多糖藥物檢測方法規(guī)范

關(guān)于多糖藥物檢測方法規(guī)范第一頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日1、硫酸軟骨素的含量測定酸性粘多糖，維持組織和免疫機能（1）長期應(yīng)用于防治冠心病、心絞痛、冠狀動脈粥樣硬化、心肌缺血等疾病，無明顯的毒副作用。在動脈和靜脈壁上沉積的脂肪等脂質(zhì)可以被有效地去除或減少，能顯著降低血漿膽固醇。（2）用于治療神經(jīng)痛、神經(jīng)性偏頭痛、關(guān)節(jié)痛等。

（3）預(yù)防和治療鏈霉素引起的聽覺障礙，效果顯著。（4）應(yīng)用于化妝品以及外傷傷口的愈合劑等。（5）鯊魚軟骨中的軟骨素有抗腫瘤的作用。（6）硫酸軟骨素還用于滴眼劑。

第二頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日家畜、鯊魚類動物是主要的軟骨來源。但家畜的軟骨產(chǎn)量很低，鯊魚多是靠天然捕獲。因此,需要進一步尋求其它易得而又穩(wěn)定的軟骨來源,。鱘魚的軟骨含量相當(dāng)高,而且鱘魚養(yǎng)殖技術(shù)已成熟。以匙吻鱘的軟骨為原料,用稀堿-酶相結(jié)合的方法提取硫酸軟骨素匙吻鱘軟骨→80℃恒溫蒸煮6h→洗凈→冷凍→80℃烘干→粉碎→料液比1∶6，3%堿提取，提取溫度40℃→濾液→胰蛋白酶酶降解（用量1000∶1.5，酶解溫度45℃）→氯仿萃取→棄氯仿層→95%乙醇沉淀（沉淀時的pH7.0）→過濾→60℃干燥→成品硫酸軟骨素提取率為36.52%、純度為97%、蛋白質(zhì)含量為0.075%、水分為10.52%。第三頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日檢測方法（1）比色法適量樣品用6MHCL酸水解2小時，中和與乙酰丙酮反應(yīng)25分鐘，生成色原物質(zhì)，冷卻，然后再與無醛乙醇60℃反應(yīng)1小時，525nm處測定吸光度,鹽酸氨基葡萄糖做對照(2)紫外法樣品與硫酸95℃共熱水解1小時,288nm處測吸光值。需做標(biāo)準(zhǔn)曲線第四頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日（3）毛細細管電泳測定硫酸軟骨素毛細管電泳條件：毛細管內(nèi)徑50μm；有效長度50cm

緩沖鹽：50mM磷酸二氫鉀溶液，pH=3.5

進樣量：5sec,

0.5

毫升

分離電壓：28kV樣品處理：稱取各種待測樣品約1.0g，用10mL乙腈分散，定容至100mL。氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線（5.070mg/mL-0.507mg/mL）：y=8338.7x+1607.7，R2=0.9999硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)曲線（4.731mg/mL-0.473mg/mL）：y=344781x+58652，R2=0.9958第五頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日香菇多糖的測定

香菇多糖是主鏈?zhǔn)铅拢?→3）糖苷鏈連接的葡聚糖。用這種多糖以2mg/kg劑量腹腔注射已移植腫瘤的大鼠連續(xù)5天，結(jié)果表明它對肉瘤的抑制率達83%，而相同劑量的經(jīng)切支水解后得到的較小分子香菇多糖對肉瘤的抑制量更高，達97%以上。第六頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日機理：

