菌屬和志賀菌屬等陽性，而腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬則為陰性。5、VP試驗原理：某些細菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫竣產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在堿性環(huán)境中，氧化為二乙酰，與精氨酸中的胍基作用生成紅色化合物。結(jié)果:在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽性，如無紅色出現(xiàn)且于35℃4h后仍如故者即為陰性。應(yīng)用：本試驗與甲基紅試驗一起使用，因為前者陽性的細菌，后者通常為陰性.13（完整版）微生物室sop文件6、吲味（靛基質(zhì)）試驗原理：細菌分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲味（靛基質(zhì)），加入對位二甲基苯甲醛生成紅色玫瑰吲味。結(jié)果：于兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽性，無色為陰性.應(yīng)用：主要用于腸桿菌科的鑒定。6、尿素分解試驗原理:具有尿素酶（尿酶）的細菌，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，培養(yǎng)基變堿。結(jié)果：培養(yǎng)基呈堿性，使酚紅指示劑變紅為陽性，不變色為陰性。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細菌的鑒定，奇異變形桿菌、普通變形桿菌為陽性，克雷伯菌屬、枸椽酸菌屬、雷氏普羅威登菌和摩根摩根菌為陽性。7、苯丙氨酸脫氨酶試驗原理：某些細菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶使苯丙氨酸脫氨生成苯丙酮酸，加入FeCl3生成綠色化合物。結(jié)果：出現(xiàn)綠色為陽性，應(yīng)立即觀察結(jié)果，延長會引起退色。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科的鑒定，變形桿菌屬、普羅威登斯菌和摩根摩根菌均為陽性.腸桿菌科其它菌均為陰性.8、氨基酸脫竣酶試驗原理:具有氨基酸脫竣酶的細菌，分解氨基酸脫竣生成胺和CO/吏培養(yǎng)基變堿,指示劑改變顏色。結(jié)果：對照管應(yīng)呈黃色，測定管呈紫色（指示劑為溴甲酚紫）為陽性。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。9、氧化酶試驗原理：氧化酶是細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸酶.具有氧化酶的細菌，首先使細胞色素C14

（完整版）微生物室sop文件氧化，再由氧化型細胞色素C使對苯二氨氧化.生成有色醌類化合物。結(jié)果：細菌在與試劑接觸10秒內(nèi)呈紫色為陽性.為保證結(jié)果準確性，應(yīng)作陰、陽性對照。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科與假單胞菌的鑒別，前者為陰性。后者為陽性。10、過氧化氫酶試驗（觸酶試驗）原理：具有過氧化氫酶的細菌，能催化過氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。試劑：3%過氧化氫溶液方法：取菌置于潔凈的試管或玻片上，然后滴加3%過氧化氫數(shù)滴；或直接滴加3%過氧化氫于不含血液的細菌培養(yǎng)基中，立即觀察結(jié)果。結(jié)果：有大量氣泡產(chǎn)生為陽性。不產(chǎn)生氣泡為陰性。應(yīng)用：革蘭陽性球菌中，葡萄球菌和微球菌均陽性。而鏈球菌均陰性。11、硝酸鹽還原試驗原理：包括兩個過程：一是在合成過程中，硝酸鹽還原為亞哨酸鹽和氨。再由氨轉(zhuǎn)化為氨基酸和細菌內(nèi)其它含氮化合物。二是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的受氫體，能使硝酸鹽還原的細菌從哨酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其它還原性產(chǎn)物。結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性。若加入試劑后無顏色變化反應(yīng)，可能是①硝酸鹽沒有被還原，試驗陰性。②硝酸鹽被還原為氨和氮等其它產(chǎn)物而導致假陰性，這時應(yīng)加入少許鋅粉，如出現(xiàn)紅色則表明試驗確實為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表明為試驗為假陰性。應(yīng)用：本試驗在細菌鑒定中應(yīng)用廣泛。12、氧化酶（改良法）試驗試劑：四甲基對苯二胺（TMPD）6。0g二甲基亞砜（DMSO）100.oml二甲基亞砜（DMSO）100.oml15（完整版）微生物室sop文件溶解TMPD于DMSO中，置于避光玻塞瓶中，可在室溫中保留幾個星期。方法:被檢菌株移種于7%羊血瓊脂上，30℃需氧條件下孵育15?18h,刮取菌落涂布于無色濾紙片上，加l滴上述試劑，陽性者在2由5內(nèi)呈深藍色。若被測菌株移種在蛋白胨酵母浸出液瓊脂上，至少孵育3天以上，才可檢測，陽性反應(yīng)5?10min出現(xiàn)。13、CAMP試驗原理：B群鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，可促進葡萄球菌的B-溶血素溶解紅細胞活性，因此在兩菌的交界處溶血力增加。