高二生物測試基因工程的基本操作程序人教版選修

1.2基因工程的基本操作程序1．基因工程的對的操作環(huán)節(jié)是()①使目的基因與載體相結(jié)合②將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞③驗(yàn)證目的基因的表達(dá)是否符合特定性狀規(guī)定④提取目的基因A．③②④① B．②④①③C．④①②③ D．③④①②解析：選C。在基因工程操作中，一方面要提取目的基因，然后使目的基因與載體結(jié)合，再將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，最后是目的基因的檢測與表達(dá)。2．下列獲取目的基因的方法中需要模板的是()①從基因文庫中獲取目的基因②運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因③反轉(zhuǎn)錄法④通過DNA合成儀運(yùn)用化學(xué)方法人工合成DNAA．①②③④ B．①②③C．②③④ D．②③解析：選D。PCR技術(shù)運(yùn)用的是DNA雙鏈復(fù)制原理。即將DNA雙鏈之間的氫鍵打開，變成單鏈DNA，作為聚合反映的模板。反轉(zhuǎn)錄法是以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，先反轉(zhuǎn)錄形成互補(bǔ)的單鏈DNA，再合成雙鏈DNA。①④則均不需要模板。3．聚合酶鏈?zhǔn)椒从?PCR)是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。PCR過程一般經(jīng)歷下述30多次循環(huán)：95℃下使模板DNA變性、解鏈→55℃下復(fù)性(引物與DNA模板鏈結(jié)合)→72℃下引物鏈延伸(形成新的脫氧核苷酸鏈)。下列有關(guān)PCR過程的敘述中不對的的是()A．變性過程中破壞的是DNA分子內(nèi)堿基對之間的氫鍵，也可運(yùn)用解旋酶實(shí)現(xiàn)B．復(fù)性過程中引物與DNA模板鏈的結(jié)合是依靠堿基互補(bǔ)配對原則完畢C．延伸過程中需要DNA聚合酶、ATP、四種核糖核苷酸D．PCR與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制相比所需酶的最適溫度較高解析：選C。本題考察PCR擴(kuò)增過程。解題的關(guān)鍵是要全面理解PCR擴(kuò)增過程。DNA分子被破壞是指DNA分子被解旋成兩條長鏈，破壞的部位是連接兩條長鏈之間的氫鍵，方法有多種，用解旋酶、高溫等都可使DNA解旋。B項(xiàng)中引物有兩種，分別與模板DNA鏈3′端的互補(bǔ)序列互補(bǔ)配對。C項(xiàng)中的原料不對的，合成DNA的原料是四種脫氧核苷酸。PCR技術(shù)中DNA合成過程中的溫度在70～75℃。4．(2023年重慶高二檢測)下列關(guān)于基因表達(dá)載體構(gòu)建的相關(guān)敘述，不對的的是()A．需要限制酶和DNA連接酶B．必須在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行C．抗生素抗性基因可作為標(biāo)記基因D．啟動子位于目的基因的首端解析：選B?；虮磉_(dá)載體構(gòu)建是目的基因與載體結(jié)合，在此過程中需用同一種限制酶切割目的基因與載體，用DNA連接酶將相同的末端連接起來；基因表達(dá)載體的構(gòu)建是在細(xì)胞外進(jìn)行的；基因表達(dá)載體涉及啟動子(位于基因首端使轉(zhuǎn)錄開始)、終止子、目的基因和標(biāo)記基因(鑒別受體細(xì)胞中是否具有目的基因，如抗生素抗性基因)。5．我國中科院上海生化所合成了一種具有鎮(zhèn)痛作用而又不會像嗎啡那樣使病人上癮的藥物——腦啡肽多糖(類似于人體中的糖蛋白)。在人體細(xì)胞中糖蛋白必須通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的進(jìn)一步加工才干形成。假如要采用基因工程和發(fā)酵工程技術(shù)讓微生物來生產(chǎn)腦啡肽多糖，應(yīng)當(dāng)用下列哪種微生物作受體細(xì)胞()A．大腸桿菌 B．酵母菌C．T4噬菌體 D．大腸桿菌質(zhì)粒解析：選B。腦啡肽多糖的化學(xué)本質(zhì)類似于人體中的糖蛋白。從題中可以看出，糖蛋白的合成必須通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的進(jìn)一步加工，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體只存在于真核生物的細(xì)胞內(nèi)，大腸桿菌是原核生物，只有核糖體，沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，T4噬菌體屬于病毒，沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，自己不能合成蛋白質(zhì)；酵母菌是真核生物，其細(xì)胞中有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體，可以合成糖蛋白。6．(2023年池州高二檢測)上海醫(yī)學(xué)遺傳研究所成功哺育出第一頭攜帶人白蛋白基因的轉(zhuǎn)基因牛。他們還研究出一種可大大提高基因表達(dá)水平的新方法，使轉(zhuǎn)基因動物乳汁中的藥物蛋白含量提高了30多倍，標(biāo)志著我國轉(zhuǎn)基因研究向產(chǎn)業(yè)化的目的又邁進(jìn)了一大步。以下與此有關(guān)的敘述中，對的的是()A．人白蛋白基因開始轉(zhuǎn)錄時，在DNA聚合酶的作用下以DNA分子的一條鏈為模板合成mRNAB．