檢驗(yàn)程序確認(rèn)和驗(yàn)證

檢驗(yàn)方法評價(jià)上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院檢驗(yàn)科胡曉波

12方法學(xué)評價(jià)的目的？方法的性能特征？方法確認(rèn)和驗(yàn)證？正確度、精密度、測量區(qū)間、生物參考區(qū)間的定義？驗(yàn)證正確度、精密度和測量區(qū)間的方法？小樣本驗(yàn)證參考區(qū)間的方法？本次講課內(nèi)容2建立新/修訂檢驗(yàn)方法流程建立需求確定質(zhì)量目標(biāo)選擇方法評價(jià)方法建立方法實(shí)施方法常規(guī)檢測臨床標(biāo)本預(yù)防維護(hù)實(shí)施質(zhì)量控制報(bào)告結(jié)果3檢驗(yàn)方法選擇檢驗(yàn)方法分級：決定性方法參考方法常規(guī)方法參考物質(zhì)分級：在量值溯源課講解！一級參考物二級參考物校準(zhǔn)物質(zhì)控品4檢驗(yàn)方法選擇決定性方法參考方法常規(guī)方法正確度最高、系統(tǒng)誤差最小已證實(shí)正確度正確度足夠已證明尚未發(fā)現(xiàn)不精密度已證實(shí)精密度精密度足夠測定結(jié)果與真值最接近，有權(quán)威性干擾因素少，有適當(dāng)靈敏度、特異度、較寬分析范圍有特異度、適當(dāng)分析范圍，經(jīng)濟(jì)實(shí)用如重量法、中子活化法、同位素稀釋法、質(zhì)譜法A級（已用決定性方法和一級參考物質(zhì)驗(yàn)證）、B級（分析原理和試驗(yàn)條件滿足參考方法要求，未完全經(jīng)決定性方法和一級標(biāo)準(zhǔn)品驗(yàn)證）、C級（因分析物自身成分復(fù)雜，未經(jīng)決定性方法驗(yàn)證）經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可后作為推薦方法5檢驗(yàn)方法評價(jià)要求實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定方法的特定性能要求（源自法規(guī)要求、醫(yī)學(xué)應(yīng)用要求或分析性能要求）。廠商聲明性能應(yīng)符合特定性能要求。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)廠商聲明的性能特征（如不精密度和偏移）能滿足特定性能要求。6檢驗(yàn)方法評價(jià)用途用途：用于選擇適當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)方法。用于室內(nèi)質(zhì)控的設(shè)計(jì)。用于測量不確定度的估計(jì)。用于總分析誤差的確定。78測量正確度測量準(zhǔn)確度測量精密度（含測量重復(fù)性、期間精密度和測量復(fù)現(xiàn)性）測量不確定度分析特異性（含干擾物）分析靈敏度檢出限和定量限測量區(qū)間診斷特異性診斷靈敏度檢驗(yàn)方法性能指標(biāo)ISO15189:20128檢驗(yàn)方法的評價(jià)1.檢驗(yàn)程序驗(yàn)證在常規(guī)應(yīng)用前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對未加修改而使用的已確認(rèn)的檢驗(yàn)方法進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證。通過獲取客觀證據(jù)證實(shí)檢驗(yàn)方法的性能與：①聲明相符；②檢驗(yàn)結(jié)果預(yù)期用途相關(guān)。應(yīng)將驗(yàn)證程序文件化，記錄驗(yàn)證結(jié)果。驗(yàn)證結(jié)果由授權(quán)人員審核，并記錄審核過程。2.檢驗(yàn)程序確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對以下來源檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)：①非標(biāo)準(zhǔn)方法；②實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)或制定的方法；③超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法；④修改過的確認(rèn)方法。應(yīng)將確認(rèn)程序文件化，記錄確認(rèn)結(jié)果。確認(rèn)結(jié)果由授權(quán)人員審核，并記錄審核過程。ISO15189:201210確認(rèn)條件：非標(biāo)準(zhǔn)方法；實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)或制定的方法；超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法；修改過的已確認(rèn)方法。驗(yàn)證條件：未加修改的已確認(rèn)的檢驗(yàn)程序。檢驗(yàn)方法確認(rèn)和驗(yàn)證區(qū)別ISO15189:20121011已確認(rèn)的檢驗(yàn)程序：①體外診斷醫(yī)療器械使用說明規(guī)定；②公認(rèn)/權(quán)威教科書；③經(jīng)同行審議過文章或雜志發(fā)表；④國際公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)或指南；⑤國家、地區(qū)法規(guī)規(guī)定。檢驗(yàn)方法確認(rèn)和驗(yàn)證區(qū)別ISO15189:20121112確認(rèn)validation，定義：規(guī)定要求滿足預(yù)期用途的驗(yàn)證（VIM）。例：一個(gè)用于測量水中氨的質(zhì)量濃度的測量程序，也可經(jīng)確認(rèn)后用于測量人體血清中氨的質(zhì)量濃度。（廠商）通過提供客觀證據(jù)認(rèn)定檢驗(yàn)程序滿足預(yù)期用途或應(yīng)用的要求（ISO15189）。1213驗(yàn)證verfication，定義：通過提供客觀證據(jù)證明給定項(xiàng)目滿足規(guī)定的要求（VIM）。例：對相關(guān)量值和測量程序而言，證實(shí)取樣量小至10mg時(shí)給定參考物質(zhì)和其聲稱的一樣均勻。（用戶）通過提供客觀證據(jù)認(rèn)定（廠商）檢驗(yàn)程序滿足規(guī)定的要求（ISO15189）。1314認(rèn)定方法變換方法進(jìn)行計(jì)算；performingalternativecalculations新設(shè)計(jì)規(guī)范與已證實(shí)的類似設(shè)計(jì)規(guī)范進(jìn)行比較；comparinganewdesignspecificationwithasimilarprovendesignspecification進(jìn)行試驗(yàn)和演示；undertakingtestsanddemonstrations文件發(fā)布前進(jìn)行評審。reviewingdocumentspriortoissue14美國CLIA'88要求修改或自建系統(tǒng)驗(yàn)證：正確度；精密度；可報(bào)告范圍；參考區(qū)間；分析特異性；分析靈敏度。未修改系統(tǒng)驗(yàn)證：正確度；精密度；可報(bào)告范圍；參考區(qū)間。