出現(xiàn)矢形（半月形）的溶血區(qū)。結(jié)果：在兩劃線交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血區(qū)為陽性應(yīng)用：在鏈球菌中，只有8群鏈球菌CAMP試驗陽性。14、O/129抑菌試驗原理：O/129（二氨基喋啶）對弧菌屬、鄰單胞菌屬細菌有抑制作用，而對氣單胞菌無抑制作用.方法:將待檢菌均勻涂布于堿性瓊脂平板上，鑲?cè)/129紙片（含藥40ug）貼于平板上,35℃,18?24h,觀察結(jié)果.結(jié)果：出現(xiàn)抑菌環(huán)為敏感，無抑菌環(huán)為耐藥應(yīng)用：弧菌屬、鄰單胞菌屬對O/129敏感，而氣單胞菌屬耐藥15、桿菌肽試驗原理"群鏈球菌對桿菌肽幾乎全部敏感，而其它鏈球菌絕大多數(shù)對其耐藥.16、奧普托欣試驗原理：幾乎所有的肺炎鏈球菌對Optochin敏感，而Optochin對其它鏈球菌則無抑制作用17、.H2s試驗原理：有些細菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸（如胱胺酸、半胱胺酸）產(chǎn)生硫化氫，硫化氫16(完整版)微生物室sop文件遇到鉛或亞鐵離子，則生成黑色的硫化鉛或硫化鐵。結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不變?yōu)殛幮?。?yīng)用：主要用于腸桿菌科屬或種的鑒定。18、觸酶試驗(過氧化氫酶試驗)試劑：3%H202溶液，置棕色瓶內(nèi)于4℃陰暗處保存。方法：先挑取固體培養(yǎng)基上的菌落，置于潔凈的玻片上，然后滴加3%過氧化氫溶液1?2滴。靜置之，仙仙內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡的為陽性，不產(chǎn)生氣泡的為陰性。19、葡萄球菌凝固酶和凝聚因子試驗葡萄球菌凝固酶試驗被廣泛地用于常規(guī)鑒定金黃色葡萄球菌與其他葡萄球菌。試管法凝固酶試驗稱為葡萄球菌凝固酶，玻片法為檢測凝聚因子。19。1凝聚因子試驗：取1滴蒸餾水于潔凈的玻片上，用接種環(huán)挑取待檢菌一環(huán)置于蒸餾水中，制成濃的菌懸液，無自凝現(xiàn)象。然后加一環(huán)家兔血漿混合，10$內(nèi)觀察結(jié)果，出現(xiàn)明顯細菌凝塊為陽性，否則為陰性。如超過10$可出現(xiàn)假陽性，有10%~15%金黃色葡萄球菌呈假陰性，因此必須用試管法驗證凝聚因子試驗。操作過程中的注意點：(1)10s內(nèi)觀察結(jié)果。(2)必須制備濃厚的均勻菌懸液。(3)用EDTA抗凝的兔血漿為最好。(4)加血漿后不要再混攪，以免細菌凝塊分散變小。(5)生長在高鹽培養(yǎng)基上的菌落可出現(xiàn)自凝或假陽性。19.2葡萄球菌凝固酶試驗：用生理鹽水將血漿4倍稀釋，取0。5ml。然后挑取3?5個菌落于稀釋血漿中，成濃菌懸液。置37℃水浴，3?4h后讀取結(jié)果，凝固者為陽性。若陰性，繼續(xù)觀察到24h,不凝固者為陰性。試驗應(yīng)同時作陽性、陰性對照.17（完整版）微生物室sop文件試管法葡萄球菌凝固酶試驗陽性者，應(yīng)見到明顯的纖維蛋白凝膠塊，出現(xiàn)羊毛狀或纖維狀沉淀物并非真正凝固，應(yīng)判為陰性.中間型葡萄球菌、豬葡萄球菌需要較長時間孵育，才可出現(xiàn)陽性。凝固酶試驗應(yīng)考慮下述情況：①某些金黃色葡萄球菌產(chǎn)生溶纖維蛋白酶，溶解纖維蛋白凝塊。②所用血漿缺乏纖維蛋白原。③試驗菌株不純。結(jié)果：玻片法以血漿中有明顯的顆粒出現(xiàn)而鹽水中無自凝現(xiàn)象判為陽性；試管法以血漿凝固為陽性.應(yīng)用：作為鑒定葡萄球菌致病性的重要指標，也是葡萄球菌鑒別時常用的一個試驗。20、新生霉素耐藥試驗方法：挑取待檢菌菌落數(shù)個，制成相當0。5號麥氏管（McFarland）濃度菌液，棉拭子浸透，擠去多余液，均勻涂在M—H平板上，貼上含5ug/片的新生霉素紙片，35℃孵育16?20h,抑菌環(huán)直徑W16為陽性（耐藥）。試驗時應(yīng)以金黃色葡萄球菌人丁。。25923做陰性（敏感）對照，以確認紙片是否有效。18（完整版）微生物室sop文件細菌的接種與培養(yǎng)方法操作規(guī)程一、細菌的接種根據(jù)待檢標本的來源、培養(yǎng)目的及所用培養(yǎng)基的性狀，采用不同的接種方法。1、平板畫線分離法（1）、連續(xù)畫線分離法此法主要用于雜菌不多的標本.用接種環(huán)取標本少許，于平板l/5處密集涂布，然后回來作曲線連續(xù)劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。（2）、分區(qū)畫線分離法此法適用于雜菌較多的標本。先將標本均勻涂布于平板邊緣一小區(qū)（約占平板1/5），再在二、三區(qū)依次連續(xù)畫線，每畫線一區(qū)均將接種針滅菌一次.每一區(qū)的劃線均接觸上一區(qū)的接種線1?2次。以獲得單個菌落.2、斜面接種法該法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)。用滅菌接種針取菌少許，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一直線，然后從底部向上作連續(xù)曲線畫線.一直畫到斜面頂端。3、液體接種法多用于一些液體生化試驗管的接種.用滅菌接種環(huán)取菌少許，在試管內(nèi)壁與液面交接處的管壁上輕輕研磨，使細菌混合于液體中。4、穿刺接種法主要用于半固體培養(yǎng)基、明膠及雙糖鐵的接種。