所謂“提高基因表達(dá)水平”是指設(shè)法使牛的乳腺細(xì)胞中具有更多的人白蛋白基因C．人們只能在轉(zhuǎn)基因牛的乳汁中獲取到人白蛋白，是由于人白蛋白基因只在轉(zhuǎn)基因牛的乳腺細(xì)胞中是純合的，在其他細(xì)胞中則是雜合的D．假如人白蛋白基因的序列是已知的，可以用化學(xué)方法合成該目的基因解析：選D。人白蛋白基因開始轉(zhuǎn)錄時，在RNA聚合酶的作用下以DNA分子的一條鏈為模板合成mRNA；所謂“提高基因表達(dá)水平”是指設(shè)法使牛的乳腺細(xì)胞中的人白蛋白基因更多地進(jìn)行轉(zhuǎn)錄、翻譯，產(chǎn)生更多的人白蛋白；人們只能在轉(zhuǎn)基因牛的乳汁中獲取到人白蛋白，是由于人白蛋白基因只在轉(zhuǎn)基因牛的乳腺細(xì)胞中表達(dá)。7．(2023年高考江蘇卷)下表中列出了幾種限制酶辨認(rèn)序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表達(dá)相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請回答下列問題：限制酶BamHIHindⅢEcoRISmaI辨認(rèn)序列及切割位點(diǎn)eq\o(GG,\s\up6(↓))ATCCCCTAeq\o(GG,\s\do4(↑))eq\o(AA,\s\up6(↓))GCTTTTCGeq\o(AA,\s\do4(↑))eq\o(GA,\s\up6(↓))ATTCCTTAeq\o(AG,\s\do4(↑))CCeq\o(CG,\s\up6(↓))GGGGeq\o(GC,\s\do4(↑))CC(1)一個圖l所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別具有________個游離的磷酸基團(tuán)。(2)若對圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越________。(3)用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，因素是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)與只使用EcoRⅠ相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時解決質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止________________________________________________________________________。(5)為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入________________酶。(6)重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(7)為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸取蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在________________________________的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完畢目的基因表達(dá)的初步檢測。解析：(1)該質(zhì)粒為環(huán)狀DNA，經(jīng)SmaⅠ切割前，不具有游離的磷酸基團(tuán)，經(jīng)SmaⅠ切割后形成平末端，具有2個游離的磷酸基團(tuán)。(2)SmaⅠ辨認(rèn)的是CCCGGG序列，切割點(diǎn)在C與G之間，SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，也就是C－G堿基對越多，C與G之間的氫鍵(3個)比A與T之間的氫鍵(2個)數(shù)量多，其含量越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越高。(3)據(jù)圖1可知，SmaⅠ切割位點(diǎn)在抗生素抗性基因(標(biāo)記基因)中，據(jù)圖2可知，SmaⅠ切割位點(diǎn)在目的基因中，因此使用SmaⅠ切割會破壞質(zhì)粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因。(4)用同一種限制酶解決質(zhì)粒和外源DNA，再用DNA連接酶連接時，往往會有三種連接形式：目的基因—質(zhì)粒、目的基因—目的基因(環(huán)化)、質(zhì)粒—質(zhì)粒(環(huán)化)，后兩種是我們不需要的，因而要進(jìn)行篩選。用兩種限制酶解決質(zhì)粒和外源DNA，因形成的末端不同可避免上述情況的發(fā)生。(5)連接質(zhì)粒與目的基因的工具酶是DNA連接酶。(6)抗生素抗性基因是標(biāo)記基因的一種，標(biāo)記基因的作用是供重組DNA鑒定和篩選。(7)可根據(jù)目的基因是否表達(dá)成預(yù)期的蛋白質(zhì)進(jìn)行目的基因的檢測，本題中預(yù)期的蛋白質(zhì)是蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，因而可在蔗糖為惟一含碳營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完畢目的基因表達(dá)的初步檢測。