16中國行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求WS/T420-2013臨床實(shí)驗(yàn)室對商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證WS/T492-2016臨床檢驗(yàn)定量測定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證WST408-2012臨床化學(xué)設(shè)備線性評價(jià)指南WST416-2013干擾實(shí)驗(yàn)指南WST514-2017臨床檢驗(yàn)方法檢出能力的確立和驗(yàn)證16一、測量精密度measurementprecision簡稱精密度在規(guī)定條件下，對同一或類似被測量重復(fù)測量所得示值或測得值間的一致程度。measurementrepeatabilityandmeasurementreproducibilityJCGM200:201217測量精密度測量精密度通常用不精密度表達(dá)，以數(shù)字形式表達(dá)，如在規(guī)定測量條件下的標(biāo)準(zhǔn)偏差（s）、方差或變異系數(shù)（CV）。規(guī)定條件可以是重復(fù)性測量條件、期間精密度測量條件或復(fù)現(xiàn)性測量條件。測量精密度包括：測量重復(fù)性、期間測量精密度或測量復(fù)現(xiàn)性。測量精密度不等同于測量準(zhǔn)確度。18測量重復(fù)性measurementrepeatability簡稱重復(fù)性在一組重復(fù)性測量條件下的測量精密度。repeatabilitymeasurementJCGM200:2012NOTE:Formerly,thetermwithin-runprecisionwasusedinEP15.以前，EP15文件中使用批內(nèi)精密度。19重復(fù)性測量條件簡稱重復(fù)性條件（repeatabilityconditionofmeasurement）相同測量程序、相同操作者、相同測量系統(tǒng)、相同操作條件和相同地點(diǎn)，并在短時(shí)間內(nèi)對同一或相類似被測對象重復(fù)測量的一組測量條件。JCGM200:201220測量復(fù)現(xiàn)性measurementreproducibility簡稱復(fù)現(xiàn)性在復(fù)現(xiàn)性測量條件下的測量精密度。21復(fù)現(xiàn)性測量條件簡稱復(fù)現(xiàn)性條件（reproducibilityconditionofmeasurement）不同地點(diǎn)、不同操作者、不同測量系統(tǒng)，對同一或相類似被測對象重復(fù)測量的一組測量條件。注：給出復(fù)現(xiàn)性時(shí)，應(yīng)說明改變和未變的條件、實(shí)際改變到什么程度。22期間測量精密度intermediatemeasurementprecision簡稱期間精密度（intermediateprecision）在一組期間精密度測量條件下的測量精密度。23期間測量精密度測量條件intermediateprecisionconditionofmeasurement簡稱期間精密度條件（intermediateprecisioncondition）相同測量程序、相同地點(diǎn)，在一個(gè)較長時(shí)間內(nèi)對同一或類似被測量重復(fù)測量的一組測量條件，還涉及改變的其他條件。24期間測量精密度測量條件改變：包括新的校準(zhǔn)、測量標(biāo)準(zhǔn)器、操作者和測量系統(tǒng)。條件說明：包括改變和未變條件，實(shí)際改變到什么程度。NOTE:Therearefourelementstotheoperatingconditions:time,calibration,operator,andequipment.(ISO3534-2)25測量精密度within-deviceprecision/within-runprecision:seeintermediateprecisonconditions.器具內(nèi)精密度within-laboratoryimprecison:imprecisionoveradefinedtimeandoperators,withinthesamefacilityandusingthesameequipment.Calibrationandreagentsmayvary.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度NOTE:Formerly,thetermtotalprecisonwasusedinEP15.以前，在EP15文件中使用總精密度。26實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度within-laboratoryimprecison規(guī)定時(shí)間、操作者范圍，在同一機(jī)構(gòu)內(nèi)使用相同儀器條件下的精密度。注：校準(zhǔn)品和試劑可能變動。2728精密度28EP05-A3，EvaluationofPrecisionofQuantitativeMeasurementProcedures，2014EP15-A3，UserVerificationofPrecisionandEstimationofBias，2014EP10-A3-AMD，PreliminaryEvaluationofQuantitativeClinicalLaboratoryMeasurementProcedures，2014精密度評價(jià)-CLSI文件29WS/T420-2013精密度驗(yàn)證技術(shù)方案：準(zhǔn)備工作驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集與處理結(jié)果判讀驗(yàn)證結(jié)論30精密度驗(yàn)證準(zhǔn)備工作為得到正確的檢驗(yàn)方法精密度驗(yàn)證結(jié)果，應(yīng)選用熟悉儀器、檢驗(yàn)方法、有責(zé)任心的人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。開始驗(yàn)證前，應(yīng)確認(rèn)儀器處于良好狀態(tài)，并建立具體可執(zhí)行驗(yàn)證方案。至少應(yīng)包含：操作人員；使用設(shè)備；設(shè)備校準(zhǔn)；環(huán)境（溫度、濕度、空氣污染等）；不同測量時(shí)間間隔；其他（試劑種類和批號）。31精密度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：樣本類型商品質(zhì)控品或校準(zhǔn)品：因精密度驗(yàn)證需進(jìn)行5d，樣本應(yīng)具有很好穩(wěn)定性和均勻性。若選用樣品為凍干品/干粉，存在瓶間差。宜取多瓶樣品復(fù)溶，充分混勻后分裝在密閉小瓶，按質(zhì)控品或校準(zhǔn)品特性選擇相應(yīng)溫度進(jìn)行冰凍貯存。每天測量前取出，室溫融化后做實(shí)驗(yàn)。自制樣本：應(yīng)有充分證據(jù)證實(shí)具有很好的穩(wěn)定性和均勻性。32精密度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：樣本濃度至少2個(gè)濃度。盡可能與廠家精密度評價(jià)時(shí)所用樣本濃度一致。