用接種針取菌少許，從半固體培養(yǎng)基中央平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接觸管底，然后接種針原路退出.5、傾注平板法19（完整版）微生物室sop文件臨床上主要用于尿液等標本的細菌計數(shù)。將標本經(jīng)適當稀釋后，取一定量加入已滅菌的平皿內(nèi)，傾入已經(jīng)溶化并冷卻至45℃左右的定量培養(yǎng)基，混勻，待凝固后倒置、培養(yǎng)。6、涂布接種法常用于紙片藥物敏感性測定，也可用于被檢標本的細菌計數(shù).加定量的被檢菌液于瓊脂平板表面，然后用滅菌的棉簽反復涂布幾次，使被檢菌均勻分布在瓊脂平板表面。然后貼上藥敏紙片培養(yǎng)，或直接培養(yǎng)觀察結(jié)果.二、細菌培養(yǎng)方法根據(jù)臨床初步診斷及待檢細菌的種類，可選用不同的環(huán)境進行培養(yǎng).常用的有需氧培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。1、需氧培養(yǎng)法本法是臨床細菌室常用的培養(yǎng)方法，即將已經(jīng)接種好的平板、斜面和液體培養(yǎng)基等。置于35℃溫箱中孵育18?24小時.2、二氧化碳培養(yǎng)法本室用。。「孵箱將已接種好的培養(yǎng)基置于co2孵箱內(nèi)培養(yǎng).三、分離及純化法分離是指從原材料或多種細菌的混合培養(yǎng)物中將各種細菌彼此獨立地分離開，以得到純的單一菌株，技術(shù)步驟如下：作純培養(yǎng)分離時，一般只用一只完整的瓊脂平板。涂劃多采用分區(qū)劃線法，在一只平板中可劃3~5個區(qū).劃法有兩種：從臨床標本分離細菌所含菌數(shù)相對較少時，可用接種環(huán)取標本涂布在平板一角邊緣，然后從此區(qū)開始劃線至1/3平板，為第一區(qū)，再在2、3區(qū)依次劃線，每劃完一個區(qū)域均將接種環(huán)滅菌一次，冷卻后再劃下一區(qū)域，每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線廠2次，使菌量逐漸減少以獲得單個菌落。20（完整版）微生物室sop文件3。1.2、快速劃線分離法：采用快速劃線使一接種環(huán)標本能分離出單個菌落，這與標本的菌量及操作者的技能有很大關(guān)系。純化是指欲獲得大量純培養(yǎng)物的方法，所用平板大小可根據(jù)需要的菌量而定。方法是將一單個菌落或?qū)⑾嗤木渥鞔罅棵芗縿澯谄桨迳隙@得大量純的培養(yǎng)物。支原體培養(yǎng)、鑒定及藥敏操作規(guī)程.原理及依據(jù)標準：支原體分離鑒定培養(yǎng)基用于泌尿生殖道支原體（解脲支原體Uu和人型支原體Mh）的檢測與診斷。當有Uu和Mh生長，分解尿素和精氨酸引起PH上升，使以酚紅為指示劑的培養(yǎng)基由黃轉(zhuǎn)紅。依據(jù)珠海迪爾生物工程有限公司生產(chǎn)的試劑盒說明書。.標本的采集：2。1、男性：用特別細的無菌棉拭子沾取無菌生理鹽水少許深入尿道口內(nèi)2~2.5cm處取分泌物，前列腺液亦可用沾取無菌生理鹽水的無菌棉拭子盡量多的沾取。2。2、女性：用沾取少許無菌生理鹽水的棉拭子取宮頸內(nèi)口1?2cm處單層柱狀上皮細胞，取樣拭子不可碰陰道壁.支原體對干、熱抵抗力差，標本采集后應(yīng)立即送檢。整個采樣過程應(yīng)注意無菌操作。3、標本接種：（本實驗應(yīng)注意無菌操作，避免污染雜菌）3。1、取出培養(yǎng)基，放置接近室溫，并在瓶蓋上編號。3。2、將采集的標本拭子插入培養(yǎng)瓶中，在靠近液面上方的瓶壁擠示壓旋轉(zhuǎn)拭子數(shù)次，使21(完整版)微生物室sop文件拭子中標本滲入到肉湯中：若為液體標本，取200u1加入培養(yǎng)基中；若為中段尿，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘取沉渣100ul加入培養(yǎng)基中。蓋上瓶蓋，置35~37℃孵箱，在24?48小時分別觀察結(jié)果。4、結(jié)果判讀：培養(yǎng)基變紅，判斷陽性，培養(yǎng)基黃色并清亮，判斷陰性。5、已檢標本處理：密閉容器高壓滅菌后，按醫(yī)用垃圾處理。血液感染病原體檢驗操作規(guī)程1、標本采集(1)、采集時間和次數(shù)血標本一般應(yīng)在病人發(fā)熱初期或根據(jù)不同的發(fā)熱情況在未用抗生素前采集做細菌培養(yǎng)，提高陽性率需連續(xù)三次采血進行培養(yǎng).(2)、采血部位及抽血量一般抽取肘靜脈血.采血量為成人5~10ml,兒童為3?5ml。(3)、結(jié)果觀察:培養(yǎng)72小時后若肉眼或自動血液培養(yǎng)儀報告仍未細菌生長，則盲目移種一次,仍未細菌生長，向臨床發(fā)出一級初級報告：“血液經(jīng)72小時培養(yǎng)無細菌生長"，為避免漏診，應(yīng)在培養(yǎng)5天、7天時再作盲目移種培養(yǎng)。疑為亞急性細菌性心內(nèi)膜炎、真菌血癥等時，血培養(yǎng)至少連續(xù)培養(yǎng)2?3周，仍無細菌生長方可報告為陰性。2、檢驗程序 血液標本(無菌采集)72h盲目移種(初級報告)3有細菌生長22I i i涂片、染色、鏡檢 需氧培養(yǎng)、CO2培養(yǎng) 直接藥敏試驗