答案：(1)0、2(2)高(3)SmaⅠ會破壞質(zhì)粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因(4)質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化(5)DNA連接(6)鑒定和篩選具有目的基因的細(xì)胞(7)蔗糖為惟一含碳營養(yǎng)物質(zhì)(緊扣教材，思考感悟)【尋根問底】1．為什么要構(gòu)建基因文庫？直接從含目的基因的生物體內(nèi)提取不行嗎？(教材P9)答案：構(gòu)建基因文庫是獲取目的基因的方法之一，但并不是唯一的方法。假如所需要的目的基因序列已知，就可以通過PCR方式從具有該基因的生物的DNA中直接獲得，也可以通過反轉(zhuǎn)錄，用PCR方式從mRNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫。但假如所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的所有基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因文庫。2．將生物的所有DNA直接導(dǎo)入受體細(xì)胞不是更簡便嗎？假如這么做，結(jié)果會如何？(教材P11)答案：有人采用總DNA注射法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，即將一個生物中的總DNA提取出來，通過基因槍法或花粉管通道法導(dǎo)入受體植物，沒有進(jìn)行表達(dá)載體的構(gòu)建，這種方法針對性差，完全靠運(yùn)氣，也無法擬定什么基因?qū)肓耸荏w植物。此法目前爭議頗多，嚴(yán)格來講不算基因工程。1．有關(guān)基因工程敘述對的的是()A．限制酶只在獲取目的基因時才用B．重組質(zhì)粒的形成是在細(xì)胞內(nèi)完畢的C．質(zhì)粒都可以作為運(yùn)載體D．蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序也許為合成目的基因提供線索解析：選D。在基因工程中，不僅要用限制酶切割目的基因，還要用同一種限制酶在質(zhì)粒上切割出一個切口，使目的基因與質(zhì)粒切口的黏性末端能進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對；重組質(zhì)粒是在細(xì)胞外進(jìn)行的；并不是所有的質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體，在科學(xué)研究中，人們通常只是用大腸桿菌的質(zhì)粒(其上有抗藥基因)作運(yùn)載體；在人工合成目的基因的方法中，有一種方法是根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的mRNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對原則，推測出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，最后通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。2．PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA，需要的條件是()①目的基因②引物③四種脫氧核苷酸④耐高溫的DNA聚合酶⑤mRNA⑥核糖體⑦能量A．②③④⑤⑥ B．①③④⑦C．①②③⑤⑥ D．①②③④⑦解析：選D。PCR技術(shù)是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)，條件是有一段已知的目的基因的核苷酸序列和根據(jù)核苷酸序列合成的引物，原料是四種脫氧核苷酸，也需要多種酶，如DNA聚合酶。3．下列關(guān)于基因表達(dá)載體的構(gòu)建描述錯誤的是()A．基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心B．基因表達(dá)載體的構(gòu)建涉及目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因等部分C．目的基因就是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因D．構(gòu)建的基因表達(dá)載體都是相同的解析：選D。本題綜合考察了基因表達(dá)載體構(gòu)建的基礎(chǔ)知識涉及基因表達(dá)載體構(gòu)建在基因工程中的地位、結(jié)構(gòu)組成，不同生物的基因表達(dá)載體的不同等?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的第二步，也是基因工程的核心；一個基因表達(dá)載體的組成除目的基因外尚有啟動子、終止子、標(biāo)記基因等部分；由于受體細(xì)胞不同，基因表達(dá)載體的構(gòu)建也會有差別。4．基因工程中科學(xué)家常采用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，因素是()A．結(jié)構(gòu)簡樸，操作方便B．繁殖速度快C．遺傳物質(zhì)含量少、簡樸D．性狀穩(wěn)定，變異少解析：選B。本題考察基因工程的受體細(xì)胞。目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，隨著受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌等微生物繁殖速度非?？?，故在很短時間就能獲得大量的目的基因。5．下列關(guān)于目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的描述不對的的是()A．