應(yīng)關(guān)注醫(yī)學(xué)決定水平精密度，有助于醫(yī)師判斷病情。如血糖測量可取7.0mmol/L和4.0mmol/L進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，因分別用于診斷糖尿病和低血糖。33精密度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：周期和頻率：2*5*1*3應(yīng)進(jìn)行5d，每天做1個(gè)批次。批/批次run：是指一段時(shí)間間隔，在此時(shí)間段內(nèi)測量系統(tǒng)的正確度和精密度是穩(wěn)定的，但一批次不能超過24h或低于廠商推薦的頻率（USCFR493，1992）?；颍涸诙ㄐ蕴卣鞯南盗杏^察中，不中止系列事件的同一屬性（ISO3534）。測量次數(shù)：每批次各濃度樣本分別測3次。34精密度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：校準(zhǔn)方法：按說明書規(guī)定方法進(jìn)行校準(zhǔn)。校準(zhǔn)頻率：每批次測量應(yīng)分別校準(zhǔn)。室內(nèi)質(zhì)控：每批樣本測量前、后應(yīng)分別做室內(nèi)質(zhì)控。如出現(xiàn)失控或其他操作問題，應(yīng)將此批次數(shù)據(jù)棄去，另增加一個(gè)批次測量。35精密度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：應(yīng)對每個(gè)樣本測量數(shù)據(jù)分別處理數(shù)據(jù)有效性判斷：實(shí)驗(yàn)日質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)確認(rèn)：按室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則評價(jià)數(shù)據(jù)有效性。離群值判斷標(biāo)準(zhǔn)：單次測量數(shù)據(jù)超出總均值±4s。數(shù)據(jù)剔除量<總測量數(shù)據(jù)量5%。36精密度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：有效數(shù)據(jù)處理：填表：將有效數(shù)據(jù)與初步計(jì)算數(shù)據(jù)填表。計(jì)算重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)差（sr）。計(jì)算期間標(biāo)準(zhǔn)差（sI）。37精密度數(shù)據(jù)處理表38精密度驗(yàn)證數(shù)據(jù)處理表設(shè)備：XYZ分析項(xiàng)目：AB濃度：140mg/dL試劑批號：MK243校準(zhǔn)品批號：RNC59YR項(xiàng)目第1批第2批第3批第4批第5批日期/操作人員2/20/TF2/21/JL2/22/GG2/23/KW2/24/SR第一次測量結(jié)果：x1140138143143142第二次測量結(jié)果：x2140139144143143第三次測量結(jié)果：x3140138144142141每批測量結(jié)果之和：=x1+x2+x3420415431428426每批測量結(jié)果均值：=（x1+x2+x3）/3140138.33143.67142.67142每批第一次測量結(jié)果與每批測量結(jié)果均值之差0-0.33-0.670.330每批第一次測量結(jié)果與每批測量結(jié)果均值之差的平方00.10890.44890.10890每批第二次測量結(jié)果與每批測量結(jié)果均值之差00.670.330.331每批第二次測量結(jié)果與每批測量結(jié)果均值之差的平方00.44890.10890.10891每批第三次測量結(jié)果與每批測量結(jié)果均值之差0-0.330.33-0.67-1每批第三次測量結(jié)果與每批測量結(jié)果均值之差的平方00.10890.10890.44891每批單次測量結(jié)果與每批測量結(jié)果均值之差的平方和00.66670.66670.66672每批測量批內(nèi)方差00.33340.33340.33341每批測量結(jié)果均值與總均值之差1.3332.341.340.67每批測量結(jié)果均值與總均值之差的平方1.768995.47561.79560.4489精密度數(shù)據(jù)處理表39精密度驗(yàn)證計(jì)算重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)差Sr：計(jì)算期間標(biāo)準(zhǔn)差Sl：40精密度驗(yàn)證結(jié)果判斷重復(fù)性精密度：判斷項(xiàng)：重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)差。如廠家聲稱精密度為變異系數(shù)，應(yīng)先按公式轉(zhuǎn)換為標(biāo)準(zhǔn)差。41精密度驗(yàn)證結(jié)果判斷判讀標(biāo)準(zhǔn)：如計(jì)算值sr≤廠家聲稱值σr，則驗(yàn)證廠家聲稱的重復(fù)精密度可靠。如計(jì)算值sr>廠家聲稱值σr，則需將sr與廠家聲稱值的驗(yàn)證值比較，如<驗(yàn)證值，說明此差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明廠家聲稱的重復(fù)精密度可靠。如二者數(shù)值很接近，可增加2個(gè)批次測量，將所得數(shù)據(jù)與之前的數(shù)據(jù)合并計(jì)算，可增加結(jié)果的可靠程度。如計(jì)算值sr>驗(yàn)證值，表明廠家聲稱的重復(fù)精密度未得到驗(yàn)證，應(yīng)與廠家聯(lián)系并取得幫助。42精密度驗(yàn)證廠商預(yù)期最大測定變異聲明：如重復(fù)性s：40mg/dl為10.5用戶實(shí)驗(yàn)自由度（df）可接受的最大標(biāo)準(zhǔn)差（s）1014.22013.13012.64012.410011.743精密度驗(yàn)證結(jié)果判斷判讀標(biāo)準(zhǔn)：計(jì)算驗(yàn)證值：自由度：確定C點(diǎn)：此點(diǎn)代表自由度的X2分布百分比（1-α/l）的點(diǎn)。驗(yàn)證值：44精密度驗(yàn)證結(jié)果判斷期間精密度：判斷項(xiàng)：期間標(biāo)準(zhǔn)差。如廠家聲稱精密度為變異系數(shù)，應(yīng)先按公式轉(zhuǎn)換為標(biāo)準(zhǔn)差。45精密度驗(yàn)證結(jié)果判斷判讀標(biāo)準(zhǔn)：如計(jì)算值sl≤廠家聲稱值σl，則驗(yàn)證廠家聲稱的期間精密度可靠。如計(jì)算值sl>廠家聲稱值σl，則需將sl與廠家聲稱值的驗(yàn)證值比較，如<驗(yàn)證值，說明此差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明廠家聲稱的期間精密度可靠。如二者數(shù)值很接近，可增加2個(gè)批次測量，將所得數(shù)據(jù)與之前的數(shù)據(jù)合并計(jì)算，可增加結(jié)果的可靠程度。如計(jì)算值sl>驗(yàn)證值，表明廠家聲稱的期間精密度未得到驗(yàn)證，應(yīng)與廠家聯(lián)系并取得幫助。