（完整版）微生物室sop文件3、血培養(yǎng)瓶中不同表現(xiàn)為不同細菌生長:渾濁并有凝無塊金黃色葡萄球菌均勻渾濁，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)氣多為革蘭陰性菌微渾濁，有綠色變化肺炎鏈球菌表面有菌膜，培養(yǎng)基清晰，底層溶血枯草桿菌表面有菌膜，膜下有綠色渾濁（完整版）微生物室sop文件3、血培養(yǎng)瓶中不同表現(xiàn)為不同細菌生長:渾濁并有凝無塊金黃色葡萄球菌均勻渾濁，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)氣多為革蘭陰性菌微渾濁，有綠色變化肺炎鏈球菌表面有菌膜，培養(yǎng)基清晰，底層溶血枯草桿菌表面有菌膜，膜下有綠色渾濁銅綠假單胞菌血細胞層上面有顆粒狀生長，自上而下的溶血溶血性鏈球菌4、血液及骨髓標本中常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌肺炎鏈球菌大腸埃希菌金黃色葡萄球菌傷寒及其它沙門菌表皮葡萄球菌變形桿菌溶血性鏈球菌產(chǎn)氣腸桿菌23 （完整版）微生物室sop文件糞腸球菌 肺炎克雷伯氏菌銅綠假單胞菌糞產(chǎn)鹼桿菌沙雷氏菌流感嗜血桿菌布魯氏菌5、報告結(jié)果血培養(yǎng)陽性均作為危急值報告，所以血培養(yǎng)的結(jié)果應(yīng)及時通知臨床醫(yī)生，每日開始工作可以首先檢查血培養(yǎng)，如有細菌生長，立即處理。5。1、疑有細菌生長者，經(jīng)涂片、革蘭氏染色、鏡檢后，電話通知主治醫(yī)生，報告“疑有革蘭氏XX菌生長”。并做藥敏試驗，報告初步結(jié)果。5。2、經(jīng)分純培養(yǎng)完成鑒定及藥敏試驗，發(fā)出報告。5。3、培養(yǎng)7天仍為陰性的標本，報告無細菌生長。臨床上診斷為亞急性細菌性心內(nèi)膜炎者，可持續(xù)培養(yǎng)至兩周再發(fā)陰性報告。中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染病原體檢驗操作規(guī)程1、標本采集以無菌方法采集腦脊液2?5ml,盛于無菌瓶中送檢.2、直接檢查腦脊液可直接涂片、革蘭染色或抗酸染色等，然后鏡檢。無色透明的腦脊液，應(yīng)作離心取沉淀物涂片、染色鏡檢。3、檢驗步驟：3。1、一般細菌涂片檢查除結(jié)核性腦膜炎外，由其它細菌引起的化膿性腦膜炎，腦脊液明24

（完整版）微生物室sop文件顯混濁，可直接涂片，革蘭染色鏡檢。無色透明的腦脊液，應(yīng)離心后涂片、染色、鏡檢，根據(jù)染色及形態(tài)特征可初步提示細菌的種類。結(jié)核分枝桿菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物（3000r/min。30由5）作抗酸染色。新型隱球菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物作墨汁負染色。3.2、分離培養(yǎng)用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或經(jīng)離心沉淀的沉淀物，分別接種于血平板、巧克力平板，巧克力平板應(yīng)置于CO2環(huán)境中35℃培養(yǎng)18?24小時。腦脊液也可直接注入血培養(yǎng)瓶。4、檢驗程序腦脊液分離培養(yǎng)不染色標本 染色標本血平板、巧克力平板（5%CO2環(huán)境）沙氏培養(yǎng)基、血平板革蘭染色 抗酸染色動力試驗?zāi)旧话慵毦X脊液分離培養(yǎng)不染色標本 染色標本血平板、巧克力平板（5%CO2環(huán)境）沙氏培養(yǎng)基、血平板革蘭染色 抗酸染色動力試驗?zāi)旧话慵毦X膜炎奈瑟菌新生隱球菌等一般細菌腦膜炎奈瑟菌結(jié)核分枝桿菌生化鑒定、血清學鑒定藥敏試驗1f初步報告報告初步報告5、腦脊液培養(yǎng)常見病原菌革蘭陰性菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟菌金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟菌A、A、8群鏈球菌肺炎鏈球菌結(jié)核分支桿菌卡他布蘭漢菌流感嗜血桿菌腸桿菌科菌種25

25（完整版）微生物室sop文件（完整版）微生物室sop文件產(chǎn)單核李斯特菌腦膜敗血性黃桿菌假單胞菌新型隱球菌白色念珠菌假單胞菌6、報告結(jié)果無論是涂片還是培養(yǎng)，一但見到陽性菌應(yīng)立即通知臨床醫(yī)師.培養(yǎng)并經(jīng)鑒定的結(jié)果報告“XX菌"，同時報告藥敏試驗結(jié)果。下呼吸道感染病原體檢驗操作規(guī)程1、標本的采集有自然咳痰法、咽拭子采集法、支氣管鏡下采集法及分泌物標本.26

(完整版)微生物室(完整版)微生物室sop文件2、標本的直接檢查(1)、將痰標本涂片后待干，固定、染色，或直接濕片鏡檢，對病原學早期、初步診斷有重要意義。并向臨床發(fā)出初級報告.(2)、一般認為合格的痰標本為：以白細胞225個/低倍鏡視野，而上皮細胞W10個/低倍鏡視野。采集合格標本對細菌的診斷尤為重要。3、分離培養(yǎng)與鑒定(1)、一般要求下呼吸道感染培養(yǎng)的細菌濃度應(yīng)＞107。1^/由1,可視為病原菌，＜10小1^^1可視為污染菌。若介于兩者之間105?106CFU/ml時，要連續(xù)分離培養(yǎng)兩次以上仍為105?106CFU/ml時，亦認為是病原菌。(2)、檢驗程序痰液及下呼吸道分泌物涂片、染色、鏡檢分離培血平板、麥養(yǎng)康凱平板初步報告菌落觀察涂片、染色、鏡檢 純培養(yǎng)細菌鑒定試驗、藥敏試驗報告27涂片、染色、鏡檢分離培血平板、麥養(yǎng)康凱平板初步報告菌落觀察涂片、染色、鏡檢 純培養(yǎng)細菌鑒定試驗、藥敏試驗報告27（完整版）微生物室（完整版）微生物室sop文件4、下呼吸道標本培養(yǎng)常見病原菌革蘭陽性菌金黃色葡萄球菌革蘭陽性菌金黃色葡萄球菌化膿性鏈球菌肺炎鏈球菌結(jié)核分支桿菌革蘭陰性菌腦膜炎奈瑟氏菌流感嗜血桿菌腸桿菌科細菌非發(fā)酵菌白喉棒狀桿菌 嗜肺軍團菌假絲酵母菌5、報告結(jié)果痰中的病原菌不少屬于機會致病菌，與正常菌群同時存在，報告時應(yīng)作說明，未檢出致病菌時，應(yīng)報告“無致病細菌生長”。28