基因槍法導(dǎo)入植物體細(xì)胞的方法比較經(jīng)濟(jì)有效B．顯微注射技術(shù)是轉(zhuǎn)基因動物中采用最多的方法C．大腸桿菌最常用的轉(zhuǎn)化方法是：使細(xì)胞的生理狀態(tài)發(fā)生改變D．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞最常用的方法解析：選A。本題綜合考察了將目的基因?qū)爰?xì)胞的方法。不同生物目的基因?qū)氲姆椒ú煌?，每種方法都有利有弊。目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，該方法比較經(jīng)濟(jì)有效，尚有基因槍法和花粉管通道法；目的基因?qū)雱游锛?xì)胞常用的方法是顯微注射法；大腸桿菌細(xì)胞最常用的轉(zhuǎn)化方法就是用鈣離子解決細(xì)胞，使細(xì)胞的生理狀態(tài)發(fā)生改變，完畢轉(zhuǎn)化過程。6.(2023年哈爾濱高二檢測)科學(xué)家在哺育抗蟲棉時，通過了許多復(fù)雜的過程和不懈的努力，才獲得成功。起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達(dá)。然后在插入抗蟲基因的質(zhì)粒中插入啟動子(抗蟲基因首端)，導(dǎo)入棉花受精卵，長成的棉花植株還是沒有抗蟲能力?？茖W(xué)家又在有啟動子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入終止子(抗蟲基因末端)，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果長成的植株才有了抗蟲能力。由以上過程推知，作為目的基因的載體應(yīng)具有的結(jié)構(gòu)是()A．目的基因、啟動子B．目的基因、終止子C．目的基因、啟動子、終止子D．目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因答案：D7．目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，只有通過鑒定和檢測才干知道。下列屬于目的基因檢測和鑒定的是()①檢測受體細(xì)胞是否有目的基因②檢測受體細(xì)胞是否有致病基因③檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA④檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)A．①②③ B．②③④C．①③④ D．①②④解析：選C。本題考察目的基因的檢測的相關(guān)知識。目的基因的檢測涉及：檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是用DNA探針，使DNA探針與基因組DNA雜交。檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，方法是用基因探針與mRNA雜交。最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是進(jìn)行抗原—抗體雜交。8．在基因工程的操作過程中，獲得重組質(zhì)粒不需要()①DNA連接酶②同一種限制酶③RNA聚合酶④具有標(biāo)記基因的質(zhì)粒⑤目的基因⑥4種脫氧核苷酸A．③⑥ B．②④C．①⑤ D．①②④解析：選A。在基因工程的操作過程中，需要用同一種限制酶切割目的基因與載體，并用DNA連接酶將兩者的黏性末端(或平末端)連接起來，所選擇的質(zhì)粒必須具有標(biāo)記基因，以便進(jìn)行目的基因的檢測。9．(2023年西安高二檢測)下列哪項(xiàng)表述說明了目的基因表達(dá)成功()A．用DNA探針檢測目的基因出現(xiàn)雜交帶B．用DNA探針檢測mRNA出現(xiàn)雜交帶C．用抗原—抗體雜交檢測蛋白質(zhì)出現(xiàn)雜交帶D．以上都不能說明解析：選D。目的基因表達(dá)成功需從兩個方面檢測：一是分子水平檢測。涉及檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體DNA上是否插入了目的基因，檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。二是個體水平檢測。如抗蟲或抗病的目的基因?qū)胫参锛?xì)胞后，是否賦予了植物抗蟲或抗病特性，需要做抗蟲或抗病的接種實(shí)驗(yàn)。10．下列關(guān)于基因工程的敘述，錯誤的是()A．目的基因和受體細(xì)胞均可來自動、植物或微生物B．限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C．人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性D．載體上的抗性基因有助于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)解析：選D。基因工程中目的基因和受體細(xì)胞均可來自動、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶；人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性，只有通過一定的物質(zhì)激活以后，才有生物活性；載體上的抗性基因重要是有助于篩選含重組DNA的細(xì)胞，不能促進(jìn)目的基因的表達(dá)。所以D錯誤。11．聚合酶鏈?zhǔn)椒从?PCR)是生物學(xué)家在實(shí)驗(yàn)室以少量樣品制備大量DNA的生化技術(shù)，反映系統(tǒng)中涉及微量樣品基因、DNA聚合酶、引物、4種脫氧核苷酸等。