46精密度驗(yàn)證結(jié)果判斷判讀標(biāo)準(zhǔn)：計(jì)算驗(yàn)證值的：自由度：確定C點(diǎn)：此點(diǎn)代表自由度的X2分布百分比（1-α/l）的點(diǎn)。驗(yàn)證值：47精密度驗(yàn)證驗(yàn)證結(jié)論：重復(fù)精密度：例：計(jì)算值<廠家聲稱值，表明廠家聲稱的重復(fù)精密度可靠。期間精密度：例：計(jì)算值>廠家聲稱值，但<驗(yàn)證值，表明廠家聲稱的期間精密度可靠。48確認(rèn)：EP5-A2方案和要求常用方案：每天測定2個(gè)批次。若拒絕1批次，增加1批次。每批次每個(gè)濃度用2瓶樣品。每批次測定時(shí)質(zhì)控應(yīng)在控。實(shí)際操作中，若可能的話，每批次至少檢測10份患者標(biāo)本。每天每批次間隔時(shí)間至少2h。即采用2*2*2*20的實(shí)驗(yàn)方案，即2個(gè)濃度，每天分析2批次，每批次重復(fù)測定2次，連續(xù)測定20天，獲得80個(gè)有效數(shù)據(jù)。EP5-A2方案和要求注意事項(xiàng)：室內(nèi)質(zhì)控：證明在評估階段該設(shè)備處于穩(wěn)定狀態(tài)。評價(jià)完成后應(yīng)計(jì)算控制限，應(yīng)符合廠商的預(yù)期性能要求。初步精密度評價(jià)：在方案熟悉階段末期，應(yīng)做重復(fù)性初步評價(jià)。連續(xù)分析2個(gè)濃度20瓶樣品。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)，偏離預(yù)期結(jié)果應(yīng)與廠商聯(lián)系。EP5-A2方案和要求離群值檢查：批間、日間離群值：由室內(nèi)質(zhì)控來發(fā)現(xiàn)，找出原因后，刪除失控批數(shù)據(jù)。批內(nèi)離群值：用初步精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)所得標(biāo)準(zhǔn)差作為離群值判斷標(biāo)準(zhǔn)。若重復(fù)測定差異絕對值超出5.5s，該批次數(shù)據(jù)為離群值，應(yīng)拒絕。若出現(xiàn)離群值，需調(diào)查原因，并重新分析該批。臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)：WS/T403-2012二、準(zhǔn)確度和正確度測量準(zhǔn)確度measurementaccuracy一次測量結(jié)果與被測量值真值間的一致程度。[VIM：1993，定義3.5]測量正確度measurementtrueness，truenessofmeasurement簡稱正確度（trueness）無窮多次重復(fù)測量所得量值均值與一個(gè)參考量值間的一致程度。JCGM200:2012測量正確度測量正確度不是一個(gè)量，不能用數(shù)值表示。測量正確度與系統(tǒng)測量誤差有關(guān)，與隨機(jī)測量誤差無關(guān)。術(shù)語測量正確度不能用測量準(zhǔn)確度表示。正確度通常以偏移表示。NOTE：Themeasureoftruenessisusuallyexpressedintermsofbias.(ISO5725-1)55正確度和準(zhǔn)確度關(guān)系55精密度和正確度關(guān)系精密且正確精密，但不正確正確，但不精密既不精密，也不正確57EP9-A3，MeasurementProcedureComparisonandBiasEstimationUsingPatientSamples，2013EP15-A3，UserVerificationofPrecisionandEstimationofBias，2014EP10-A3-AMD，PreliminaryEvaluationofQuantitativeClinicalLaboratoryMeasurementProcedures，2014正確度評價(jià)-CLSI文件57WS/T420-2013正確度驗(yàn)證技術(shù)方案：準(zhǔn)備工作驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集與處理結(jié)果判讀驗(yàn)證結(jié)論58正確度驗(yàn)證準(zhǔn)備工作為得到正確的檢驗(yàn)方法正確度驗(yàn)證結(jié)果，應(yīng)選用熟悉儀器、檢驗(yàn)方法、富有責(zé)任心的人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。開始驗(yàn)證前應(yīng)確認(rèn)儀器處于良好狀態(tài)，并建立具體可執(zhí)行驗(yàn)證方案。至少應(yīng)包含：操作人員；使用設(shè)備；設(shè)備校準(zhǔn)；環(huán)境（溫度、濕度、空氣污染等）；不同測量時(shí)間間隔；其他（試劑種類和批號）。59正確度驗(yàn)證基于樣本來源的不同，可采用方法為：用患者樣本與其他檢驗(yàn)方法/試劑盒進(jìn)行正確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)用參考物質(zhì)進(jìn)行正確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)60用患者標(biāo)本做正確度驗(yàn)證三種方法學(xué)比較的驗(yàn)證情況：如實(shí)驗(yàn)室只驗(yàn)證廠家聲稱，并以廠家聲稱為驗(yàn)證基礎(chǔ)，最好選擇廠家做比較的試劑盒或檢驗(yàn)方法。如更新試劑盒，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與現(xiàn)用試劑盒比較。如將試劑盒用到其他儀器，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)重新驗(yàn)證。61正確度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：樣本要求：取20份患者樣本，濃度應(yīng)均勻分布在檢驗(yàn)方法測量區(qū)間，樣本類型應(yīng)符合所用檢驗(yàn)方法要求。不應(yīng)使用已知有干擾樣本，如溶血、黃疸或乳糜血。按廠家要求采集、處理和制備患者樣本。因不易獲得病理樣本，樣本常需貯存一段時(shí)間，當(dāng)達(dá)到足夠量再做比較實(shí)驗(yàn)。此時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)項(xiàng)目特點(diǎn)規(guī)定貯存條件。冷凍樣本應(yīng)避免反復(fù)融凍。融化后應(yīng)充分混勻后再測量。如出現(xiàn)顆粒狀沉淀，可離心后取上清液測量。62正確度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：周期和測量次數(shù)：3～5*4～7*1宜在樣本采集當(dāng)天進(jìn)行，實(shí)際工作中很難做到，也可在3～5d內(nèi)用實(shí)驗(yàn)方法和比較方法測定所有20個(gè)樣本，每天測量4～7個(gè)樣本，結(jié)果可能更有說服性。此方法考慮到實(shí)驗(yàn)室在不同工作日、不同測量條件產(chǎn)生變異的可能。