尿路感染病原體檢驗操作規(guī)程（完整版）微生物室尿路感染病原體檢驗操作規(guī)程（完整版）微生物室sop文件1、尿液培養(yǎng)常見病原菌革蘭陽性菌 革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌腸球菌金黃色葡萄球菌腸球菌A群鏈球菌腐生葡萄球菌淋病奈瑟菌大腸埃希菌變形桿菌肺炎克雷伯菌表皮葡萄球菌 產(chǎn)氣腸桿菌結(jié)核分支桿菌 沙門菌種銅綠假單胞菌沙雷菌2、標本收集2.1、尿液標本的采集可采用多種方法：有中段尿采集法、膀胱穿刺法、腎盂尿采集法，而常規(guī)是取中段尿作細菌培養(yǎng)。2。2、取中段尿作培養(yǎng)時先要進行前尿道的清洗消毒，以免前尿道寄生菌群污染標本。2.3、如采用其他方法收集標本，必須由臨床醫(yī)生根據(jù)臨床診斷需要而執(zhí)行收集術(shù)，并在檢驗單上寫明。3、檢驗步驟3。1、涂片檢查一般細菌及淋病奈瑟菌涂片：以無菌操作吸取尿液10ml，3000r/min離心15min，去上清液，取沉淀涂片，革蘭氏染色鏡檢，作初步報告.如查見革蘭氏陰性雙球菌，呈腎形位于細29

（完整版）微生物室sop文件胞內(nèi)或細胞外，報告“找到革蘭陰性雙球菌，存在于細胞內(nèi)外，形似淋病奈瑟菌”。如未查見上述細菌可報告“未發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌”。念珠菌涂片：取尿液沉淀物放于清潔玻片上，覆以蓋玻片，制成涂片，用高倍鏡檢查。革蘭染色后，如發(fā)現(xiàn)發(fā)亮的芽生孢子和假菌絲，就可報告“霉菌孢子及菌絲”。3。1.3、結(jié)核分枝桿菌：取尿液10ml,4000r/min離心30min,取沉淀物涂片，抗酸染色，鏡檢。如找到紅色桿菌，可報告“查到抗酸桿菌”。一般細菌培養(yǎng)（細菌計數(shù)）：用定量接種環(huán)取尿液10ul接種血平板,35℃培養(yǎng)18?24小時，觀察有無細菌生長，并計數(shù)菌落數(shù)，乘以1000,求出每毫升尿液的菌落數(shù)。根據(jù)菌落特征、涂片染色結(jié)果，進行鑒定和藥敏試驗，如培養(yǎng)48小時無菌生長，即報告“無細菌生長"。特殊菌培養(yǎng)：淋病奈瑟菌培養(yǎng)，選用專用巧克力瓊脂平板，接種后放入二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng).4、檢驗程序淋病奈瑟菌培養(yǎng)專用巧克力培養(yǎng)基淋病奈瑟菌培養(yǎng)專用巧克力培養(yǎng)基（5%?10%CO2，35℃,18?24h）離心、沉淀涂片染色分離培養(yǎng)（革蘭及抗酸染色）血平板、麥康凱平板II初步報告涂片染色鏡檢 鑒定、藥敏試驗報告5、結(jié)果報告:30（完整版）微生物室sop文件尿液細菌培養(yǎng)檢查必須報告細菌的種屬、菌落計數(shù)（cfu/ml）及藥敏結(jié)果。革蘭氏陰性菌落計數(shù)大于105cfu/ml，革蘭氏陽性菌計數(shù)大于^^化/由匕真菌大于103cfu/ml有診斷意義。一般常規(guī)結(jié)核培養(yǎng)要8周方能報告。陽性結(jié)果可提前報告。但不做菌落計數(shù)只報告“抗酸桿菌生長”的報告，如做了進一步的分型和鑒定，才能報告“有**型結(jié)核桿菌生長”。用專用培養(yǎng)基培養(yǎng)淋球菌經(jīng)鑒定可直接報告“有淋球菌生長”但不做菌落計數(shù)，如涂片發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)或外有革蘭氏陰性雙球菌可報告“發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌”。如尿液培養(yǎng)同時有三種或以上細菌生長時，可視為污染標本，建議重留送檢。31（完整版）微生物室（完整版）微生物室sop文件消化道感染病原體檢驗操作規(guī)程1、糞便標本中常見病原菌1、糞便標本中常見病原菌革蘭陽性菌金黃色葡萄球菌結(jié)核分支桿菌難辨梭菌白色念珠菌弧菌屬菌種革蘭陰性菌傷寒及其它沙門菌志賀菌屬致病大腸埃希菌（ETEC、EPEC、EIEC、EHEC）氣單胞、鄰單胞菌種小腸結(jié)腸炎耶爾森菌彎曲菌2、標本采集自然排便采集法：自然排便后，挑取膿血、粘膜部分的糞便2?3g,液體糞便取絮狀物置于大便培養(yǎng)管或增菌液中送檢。直腸肛管法：用大便培養(yǎng)用的肛管直接插入肛門成人4~5cm,幼兒2?3cm,輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)數(shù)次，目的是使直腸表面粘液能通過肛管孔進入肛管內(nèi).然后拔出放入大便培養(yǎng)管中送檢.3、檢驗步驟3。1、涂片檢查糞便標本因各種正常菌群含量甚多而一般不作直接涂片找致病菌，只有懷疑32

