基因工程受體

基因工程受體第1頁(yè)/共15頁(yè)一、E.coli受體系統(tǒng)大腸埃希氏菌(E.coli)通常稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的第2頁(yè)/共15頁(yè)1、E.coli受體系統(tǒng)的特點(diǎn)

①

遺傳背景清楚

②

繁殖快

③

含有質(zhì)粒第3頁(yè)/共15頁(yè)第4頁(yè)/共15頁(yè)3、E.coli受體系統(tǒng)的缺點(diǎn)

表達(dá)產(chǎn)物存在于細(xì)胞內(nèi)安全性欠佳缺乏基因產(chǎn)物表達(dá)后加工機(jī)制第5頁(yè)/共15頁(yè)

基因型：F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRnupGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,λ–特點(diǎn)：一種常用于質(zhì)?？寺〉木?。其Φ80dlacZΔM15基因的表達(dá)產(chǎn)物與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。用途：分子克隆、質(zhì)粒提取。DH5α菌株第6頁(yè)/共15頁(yè)

基因型：endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proAB)e14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。特點(diǎn)：部分抗性缺陷，適合重復(fù)基因表達(dá),可用于M13克隆序列測(cè)定和藍(lán)白斑篩選。用途：分子克隆、質(zhì)粒提取。JM109菌株第7頁(yè)/共15頁(yè)

基因型：F–ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5])。

特點(diǎn)：該菌株用于以T7RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達(dá)受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動(dòng)子，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。

用途：蛋白質(zhì)表達(dá)。

BL21(DE3)菌株ompT=mutationinoutermembraneproteinproteaseVII,reducingproteolysisofexpressedproteins第8頁(yè)/共15頁(yè)

基因型：F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3)pLysS(cmR)。

特點(diǎn)：該菌株帶有pLysS，具有氯霉素抗性。此質(zhì)粒還有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠降低目的基

因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)。

用途：蛋白質(zhì)表達(dá)

BL21(DE3)ply菌株第9頁(yè)/共15頁(yè)四、酵母菌受體系統(tǒng)第10頁(yè)/共15頁(yè)食品級(jí)真核單細(xì)胞微生物適合于真核基因表達(dá)基因產(chǎn)物外分泌遺傳背景較清楚具基因表達(dá)后加工機(jī)制1.酵母菌受體系統(tǒng)的特點(diǎn)第11頁(yè)/共15頁(yè)2.常用酵母菌受體系統(tǒng)釀酒酵母甲醇酵母第12頁(yè)/共15頁(yè)釀酒酵母釀酒酵母（Saccharomycesserevisiae）又名面包酵母，它是單細(xì)胞真核微生物，一直以來釀酒酵母被稱為真核生物中的“大腸桿菌”。1.釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)外源基因的優(yōu)點(diǎn)：工藝簡(jiǎn)單，可快速大規(guī)模生產(chǎn)；它不會(huì)產(chǎn)生毒素，安全可靠。適合于表達(dá)真核生物基因；外源基因可在釀酒酵母中分泌表達(dá)釀酒酵母的遺傳背景清楚，容易進(jìn)行遺傳操作。第13頁(yè)/共15頁(yè)2.畢氏酵母受體系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)：