此時(shí)可考慮在同一個(gè)批次測量中，先后進(jìn)行正確度與精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。每個(gè)樣本測定1次，使測量條件和常規(guī)工作接近，不應(yīng)重復(fù)多次測量。63正確度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：測量要求：應(yīng)在同一臺儀器上同時(shí)用2種方法測量樣本，以免因測量儀器、時(shí)間引起差異。實(shí)驗(yàn)方法和比較方法在4h完成檢測。64正確度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：校準(zhǔn)方法：按說明書規(guī)定方法校準(zhǔn)。校準(zhǔn)頻率：每批次測量應(yīng)分別校準(zhǔn)。室內(nèi)質(zhì)控：每批樣本測量前、后應(yīng)分別做室內(nèi)質(zhì)控。如失控或其他操作問題，則應(yīng)將此批次數(shù)據(jù)棄去，另增加一個(gè)批次測量。65正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：數(shù)據(jù)有效性判斷：室內(nèi)質(zhì)控在控，測量數(shù)據(jù)有效。有效數(shù)據(jù)處理：填表畫偏移圖計(jì)算絕對/相對偏移和標(biāo)準(zhǔn)差66正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：填表：將有效數(shù)據(jù)與初步計(jì)算數(shù)據(jù)填表。67用患者樣本與其他檢驗(yàn)方法/試劑盒進(jìn)行比較的正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)處理表RiRcbibi-b（bi-b）27677-1-3.512.2512712163.512.25256262-6-8.572.2530329496.542.25292541.52.25345348-3-5.530.2542411-1.52.251541540-2.54.25398388107.556.2593921-1.52.252402391-1.52.25726930.50.2531230841.52.2599101-2-4.520.253753750-2.56.2516816263.512.25595452.56.25183185-2-4.520.2521320496.542.2543643152.56.25合計(jì)50357正確度驗(yàn)證68正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：偏移圖：以絕對/相對偏移為縱軸，比較方法結(jié)果為橫軸作圖，觀察圖中不同濃度偏移分布是否均勻：如分布均勻，取均值與廠家聲稱值比較；如分布不均勻，考慮數(shù)據(jù)分為2段或多段，取各段均值比較。如偏移出現(xiàn)進(jìn)行性變化，無法計(jì)算出平均偏移。需增加患者樣本，以獲得更多數(shù)據(jù)對正確度進(jìn)行驗(yàn)證。69正確度驗(yàn)證70正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：有效數(shù)據(jù)初步計(jì)算：計(jì)算每個(gè)樣本測量結(jié)果在兩種方法間的絕對/相對偏移：計(jì)算兩種方法間絕對/相對偏移：71正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：計(jì)算絕對/相對偏移的標(biāo)準(zhǔn)差：絕對偏移標(biāo)準(zhǔn)差：相對偏移標(biāo)準(zhǔn)差：72正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：如某樣本兩種方法檢測結(jié)果明顯不同，提示可能出現(xiàn)了干擾或其他問題，按下列操作：用兩種方法做一次雙份測量，如雙份測量仍復(fù)現(xiàn)原來差異，多因兩法特異性不同，干擾因素不同所致，如因隨機(jī)誤差或儀器誤差，常不能復(fù)現(xiàn)；尋找顯著差異原因，若因樣本存在干擾物對不同檢驗(yàn)方法或試劑盒產(chǎn)生不同影響，此樣本應(yīng)棄去，并補(bǔ)充相同數(shù)量新樣本。73正確度驗(yàn)證結(jié)果判斷：判斷標(biāo)準(zhǔn)：如實(shí)驗(yàn)方法與廠家推薦或參考方法比較，按廠家或參考方法的性能，決定2種方法測量結(jié)果的醫(yī)學(xué)允許偏移。如與實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)用方法比較，按實(shí)驗(yàn)室對測量質(zhì)量的允許要求，決定2種方法測量結(jié)果的醫(yī)學(xué)允許偏移。74正確度驗(yàn)證結(jié)果判斷：兩種方法間絕對/相對偏移計(jì)算值與廠家聲稱值比較：如計(jì)算值正負(fù)號與廠家聲稱值一致，且絕對值≤廠家聲稱值，則驗(yàn)證廠家聲稱的偏移值可靠。如計(jì)算值正負(fù)號與廠家聲稱值一致，但絕對值>廠家聲稱值，則需計(jì)算實(shí)驗(yàn)室計(jì)算值的驗(yàn)證區(qū)間，若聲稱值在計(jì)算值驗(yàn)證區(qū)間內(nèi)，則驗(yàn)證廠家聲稱的偏移值可靠。如超出驗(yàn)證區(qū)間，表明廠家聲稱的正確度未得到驗(yàn)證，應(yīng)與廠家聯(lián)系并取得幫助。75正確度驗(yàn)證結(jié)果判斷：計(jì)算驗(yàn)證區(qū)間：確定t點(diǎn)：t點(diǎn)為自由度n-1的t分布，此處n代表患者標(biāo)本數(shù)。絕對偏移驗(yàn)證區(qū)間：相對偏移驗(yàn)證區(qū)間：76正確度驗(yàn)證驗(yàn)證結(jié)論：例：計(jì)算值正負(fù)號與廠家聲稱值一致，但絕對值>廠家聲稱值，進(jìn)一步計(jì)算驗(yàn)證區(qū)間，聲稱值在驗(yàn)證區(qū)間內(nèi)，表明廠家聲稱的偏移值可靠。77臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)：WS/T403-2012分析物可接受范圍谷丙轉(zhuǎn)氨酶靶值±20%白蛋白靶值±10%堿性磷酸酶靶值±30%淀粉酶靶值±30%谷草轉(zhuǎn)氨酶靶值±20%膽紅素靶值±6.84mmol/L(0.4mg/dL)或±20%(取大者)血?dú)釶O2靶值±3s血?dú)釶CO2靶值±5mmHg或±8%(取大者)氯靶值±5%膽固醇靶值±10%高密度脂蛋白膽固醇靶值±30%甘油三酯靶值±25%尿酸靶值±17%美國CLIA'88分析性能要求生物學(xué)變異用參考物質(zhì)做正確度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：參考物質(zhì)來源：新鮮冷凍人血清或其他未經(jīng)過加工的人類物質(zhì)：檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)溯源聯(lián)合委員會公布的二級參考物質(zhì)：，但此類參考物質(zhì)的基質(zhì)和/或添加物質(zhì)不是來自人類，可能存在基質(zhì)效應(yīng)，影響其互通性，使用前應(yīng)驗(yàn)證其互通性。