（完整版）微生物室（完整版）微生物室sop文件霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致腹瀉時，才作直接涂片檢查。各項的涂片檢驗均按染色方法進行，但大便檢查霍亂弧菌的處理程序：染色檢查：將米泔樣的標本涂2張片用乙醇固定后染色，觀察弧菌有無呈魚群狀排列。3。2。2懸滴檢查：取患者糞便制成懸滴涂片，霍亂弧菌古典型和EL—Tor型均呈現(xiàn)極活潑的穿梭狀運動。3。2。3制動檢驗:運動活潑的弧菌涂片加入霍亂弧菌診斷血清后，在顯微鏡下觀察，若原運動活潑的現(xiàn)象停止，為制動試驗陽性。3。3、大便標本的培養(yǎng)目的是培養(yǎng)致病菌或追蹤病人有否菌群失調(diào)現(xiàn)象，無特殊要求作一般致病菌培養(yǎng)的標本接種麥康凱、$$平板各一個。3.4、菌群失調(diào)的細菌學檢驗：選用多種培養(yǎng)基包括SS、麥康凱、血平板、高鹽甘露醇鹽瓊脂平板、Campy-BA血瓊脂平板和沙氏瓊脂等，目的是使更多的菌群得到生長，以利于檢查腸道的細菌情況.3。5、霍亂弧菌的培養(yǎng)：直接取患者米泔樣糞便0。5ml，接種于堿性蛋白胨水增菌液和4號平板,35℃培養(yǎng)6?8h，再轉(zhuǎn)種一只4號平板.35℃培養(yǎng)18?24h后形成較大、菌落中間為灰黑色、有光澤、隆起、濕潤的菌落,如潑水狀。挑取可疑菌落5?10個與霍亂多價“0”血清作凝集試驗。診斷血清作玻片凝集試驗，如為陽性，則立即報告，并將可疑菌送疾病控制中心確認。3。6、真菌培養(yǎng)：真菌性腹瀉多繼發(fā)于抗生素治療后，常見的真菌腹瀉多由白色假絲酵母菌引起.將標本接種于沙氏平板及血平板上，置27℃和35℃培養(yǎng)18?24h,根據(jù)形態(tài)染色、菌落特征，做真菌鑒定和藥敏試驗。4、檢驗程序 便或肛拭子分離培養(yǎng) 涂片檢查33 分離培養(yǎng) 涂片檢查33 革蘭氏染色 觀察動力T沙門氏菌、志賀氏菌霍亂弧菌

（完整版）微生物室sop文件5、結(jié)果報告糞便培養(yǎng)的報告方式應(yīng)以分離目的菌種的結(jié)果而定，如：目前常規(guī)以$$培養(yǎng)基分離糞便中的致病菌，陽性者應(yīng)報告“檢出沙門菌或檢出志賀菌"，陰性者報告“未檢出沙門菌或未檢出志賀菌”。其他培養(yǎng)結(jié)果報告方式與上述原則相同。膿汁及病灶分泌物細菌學檢驗操作規(guī)程1、膿汁及病灶分泌物培養(yǎng)常見病原菌革蘭陽性菌 革蘭陰性菌葡萄球菌鏈球菌葡萄球菌鏈球菌炭疽芽孢桿菌破傷風芽孢桿菌產(chǎn)氣莢膜梭菌結(jié)核分枝桿菌放線菌、奴卡菌腸桿菌科細菌假單胞菌擬桿菌腐敗謝瓦納拉菌嗜血桿菌產(chǎn)堿桿菌弧菌屬細菌34

34（完整版）微生物室sop（完整版）微生物室sop文件念珠菌2、標本采集：標本由臨床醫(yī)師行無菌操作術(shù)采集，但應(yīng)注意以下幾點：2。1、閉鎖性膿腫疑為厭氧菌感染時，取材后立即將空氣排空，同時針尖插入橡皮塞內(nèi)防止空氣進入，連同注射器一并送檢。開放膿腫、膿性分泌物可在患部直接用棉拭或紗布擦抹，如為痿管亦可在無菌操作下取組織碎片分散在無菌鹽水中。燒傷創(chuàng)面的分泌物，用滅菌棉拭取多部位創(chuàng)面的膿液或分泌物，置無菌試管中送檢。取尿道分泌物必須先清洗、消毒尿道后用擠壓法使分泌物從尿道溢出，用無菌生理鹽水浸濕拭子直接采集標本。如女性做宮頸分泌物細菌培養(yǎng)，應(yīng)盡量避免雜菌污染。組織臟器碎片的收集，先要消毒表面的污染菌，后用無菌刀切開，取內(nèi)容物及碎片分散于無菌生理鹽水中，然后增菌、接種，如活體微量標本可直接放入肉湯增菌培養(yǎng)基中增菌。3、檢驗步驟3.1、涂片檢查：膿汁及分泌物標本均應(yīng)做涂片檢查。涂片做革蘭氏染色鏡檢，根據(jù)形態(tài)和染色特點，可報告“找到革蘭氏X性菌，形似XX菌”或報告“未發(fā)現(xiàn)細菌”.涂片檢查包括涂片找細菌、淋球菌、酵母菌等。3。2、培養(yǎng)普通細菌培養(yǎng)：標本接種血平板、麥康凱平板各一只，35℃培養(yǎng)18?24小時，根據(jù)菌落特性和形態(tài)染色，進行鑒定和藥敏試驗，如培養(yǎng)48小時無菌生長，即報告“無細菌生長"。4、報告結(jié)果涂片報告“找到革蘭氏X性菌”，淋球菌要報告在白細胞內(nèi)外是否發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌。對正常無菌部位的感染，從膿汁或分泌物分離到細菌，均有臨床意義，按分離鑒定結(jié)果報告細菌名稱及藥敏試驗.35（完整版）微生物室sop文件5、操作流程膿汁、創(chuàng)傷分泌物I需羊、培養(yǎng)血平板需羊、培養(yǎng)血平板巧克力平板麥康凱平板觀察菌落（革蘭氏染色、抗酸染色等）初步報告涂片鏡檢 鑒定、藥敏試驗報告生殖系統(tǒng)標本的處理1、生殖系統(tǒng)標本培養(yǎng)的主要病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌葡萄球菌淋病奈瑟菌腸球菌大腸埃希菌化膿性鏈球菌擬桿菌厭氧鏈球菌銅綠假單胞菌36（完整版）微生物室sop文件結(jié)核分枝桿菌變形桿菌2、標本收集：陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由臨床醫(yī)師采集，收集于無菌試管內(nèi)送檢.3、涂片檢查3。1、一般細菌、淋病奈瑟菌和杜克雷嗜血桿菌：革蘭染色鏡檢作初步報告.3.2、結(jié)核桿菌：抗酸染色鏡檢后作初步報告。4、檢驗過程：用棉拭子劃完第一區(qū)后，用接種環(huán)繼續(xù)分區(qū)劃線，35℃普通培養(yǎng)箱孵育18?24小時,如有要求培養(yǎng)淋球菌和真菌則加種專用培養(yǎng)基。5、檢驗流程生殖系統(tǒng)標本涂片厭氧培養(yǎng)涂片革蘭氏染色

抗酸染色血平板巧克力平板（革蘭氏染色

