實(shí)驗(yàn)三食品中金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)三食品中金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)第1頁(yè)/共25頁(yè)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)原理；2、掌握金黃色葡萄球菌鑒定要點(diǎn)和檢驗(yàn)方法第2頁(yè)/共25頁(yè)

金黃色葡萄球菌是葡萄球菌屬的一個(gè)種，可引起皮膚組織炎癥，還能產(chǎn)生腸毒素，如果在食品中大量生長(zhǎng)繁殖并產(chǎn)生毒素，可引起食物中毒，故食品中存在金黃色葡萄球菌對(duì)人的健康是一種潛在的危險(xiǎn)，檢查食品中金黃色葡萄球菌及數(shù)量具有實(shí)際意義。第3頁(yè)/共25頁(yè)金黃色葡萄球菌性質(zhì)及培養(yǎng)特征1、革蘭氏陽(yáng)性球菌，排列為葡萄狀，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜。金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片第4頁(yè)/共25頁(yè)

經(jīng)18～24小時(shí)培養(yǎng)后形成圓形隆起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤(rùn)、不透明的菌落，直徑為1～2mm，不同菌株可產(chǎn)生不同色素，出現(xiàn)金黃色、白色、檸檬色。大腸桿菌在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上的菌落特征：中等大小、圓形、表面光滑、無(wú)色半透明、邊緣整齊2、在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上的菌落特征：第5頁(yè)/共25頁(yè)

金黃色葡萄球菌在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上的菌落第6頁(yè)/共25頁(yè)3、具有高耐鹽性，在7.5%氯化鈉肉湯中呈現(xiàn)渾濁生長(zhǎng)；4、在BP平板上菌落特征：圓形、光滑凸起，濕潤(rùn)，直徑為2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍有一渾濁帶，外層有一透明圈；5、在血平板上菌落特征：呈金黃色，有時(shí)也呈白色，大而凸起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈；第7頁(yè)/共25頁(yè)BP培養(yǎng)基上的菌落第8頁(yè)/共25頁(yè)血平板上的菌落第9頁(yè)/共25頁(yè)6、血漿凝固酶試驗(yàn)

致病性菌株可以產(chǎn)生血漿凝固酶，使血漿發(fā)生凝固。第10頁(yè)/共25頁(yè)原理：

鑒定食品中金黃色葡萄球菌：根據(jù)以上性質(zhì)逐步確定。

鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝血漿酶，使血漿凝固；多數(shù)金黃色葡萄球菌致病菌株能產(chǎn)生溶血毒素，使血瓊脂平板菌落周圍出現(xiàn)溶血環(huán)，在試管中出現(xiàn)溶血反應(yīng)。第11頁(yè)/共25頁(yè)實(shí)驗(yàn)材料：1、樣品：（1）含有大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的水樣（2）鮮奶2、培養(yǎng)基與試劑：7.5%氯化鈉肉湯、血瓊脂平板、Baird-Parker氏培養(yǎng)基、無(wú)菌水、革蘭氏染色劑3、器具及其他用品：顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、無(wú)菌吸管、無(wú)菌試管、無(wú)菌平皿、載玻片、涂布器、酒精燈、接種環(huán)等第12頁(yè)/共25頁(yè)流程第13頁(yè)/共25頁(yè)1、增菌培養(yǎng)法1.1檢樣處理：無(wú)菌操作取樣25g（mL）加入225mL滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或均質(zhì)制成混懸液。1.2增菌及分離培養(yǎng)：吸取5mL上述混懸液，接種于7.5%氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯50mL培養(yǎng)基內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)24h，轉(zhuǎn)種血平板和BP平板，36℃±1℃培養(yǎng)24h，挑取血平板上金黃色（有時(shí)為白色）菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)。第14頁(yè)/共25頁(yè)1.3兔血漿凝固酶試驗(yàn)：

吸取1：4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，置36℃±1℃溫箱或水浴內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽(yáng)性結(jié)果，同時(shí)與已知陽(yáng)性和陰性葡萄球菌菌株及肉湯作為對(duì)照。第15頁(yè)/共25頁(yè)2.1梯度稀釋轉(zhuǎn)種BP平板吸取上述1：10混懸液，進(jìn)行10倍第次稀釋，根據(jù)樣品污染情況，選擇不同濃度的稀釋液1mL，分別加入三塊BP平板，每個(gè)平板接種量分別為0.3mL、0.3mL、0.4mL，然后用滅菌涂布器涂布整個(gè)平板，如水分多不易吸收，可將平板放在36℃±1℃1h，等水分蒸發(fā)后反轉(zhuǎn)平皿置36℃±1℃培養(yǎng)。2、直接計(jì)數(shù)方法第16頁(yè)/共25頁(yè)2.2轉(zhuǎn)種血平板

在三個(gè)平板上尋找周圍有渾濁帶的黑色菌落，并從中任選五個(gè)菌落，分別接種血平板，于36℃±1℃培養(yǎng)24h后進(jìn)行染色鏡檢、血漿凝固酶試驗(yàn)，步驟同增菌培養(yǎng)方法。第17頁(yè)/共25頁(yè)2.3菌落計(jì)數(shù)將三個(gè)平板中疑似金黃色葡萄球菌黑色菌落數(shù)相加，乘以血漿凝固酶陽(yáng)性數(shù)，除以5，再乘以稀釋倍數(shù)，即可求出每克樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)。第18頁(yè)/共25頁(yè)結(jié)果1.根據(jù)形態(tài)特征、血平板情況以及血漿凝固酶試驗(yàn)，判別檢樣中是否含有金黃色葡萄球菌。2.估算檢樣中金黃色葡萄球菌的含量。第19頁(yè)/共25頁(yè)GB4789.10-2010第一法金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn)第20頁(yè)/共25頁(yè)GB4789.10-2010第二法金黃色葡萄球菌Baird-Parker平板計(jì)數(shù)第21頁(yè)/共25頁(yè)GB4789.10-2010第三法金黃色葡萄球菌MPN計(jì)數(shù)第22頁(yè)/共25頁(yè)三法特點(diǎn)及適用性：第一法適用于食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗(yàn)第二法適用于金黃色葡萄球菌含量較高的食品中金黃色葡萄球菌的計(jì)數(shù)第三法適用于金黃色葡萄球菌含量較低而