81正確度驗(yàn)證其他定值物質(zhì)：大型能力比對或室間質(zhì)評樣本：定值為大量實(shí)驗(yàn)室測量結(jié)果均值，有時(shí)此均值代表不同儀器和不同試劑結(jié)果，是否適用于驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室測量體系應(yīng)證實(shí)。該類樣本也有可能缺乏互通性，解釋結(jié)果時(shí)要充分考慮上述問題。同方法組室間質(zhì)評物：由使用同一檢測系統(tǒng)，或同一檢驗(yàn)方法，或同一試劑盒實(shí)驗(yàn)室形成同方法組。此類室間質(zhì)評物的均值可作為權(quán)威賦值。注意參加測量實(shí)驗(yàn)室數(shù)量，通常應(yīng)>10個(gè)。同時(shí)還應(yīng)注意試劑批號影響。82正確度驗(yàn)證廠家提供驗(yàn)證正確性物質(zhì)：此類產(chǎn)品指明用于該廠家特定的試劑或檢驗(yàn)方法，不適用于其他廠家產(chǎn)品。第三方賦值物質(zhì)：廠家提供的驗(yàn)證不同測量系統(tǒng)的正確度物質(zhì)。注意該物質(zhì)賦值實(shí)驗(yàn)室數(shù)量、賦值不確定度、所用試劑批號等賦值條件，以協(xié)助判斷賦值物的可靠性。應(yīng)注意此類物質(zhì)結(jié)果解釋。83正確度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：參考物質(zhì)分類：具有互換性的有證參考物質(zhì)具有溯源性即互換性的正確度驗(yàn)證物質(zhì)84正確度驗(yàn)證參考物質(zhì)賦值不確定度：廠家提供賦值“標(biāo)準(zhǔn)不確定度”或“擴(kuò)展不確定度”。廠家提供賦值擴(kuò)展不確定度（U）。應(yīng)注意置信因子，如為2，置信范圍95%，則賦值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為U/2。廠家提供賦值置信區(qū)間（CI），則賦值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為CI/2。室間質(zhì)評物賦值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：u=s/√n。85正確度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：參考物質(zhì)濃度：宜覆蓋整個(gè)測量區(qū)間。至少應(yīng)含2個(gè)測量濃度，其中之一應(yīng)為醫(yī)學(xué)決定水平。應(yīng)注意選擇在所用檢驗(yàn)方法精密度最佳濃度處進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以減小隨機(jī)誤差對驗(yàn)證結(jié)果的影響。86正確度驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：方法：2*（3～5）*2參考物質(zhì)準(zhǔn)備：按說明書準(zhǔn)備參考物質(zhì)。樣本測量：宜進(jìn)行5個(gè)批次測量，應(yīng)不少于3批。每個(gè)濃度樣本每批次測量2次。校準(zhǔn)方法：按說明書規(guī)定方法校準(zhǔn)。校準(zhǔn)頻率：每批次測量應(yīng)分別校準(zhǔn)。室內(nèi)質(zhì)控：每批樣本測量前、后應(yīng)分別做室內(nèi)質(zhì)控。如失控或其他操作問題，則應(yīng)將此批次數(shù)據(jù)棄去，增加一個(gè)批次測量。87正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：每個(gè)樣本測量數(shù)據(jù)分別處理測量數(shù)據(jù)有效性判斷：室內(nèi)質(zhì)控在控，測量數(shù)據(jù)有效。有效數(shù)據(jù)處理：填表計(jì)算總均值和標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算實(shí)驗(yàn)室參考物質(zhì)測量的偏移值計(jì)算參考物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)測量不確定度88正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：填表：將有效數(shù)據(jù)與初步計(jì)算數(shù)據(jù)填表。89用參考物質(zhì)進(jìn)行正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)處理表設(shè)備：XYZ分析項(xiàng)目：Glusose濃度：40mg/dL試劑批號：MK243校準(zhǔn)品批號：RNC59YR項(xiàng)目測量結(jié)果xi-x（xi-x）2日期/操作者第一批第一次（x1）37-0.70.492/20/TF第二次（x2）380.30.09第二批第一次（x1）391.31.692/21/JL第二次（x2）37-0.70.49第三批第一次（x1）380.30.092/22/GG第二次（x2）36-1.72.89第四批第一次（x1）391.31.692/23/KW第二次（x2）380.30.09第五批第一次（x1）380.30.092/24/SR第二次（x2）37-0.70.49正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：計(jì)算總均值：計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差：計(jì)算偏移值：計(jì)算參考物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)測量不確定度：假設(shè)此參考物質(zhì)為室間質(zhì)評樣本。90正確度驗(yàn)證結(jié)果判斷：判讀項(xiàng)：偏移值和偏移值的驗(yàn)證區(qū)間。91正確度驗(yàn)證結(jié)果判斷：如實(shí)驗(yàn)室測量偏移值≤參考物質(zhì)賦值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度，則驗(yàn)證廠家的聲稱值可靠。如實(shí)驗(yàn)室測量偏移值>參考物質(zhì)賦值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度，則計(jì)算偏移值驗(yàn)證區(qū)間，并與參考物質(zhì)賦值比較，如在驗(yàn)證區(qū)間內(nèi)，說明此差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為廠家聲稱值可靠。如二者數(shù)值很接近，可將該濃度添加2～5次測量，將所有數(shù)據(jù)與之前的數(shù)據(jù)合并計(jì)算，能增加結(jié)果的可靠程度。如超出驗(yàn)證區(qū)間，表明廠家聲稱的正確度未得到驗(yàn)證，應(yīng)與廠家聯(lián)系并取得幫助。92正確度驗(yàn)證結(jié)果判斷：計(jì)算偏移驗(yàn)證區(qū)間：計(jì)算自由度：t點(diǎn)的確定：按2n-1自由度，在t分布決定（100-α）百分比的t點(diǎn)。