抗酸染色血平板巧克力平板（CO2環(huán)境）麥康凱平板35℃孵育厭氧血平板、巧克力平板35℃、48小時鑒定、藥敏試驗報告6、結(jié)果報告：報告細菌鑒定及藥敏試驗結(jié)果?？咕幬锩舾性囼炄糁桓鶕?jù)是否出現(xiàn)抑菌環(huán)而不考慮抑菌環(huán)的直徑大小，來判斷細菌是否對抗菌藥物敏感的實驗方法，其結(jié)果是不正確的。而紙片擴散法試驗是應(yīng)用標準的方法學原理，根據(jù)抑菌環(huán)直徑大小與最低抑菌濃度的相關(guān)性，結(jié)合臨床上已知敏感或耐藥菌株的狀態(tài)，其結(jié)果是可靠的.WHO推薦瓊脂擴散法敏感試驗（改良心"曠一82四「法），簡稱K-B法，其目的在于技術(shù)的簡單和可37（完整版）微生物室sop文件重復性.本法特別適用于腸桿菌科細菌，也可用于快速生長的致病菌，但不適用于其他細菌，如嗜血桿菌、奈瑟菌、專性厭氧菌及酵母樣菌等。無論用哪種方法接種，只要質(zhì)控菌株的抑菌環(huán)在預期范圍內(nèi)，均可按同一解釋標準報告結(jié)果。但并非從感染患者分離到的微生物都必須做敏感試驗，對于污染、機體共生的正常細菌群和那些與感染無關(guān)的細菌，可不必做敏感試驗，只有那些被認為引起感染的微生物，應(yīng)先分純、鑒定菌種后再做敏感試驗。1、試驗用材料培養(yǎng)基Kirby-Bauer法指定用Mueller—Hinton瓊脂。多年大量的有關(guān)敏感試驗的方法學研究，均采用該培養(yǎng)基，維持細菌正常發(fā)育，絕大多數(shù)細菌在此培養(yǎng)基上生長良好。此培養(yǎng)基不拮抗抗菌藥物活性以及商品的批間差異等方面均優(yōu)于其他培養(yǎng)基。若檢測肺炎鏈球菌的敏感性時，在培養(yǎng)基中加5%的脫纖維羊血，制成血平板。測嗜血桿菌及淋病奈瑟菌的敏感性時，在培養(yǎng)基中須加入1%血紅素和2。5mg/ml輔酶I后應(yīng)校正pH7。2?7。4。制備MH瓊脂平板應(yīng)用直徑90cm平皿。在水平的實驗臺上傾制。瓊脂厚為4mm,允許誤差為土lmm。瓊脂凝固后，應(yīng)測一下pH是否正確.瓊脂于板應(yīng)放4℃保存，在7日內(nèi)用完.藥物紙片抗菌藥物紙片直徑約為6。00?6。35由由，每片的吸水量約20|il。采用K-B法，紙片的藥物含量必須與該法規(guī)定的一致，不得任意更改。藥物紙片可以購買，也可自制，用前必須做質(zhì)量鑒定。用以下兩個指標判定紙片的質(zhì)量：①片間差：是衡量不同紙片含藥是否均一的指標.測定方法：以質(zhì)控菌株接種M—H瓊脂平板，一塊平板上貼6張相同的紙片.35C過夜，培養(yǎng)后，記錄6個抑菌直徑，其最大和最小之差不應(yīng)大于1?2mm。②準確度:判定紙片的實際含藥量與標量是否一致。紙片的合理保存十分重要。藥物紙片必須在有干燥劑的容器內(nèi)低溫（一10℃以下）保存。38（完整版）微生物室sop文件只拿出少量放4℃?zhèn)淙粘９ぷ饔?。裝紙片的容器從冰箱取出后，必須在室內(nèi)溫暖10分鐘以上才可打開。如立即打開，空氣中的水分會冷凝在紙片上，容易潮解。細菌實驗室應(yīng)按臨床的需要，決定敏感試驗抗菌藥物的種類.同類抗菌藥物僅選用一個代表。應(yīng)根據(jù)測定細菌的屬種選藥。1。3、質(zhì)控菌株K—B法質(zhì)量控制用菌株常規(guī)用：金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853。測定MH瓊脂是否適合做磺胺類試驗，須用糞鏈球菌ATCC29212或33186。上述質(zhì)控菌株應(yīng)由衛(wèi)生部臨床檢驗中心供應(yīng)。實驗室保存菌株可用凍干法或保存在高層瓊脂中。常規(guī)質(zhì)量控制菌株應(yīng)每月更換1次.質(zhì)控菌株簡便保存方法：將新得到的凍干菌株接種含血的初^平板復活。然后每株細菌接種10支高層瓊脂管，放置冰箱保存。每月取1支，傳種細菌供常規(guī)使用.待用剩至最后1支，再傳代在M—H平板上，接種一批高層瓊脂管備用。如此連續(xù)可避免原始菌種不接觸抗生素，以防變異.1.4、菌液比濁管為保證敏感試驗的準確度和精密度，必須對接種菌液的濃度做相應(yīng)控制。采用比濁的辦法控制菌懸液濃度。接種菌液濃度為1.5X108/m1,濁度相當于麥氏標準比濁管第1號管的1/2。比濁管配法如下：0.048mo1/LBaC12 0O5ml0。18mo1/LH2sO4 99。5ml將二液置冰水浴中冷卻后混合，置螺口試管中，放室溫暗處保存。用前混勻。有效期為6個月。2、操作方法制備接種菌液：臨床標本中分離的細菌做藥敏試驗，應(yīng)挑取已分純的菌落4?5個制備39（完整版）微生物室sop文件菌懸液.制備菌液的方法是挑選瓊脂平板上、形態(tài)相同的菌落移種于M-H液體培養(yǎng)基中，置35℃水箱中孵育4小時，校正濁度，或用接種環(huán)挑取菌落，懸浮于生理鹽水中，振蕩混勻后與標準比濁管比濁，以有黑字的白紙為背景，調(diào)整濁度與比濁管相同。此法制備接種菌液適用于任何細菌。2。2、接種平板：制備好的接種菌液必須在15min內(nèi)使用。用滅菌的棉拭子蘸取菌液；在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓幾次，去掉過多的菌液。用拭子涂布整個培養(yǎng)基表面，反復幾次，每次將乎板旋轉(zhuǎn)60°，最后沿平皿周邊繞兩圈，保證涂布均勻。2。3、貼紙片：須待平板上的水分被瓊脂完全吸收后再貼紙片。用鑲子取紙片一張，貼在瓊脂平板表面，用鑲尖壓一下，使其貼平，紙片一貼就不可再拿起，因紙片中的藥物已擴散到瓊脂中。每張紙片間距不少于24由巾，紙片中心距平皿邊緣不少于15mm。直徑為90mm的平板最好貼6張。貼上紙片后，須在15由5內(nèi)放35℃孵箱培養(yǎng)。不可放在CO2環(huán)境中。2。4、孵育：必須用35℃孵箱，平板在孵箱內(nèi)最好單獨擺放，不超過二個疊在一起，否則中間的平板，達不到孵箱溫度而產(chǎn)生預擴散的作用，平板孵育18?24h后，讀取結(jié)果。2。5、判定結(jié)果：培養(yǎng)后取出平板，測量抑菌環(huán)的直徑。抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長為限。