有人合成了含有同位素的香菇多糖，并在移植了腫瘤的小鼠身上做示蹤試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它不具備直接殺傷腫瘤細胞的能力。隨后的大量試驗表明它是作為調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)的T細胞促進劑，通過刺激抗體的產(chǎn)生提高機體的免疫能力，從而達到抵抗腫瘤的作用。香菇多糖注射液(治慢性肝炎及腫瘤治療的輔助藥);香菇多糖的測定多糖水解成單糖進行測定（滴定法）含量=樣品水解后單糖總含量-未水解樣品中單糖的含量第七頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日香菇多糖的提取方法1.預(yù)處理：取干香菇，搗碎。2.提取：將搗碎的干香菇，在攪拌的條件下加6—7倍量水混勻，加熱至90℃，攪拌保溫60min。降溫至40℃時轉(zhuǎn)移到40℃水浴保溫，pH6．4，攪拌反應(yīng)60min，然后迅速升溫到90-100℃，滅活1min降溫后紗布過濾，收集濾液。3.濃縮：將以上濾液濃縮至l/5體積。4.沉淀：將濃縮液加1倍量乙醇，然后靜置過夜。過濾得沉淀物，濾液再加3倍量乙醇，得沉淀物。第八頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日5.二次沉淀：將沉淀物置于搪瓷缸中，加約70倍量的水，攪拌均勻，在猛烈攪拌下，滴加0.2mol/L氫氧化十六烷基三甲基胺水溶液，逐步調(diào)PH至12.8時產(chǎn)生大量沉淀，離心，沉淀用乙醇洗滌，收集沉淀。6.除蛋白：沉淀用氯仿、正丁醇洗滌去蛋白，水層加3倍量乙醇沉淀，收集沉淀。7.洗滌：沉淀依次用甲醇、乙醚洗滌，收集沉淀。8.干燥：將沉淀置真空干燥器干燥，即為香菇多糖。第九頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日靈孢多糖靈芝，又稱萬年蕈、靈芝草，為靈芝屬真菌,有著悠久的藥用歷史。目前，有關(guān)靈芝活性元素的研究主要集在：靈芝多糖類、靈芝三萜類等成分上。靈芝多糖可抑制腫瘤細胞的無限、快速分裂能力，還具有提高機體免疫力，提高機體耐缺氧能力，降血糖降血脂作用。

靈芝多糖產(chǎn)品：靈芝多糖片、靈芝復(fù)方糖漿等(主要用于腫瘤輔助治療，慢性氣管炎、高血壓、神經(jīng)衰弱、糖尿病、高血脂等);第十頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日檢測方法(1)對照品溶液的制備取葡萄糖，加水制成1.0mg/ml的溶液。(2)供試品溶液的制備取本品3.0ml，加水定容至200ml。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液1.0ml，2.0ml，4.0ml，6.0ml，和8.0ml，加水定容至100ml。各精密量取1.0ml，分別置具塞試管中，置冰浴中，分別加入蒽酮試劑5.0ml，搖勻，各試管加完后浸入沸水浴中，加熱1min后，加塞。自水浴重新沸騰起，開始計時，10min后取出，用自來水冷卻，室溫放置10min，立即在620nm分別測定吸光度，以測得的吸光度對相應(yīng)的濃度計算回歸方程，相關(guān)系數(shù)不得低于0.99。(4)含量測定（含多糖以葡萄糖計）精密量取供試品1.0ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下自“分別置具試管中”起，依法同步操作，測定吸光度，由回歸方程計算多糖含量。第十一頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日肝素的檢測1.結(jié)構(gòu)與性質(zhì)肝素分子是有六糖或八糖重復(fù)單位組成的線形分子，含2-硫酸艾杜糖醛酸6-硫酸-N-硫酸氨基葡萄糖及葡萄糖醛酸等殘基。由不同鏈長的許多組分組成。肝素的N-硫酸基對酸水解敏感，與氧化劑反應(yīng)，能被降解成酸性產(chǎn)物。肝素呈弱酸性，某聚陰離子與各種陽離子反應(yīng)生成鹽，與堿性染料反應(yīng)，對染料的光吸收有影響。第十二頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日2.效價的測定（1）天青A法含氨基堿性染料（天青A、甲苯胺藍、天青Ⅰ）有一定最大吸收，結(jié)合了肝素后，則最大吸收向短波移動。使用天青A比色測定肝素效價。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密量取肝素標(biāo)準(zhǔn)液（1.2U/ml）1ml2ml3ml4ml5ml各以蒸餾水補足到5ml，在各加巴以妥緩沖液（PH=6.8）1ml及0.1%西黃耆膠溶液1ml，0.018%天青A溶液1ml，搖勻后，于505nm處