計(jì)算驗(yàn)證區(qū)間：93正確度驗(yàn)證結(jié)果判斷：94正確度驗(yàn)證驗(yàn)證結(jié)論：實(shí)驗(yàn)室參考物質(zhì)測量偏移值>賦值的不確定度，但參考物質(zhì)賦值在驗(yàn)證區(qū)間范圍內(nèi)，表明廠家聲稱的正確度可靠。95確認(rèn)：EP9-A3方案和要求典型的實(shí)驗(yàn)研究方案：類型主持者標(biāo)本量候選測量系統(tǒng)的重復(fù)次數(shù)候選測量系統(tǒng)數(shù)量獲得偏移的推薦分析方法建立MP的聲明廠商≥1001或多次1或多個(gè)回歸驗(yàn)證MP的聲明廠商≥1001次1個(gè)回歸引入MP實(shí)驗(yàn)室≥401或多次1個(gè)差值圖或回歸96EP9-A3方案和要求測量程序比較實(shí)驗(yàn)：廠商要求：樣本采集和處理；比較方法選擇；標(biāo)本量：推薦至少100份標(biāo)本；影響因素；上樣順序；時(shí)間和周期：推薦3～5天；核查收集數(shù)據(jù)；室內(nèi)質(zhì)控：實(shí)驗(yàn)期間應(yīng)做質(zhì)控；離群值判斷。EP9-A3方案和要求測量程序比較實(shí)驗(yàn)：樣本采集和處理：按廠商推薦采集和處理患者樣本，應(yīng)保留臨床、人口統(tǒng)計(jì)學(xué)、分析性（如溶血、脂血/混濁、黃疸）信息。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確保貯存和運(yùn)輸中的各種變異不影響測量程序。EP9-A3方案和要求測量程序比較實(shí)驗(yàn)：比較方法的選擇：原則為：具有小的測量不確定度；不受已知干擾物的干擾；使用與實(shí)驗(yàn)方法相同單位或能轉(zhuǎn)換成相同單位；最好能溯源到標(biāo)準(zhǔn)或參考測量程序。EP9-A3方案和要求測量程序比較實(shí)驗(yàn)：影響因素：隨機(jī)因素：有批內(nèi)和批間變異。設(shè)計(jì)中應(yīng)考慮重復(fù)（如批次、天數(shù)、每批重復(fù)測定次數(shù)）以減少偏移不確定度。其他因素：操作人員、校準(zhǔn)、儀器、試劑批號和校準(zhǔn)品批號。上樣順序：所有樣本應(yīng)按隨機(jī)順序在2個(gè)檢驗(yàn)方法中運(yùn)行，重復(fù)測定順序應(yīng)隨機(jī)化。EP9-A3方案和要求測量程序比較實(shí)驗(yàn)：臨床實(shí)驗(yàn)室要求：除上述廠商要求外，特殊要求有：比較方法：推薦實(shí)驗(yàn)室當(dāng)前使用方法、廠商聲明方法、公認(rèn)參考方法。標(biāo)本量：推薦至少40份標(biāo)本。重復(fù)測定次數(shù)：1次。校準(zhǔn)和過程控制：推薦在實(shí)驗(yàn)開始階段進(jìn)行校準(zhǔn)，所有參數(shù)應(yīng)做質(zhì)控。EP9-A3方案和要求數(shù)據(jù)目測檢查：應(yīng)做散點(diǎn)圖和偏差圖散點(diǎn)圖：Y均值對X均值散點(diǎn)圖。Y值對X均值散點(diǎn)圖。偏差圖：Y-X均值差值對兩種方法均值偏移圖。Y-X均值差值對X均值偏移圖。EP9-A3方案和要求Y-X均值實(shí)驗(yàn)方法均值實(shí)驗(yàn)方法所有測定值兩種方法的均值差異比較方法均值比較方法均值兩種方法均值比較方法均值兩種方法的均值差異差值圖和回歸圖區(qū)別Bland-Altman圖Deming回歸圖EP9-A3方案和要求結(jié)果解釋：與可接受標(biāo)準(zhǔn)比較：候選方法與比較方法的偏移應(yīng)在可接受偏移范圍內(nèi)：與廠家聲明預(yù)期性能比較。與實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部性能比較。其他正確度評價(jià)方法常用正確度評價(jià)方法：方法比較實(shí)驗(yàn)：除按WS/T420-2013或EP15文件驗(yàn)證外?；厥諏?shí)驗(yàn)：比例系統(tǒng)誤差。干擾實(shí)驗(yàn)：恒定系統(tǒng)誤差?；厥諏?shí)驗(yàn)-Westgardrecoveryexperiments：是評估候選方法正確測定標(biāo)本中相應(yīng)分析物的能力。通常，在常規(guī)標(biāo)本中加入分析物，再測定所加入分析物的質(zhì)量、濃度或活性等，結(jié)果用回收率表示?；厥諏?shí)驗(yàn)方案和要求準(zhǔn)備2份樣品計(jì)算A添加量測定2份樣品中A量計(jì)算回收率%回收實(shí)驗(yàn)方案和要求實(shí)驗(yàn)要求：常規(guī)標(biāo)本基質(zhì)（加入分析物為液體，體積≤10％）；保證標(biāo)本基質(zhì)一致性（原始標(biāo)本中應(yīng)加入相同溶液）；加入分析物應(yīng)準(zhǔn)確定量（稱重、標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品）；應(yīng)選擇醫(yī)學(xué)決定水平，≥3個(gè)不同濃度，且在線性范圍內(nèi)?；厥諏?shí)驗(yàn)方案和要求計(jì)算回收率：理想情況下，回收率為100％。回收率應(yīng)與允許誤差范圍進(jìn)行比較。舉例：膽固醇回收試驗(yàn)6份來源不同患者標(biāo)本；每份標(biāo)本檢測4次；對照標(biāo)本：0.1ml

NS+0.9ml血清；回收標(biāo)本：0.1ml

500mg/dl膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品+0.9ml血清。膽固醇回收試驗(yàn)?zāi)懝檀荚试S誤差：靶值±30%。分析干擾analyticalinterference在測定某分析物的濃度或活性時(shí)，受另一非分析物影響而導(dǎo)致測定結(jié)果增高或減低。分為：絕對干擾：患者標(biāo)本中不含有某物質(zhì)，如存在即會引起干擾。相對干擾：患者標(biāo)本中含有某物質(zhì)，其含量變化可引起干擾。干擾實(shí)驗(yàn)-Westgard準(zhǔn)備2份樣品測定2份樣品A含量計(jì)算差值干擾實(shí)驗(yàn)方案和要求步驟：準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)標(biāo)本；測量兩個(gè)標(biāo)本中分析物濃度；計(jì)算偏差；應(yīng)與允許誤差范圍比較。舉例：膽固醇干擾試驗(yàn)6份來源不同患者標(biāo)本；對照標(biāo)本：0.1mlNS+0.9ml血清；干擾標(biāo)本：0.1ml100mg/dl膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品+0.9ml血清；每份檢測4次。舉例膽固醇允許誤差：靶值±30%。方法性能判斷-Westgard檢驗(yàn)程序誤差（TE）應(yīng)≤允許總誤差（TEa：如衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）或用方法決定圖法。TE=SE+RE=偏移+3s。SE：系統(tǒng)誤差-bias%；RE：隨機(jī)誤差-CV%；bias：候選和比較方法間的差值；s：精密度估計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)差。