反映中新合成的DNA又可作為下一輪循環(huán)反映的模板，其過程如圖所示，據(jù)圖回答問題：(1)為什么通過此反映產(chǎn)生的DNA與樣品完全同樣？________________________________________________________________________。(2)每次此循環(huán)反映完畢時產(chǎn)生兩分子DNA，假如該DNA樣品有1000個脫氧核苷酸，已知它的一條單鏈上堿基A∶G∶T∶C＝1∶2∶3∶4，則五次循環(huán)后將產(chǎn)生多少個DNA，________個，需要胸腺嘧啶脫氧核苷酸的數(shù)目至少是________個。(3)指出此過程與轉(zhuǎn)錄過程的三個不同點(diǎn)：①________________________________________________________________________________________________________________________________________________；②________________；③________________。解析：本題將基因工程知識與DNA分子復(fù)制等知識結(jié)合在一起，DNA分子的復(fù)制是半保存復(fù)制，所以復(fù)制五次，可以得到32個DNA分子，而新合成的DNA分子數(shù)目相稱于31個，在一個DNA分子中有胸腺嘧啶脫氧核苷酸200個，所以需要胸腺嘧啶脫氧核苷酸的數(shù)目至少是6200個。聚合酶鏈?zhǔn)椒从?PCR)技術(shù)是在人為條件下進(jìn)行的DNA分子復(fù)制技術(shù)，而轉(zhuǎn)錄是形成mRNA的過程，故兩者有很多不同之外。答案：(1)新產(chǎn)生的DNA是以樣品DNA為模板合成的(2)326200(3)PCR以DNA的兩條單鏈為模板，轉(zhuǎn)錄時以DNA的一條單鏈為模板所用的原料不同催化反映的酶不同12．(2023年青島市高二質(zhì)檢)如圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)，ampR為青霉素抗性基因，tetR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有涉及EcoRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答：(1)將具有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoRI酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有________________________________________________________________________________________、______________________________、____________________________三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進(jìn)行________。(2)用上述3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所具有的連接產(chǎn)物是________________________；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所具有的連接產(chǎn)物是________________________________________________________________________________________________________。(3)目的基因表達(dá)時，RNA聚合酶辨認(rèn)和結(jié)合的位點(diǎn)是________________，其合成的產(chǎn)物是________________。(4)在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應(yīng)選用的酶是________________________________________________________________________。解析：(1)將具有目的基因的DNA與質(zhì)粒用EcoRⅠ酶切開后，可形成許多有相同末端的DNA片段，再用DNA連接酶連接起來后，可形成目的基因與目的基因、目的基因與載體、載體與載體連接的重組DNA分子，而基因工程所需要的是目的基因與載體的連接物，所以對以上三種DNA分子片段進(jìn)行分離提純，以獲得基因工程所需要的。(2)質(zhì)粒是原核生物細(xì)胞中的一種DNA分子，所以對以上連接物，只有含載體與載體的連接物的宿主細(xì)胞能生活在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中。而目的基因與載體連接物、載體與載體的連接物都具有完整的青霉素抗性基因，所以可生活在具有青霉素的培養(yǎng)基上。(3)目的基因表達(dá)時，RNA聚合酶與啟動子結(jié)合，催化DNA分子轉(zhuǎn)錄為信使RNA分子。(4)為了防止目的基因與質(zhì)粒表達(dá)載體的任意連接，可同時選用EcoR↓I酶與BamHI酶切割目的基因和質(zhì)粒，這樣形成的目的基因兩個末端分別有不同的核苷酸序列，而質(zhì)粒的兩個末端也是分別有不同的核苷酸序列，這樣就能保證目的基因只能與質(zhì)粒結(jié)合了。答案：(1)目的基因——載體連接物載體——載體連接物目的基因——目的基因連接物分離純化(2)載體——載體連接物目的基因——載體連接物、載體——載體連接物(3)啟動子mRNA(4)EcoRⅠ和BamHⅠ13．螢火蟲能發(fā)光是由于螢火蟲體內(nèi)可以通過熒光素酶催化的系列反映所