有的菌株可出現(xiàn)蔓延生長，進入抑菌環(huán)，磺胺藥在抑菌環(huán)內(nèi)會出現(xiàn)輕微生長，這些都不作為抑菌環(huán)的邊緣。按抑菌環(huán)直徑判斷細菌的敏感性.40（完整版）微生物室sop文件消毒滅菌效果監(jiān)測醫(yī)院必須對消毒、滅菌效果定期進行監(jiān)測.滅菌合格率必須達到100%;不合格物品不得進入臨床使用部門.1、使用中的消毒劑、滅菌劑：應(yīng)進行生物和化學監(jiān)測。生物監(jiān)測：消毒劑每季度一次，其細菌含量必須＜100cfu/ml,不得檢出致病性微生物：滅菌劑每月監(jiān)測一次，不得檢出任何微生物。化學監(jiān)測：應(yīng)根據(jù)消毒、滅菌劑的性能定期監(jiān)測，如含氯消毒劑、過氧乙酸等應(yīng)每日監(jiān)測，對戊二醛的監(jiān)測應(yīng)每周不少于一次。應(yīng)同時對消毒、滅菌物品進行消毒、滅菌效果監(jiān)測，消毒物品不得檢出致病性微生物，滅菌物品不得檢出任何微生物。2、紫外線消毒：應(yīng)進行日常監(jiān)測、紫外燈管照射強度監(jiān)測和生物監(jiān)測。日常監(jiān)測包括燈管應(yīng)用時間、累計照射時間和使用人簽名。對新的和使用中的紫外燈管內(nèi)進行照射強度監(jiān)測，新燈管的照射強度不得低于100uW/cm2。使用中燈管不得低于70uw/cm2照射強度監(jiān)測應(yīng)每半年一次、生物監(jiān)測必要時進行，經(jīng)消毒后的物品或空氣中的自然菌應(yīng)減少90。00%以上，人工染菌殺滅率應(yīng)達到99.90%。五、各種消毒后的內(nèi)窺鏡（如胃鏡、腸鏡、喉鏡、氣管鏡等）及其它消毒物品：應(yīng)每季度進行監(jiān)測，不得檢出致病微生物。3、各種消毒后的內(nèi)窺鏡（如胃鏡、腸鏡、喉鏡、氣管鏡等）及其它消毒物品：應(yīng)每季度進行監(jiān)測，不得檢出致病微生物。4、各種滅菌后的內(nèi)窺鏡（如腹腔鏡、關(guān)節(jié)鏡、膽道鏡、膀胱鏡、胸腔鏡等）、活檢鉗和滅菌物品：必須每月進行監(jiān)測，不得檢出任何微生物。5、血液凈化系統(tǒng)；必須每月對入、出透析器的透析液進行監(jiān)測。當疑有透析液污染或有嚴重感染病例時，應(yīng)增加采樣點，如原水口、軟化水出口、反滲水出口。透析液配液口等，并及時進行監(jiān)測。當檢查結(jié)果超過規(guī)定標準值時，須再復查。標準值為:透析器人口液的細菌菌落總數(shù)必須忘200?；?由1,出口液的細菌的落總數(shù)必須W2000cfIu/ml,并不得檢出致病微生物。41（完整版）微生物室sop文件環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測：包括對空氣、物體表面和醫(yī)護人員手的監(jiān)測。醫(yī)院應(yīng)每月對手術(shù)室、重癥監(jiān)護病房/室（ICU）、產(chǎn)房、母嬰室、新生兒病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供應(yīng)室無菌區(qū)、治療室、換藥室等重點部門進行環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測。當有醫(yī)院感染流行，懷疑與醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學因素有關(guān)時，應(yīng)及時進行監(jiān)測。環(huán)境類別范圍標準空氣cfu/m3物體表面Cfu/cm2醫(yī)護人員手cfu/cm21類層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房W10W5W5II類普通病房、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護性隔離室、供應(yīng)室無菌室、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房W200W5W5III類兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔室、急診室、化驗室、各類普通病房和房間W500W10W10IV類傳染病科及病房W15W151、進入人體無菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫(yī)療用品必須無菌.2、接觸粘膜的醫(yī)療用品：細菌菌落總數(shù)應(yīng)W20cfu/g或100cm2；致病性微生物不得檢出。3、接觸皮膚的醫(yī)療用品：細菌菌落總數(shù)應(yīng)W20cfu/g或100cm2；致病性微生物不得檢出。4、使用中消毒劑：細菌菌落總數(shù)應(yīng)W100cfu/ml；致病性微生物不得檢出.5、無菌器械保存液：必須無菌。污物處理衛(wèi)生標準：污染物品無論是回收再使用的物品，或是廢棄的物品，必須進行無害化處理.不得檢出致病性微生物。在可疑污染情況下，進行相應(yīng)指標的檢測.42（完整版）微生物室sop文件采樣及檢查原則采樣后必須盡快對樣品進行相應(yīng)指標的檢測：送檢時間不得超過6兒若樣品保存于0~4℃條件時。送檢時間不得超過24h。1、空氣采樣及檢查方法1。1、采樣時間選擇消毒處理后與進行醫(yī)療活動之前期間采樣。1。2、采祥高度與地面垂直高度80?150cm。1.3、布點方法室內(nèi)面積W30M2,設(shè)一條對角線上取3點，即中心一點、兩端各距墻lm處各取一點；室內(nèi)面積＞30m2,設(shè)東、西、南、北、中5點，其中東、西、南、北點均距墻1m.1。4、采樣方法用9cm直徑