方法決定圖確定分析質(zhì)量要求，以TEa表示，將TEa轉(zhuǎn)換成某決定水平或百分率。Y軸為允許偏倚（bias%），從0～TEa。X軸為允許不精密度（s%），從0～0.50TEa。制作偏倚+2s限，Y軸TEa和X軸0.50TEa。制作偏倚+3s限，Y軸TEa和X軸0.33TEa。制作偏倚+4s限，Y軸TEa和X軸0.25TEa。圖中標(biāo)記：不符合、臨界、良好、優(yōu)秀。方法決定圖允許不精密度允許偏移方法決定圖方法總誤差和允許總誤差計(jì)算和判斷方式：TE（偏倚+2s）<TEa：最低水平，及格。TE（偏倚+3s）<TEa：提高不精密度水平要求，達(dá)到最低質(zhì)量水平，良好。TE（偏倚+4s）<TEa：優(yōu)秀。方法決定圖如白蛋白、膽固醇、葡萄糖方法性能。若TEa為10%。白蛋白方法A：CV為2%，偏倚為0%。膽固醇方法B：CV為2%，偏倚為2%。膽固醇方法C：CV為3%，偏倚為3%。葡萄糖方法D：CV為4%，偏倚為3%。方法決定圖允許不精密度允許偏移方法決定圖白蛋白方法A：性能優(yōu)秀，完全可接受，質(zhì)控容易。膽固醇方法B：性能良好，可接受方法，需每日做4次質(zhì)控，使用多規(guī)則質(zhì)控。膽固醇方法C：性能臨界，可接受，但常用質(zhì)控方法很難檢出問題，較難保持質(zhì)量。葡萄糖方法D：性能不符合要求，不能使用該方法。三、測量區(qū)間measuringinterval，定義又稱工作區(qū)間workinginterval在規(guī)定條件下，由具有一定測量不確定度的測量儀器或系統(tǒng)能測出的一組同類量的量值（VIM）。注1：在某些領(lǐng)域，也稱“測量范圍”或“工作范圍”。注2：測量區(qū)間下限不應(yīng)與“檢出限”相混淆。126線性、線性范圍線性：linearity指待測標(biāo)本中能直接按比例關(guān)系給出分析物結(jié)果的能力。注1：線性代表整個(gè)測量系統(tǒng)的反應(yīng)。注2：一個(gè)測量系統(tǒng)的線性由不同已知濃度的分析物測定得到。線性范圍：linearrange指測量系統(tǒng)所能覆蓋的可接受線性范圍，非線性誤差應(yīng)小于設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)。127分析測量范圍analyticalmeasurementrange，定義患者標(biāo)本未經(jīng)任何處理（稀釋、濃縮或其他預(yù)處理），由測量系統(tǒng)直接測得的可靠結(jié)果范圍。在此范圍內(nèi)，一系列不同標(biāo)本分析物測量值與實(shí)際濃度呈線性關(guān)系。128臨床可報(bào)告范圍clinicalreportablerange，定義是定量檢測項(xiàng)目能向臨床報(bào)告的分析測量范圍，患者標(biāo)本可經(jīng)稀釋、濃縮或其他預(yù)處理。129EP6-A，EvaluationoftheLinearityofQuantitativeMeasurementProcedures，2003EP10-A3-AMD，PreliminaryEvaluationofQuantitativeClinicalLaboratoryMeasurementProcedures，2014線性評價(jià)-CLSI文件WS/T420-2013線性驗(yàn)證技術(shù)方案：準(zhǔn)備工作驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集與處理結(jié)果判讀驗(yàn)證結(jié)論線性驗(yàn)證準(zhǔn)備工作為得到正確的檢驗(yàn)方法線性驗(yàn)證結(jié)果，負(fù)責(zé)人應(yīng)選用熟悉儀器、檢驗(yàn)方法、有責(zé)任心的人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。開始驗(yàn)證前應(yīng)確認(rèn)儀器處于良好狀態(tài)，并建立具有可執(zhí)行驗(yàn)證方案。至少應(yīng)包含：操作人員、使用設(shè)備、設(shè)備校準(zhǔn)、環(huán)境（溫度、濕度、空氣污染等）、不同測量時(shí)間間隔、其他（試劑種類和批號）。線性驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：樣本選擇：選擇原則：所用樣本應(yīng)盡可能與測量樣本相似。所用樣本不含說明書上有干擾，如黃疸、溶血、乳糜血。宜選用與廠家線性評價(jià)一致樣本。如廠家選擇不當(dāng)，為避免所得的結(jié)論不當(dāng)，實(shí)驗(yàn)室也可自己選用恰當(dāng)樣本。線性驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：樣本選擇：患者樣本庫：是線性驗(yàn)證理想樣本。為得到不同濃度的樣本，一般選擇高、低2個(gè)濃度樣本，理想高、低濃度應(yīng)在測量區(qū)間高、低兩端。按不同比例混勻上述二種濃度，而得到不同稀釋度的樣本。線性驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：患者樣本添加分析物：若不易得到高濃度患者樣本，可考慮向患者樣本中添加高濃度被測物質(zhì)溶液。為減少對樣本基質(zhì)的影響，盡可能減少添加溶液量（<10%），并記錄溶劑種類。線性驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：用處理過的低濃度樣本稀釋患者樣本庫：以低濃度樣本作為稀釋液可避免基質(zhì)效應(yīng)，若不易得到低濃度患者樣本，可對患者樣本進(jìn)行處理，如透析、熱處理和層析等。但這些處理有可能會改變分析物和（或）基質(zhì)的理化特性。線性驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：用廠家推薦（提供）的稀釋液稀釋樣本庫：某些廠家在評估線性時(shí)，使用特定的稀釋液（如牛白蛋白溶液）。此時(shí)廠家應(yīng)說明稀釋液種類、來源方法，或提供此類特定的稀釋液，供臨床實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證用。線性驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：用生理鹽水稀釋樣本庫：在實(shí)際測量中，當(dāng)測量樣本濃度超過線性范圍，可采用生理鹽水稀釋2倍再測，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)檢查用生理鹽水稀釋樣本后，是否能得到預(yù)期結(jié)果?？紤]到生理鹽水與樣本基質(zhì)不同，不宜用此類樣本作線性實(shí)驗(yàn)。商品質(zhì)控品（校準(zhǔn)品）和線性物質(zhì)：某些廠家使用商品質(zhì)控品（校準(zhǔn)品）和線性質(zhì)控品作為決定測量區(qū)間樣本。線性驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：樣本制備：稀釋所用容量器具、移液器要求：①應(yīng)正確使用經(jīng)校準(zhǔn)的容積器具；②用高精度自動移液器，如Hamilton自動移液器是一種很好混勻2種濃度樣本；③取小容量體積時(shí)宜用陽性置換移液器；④同一容積注加2份高、低患者樣本時(shí)，應(yīng)使用同一支移液器，按注加次數(shù)不同，制成不同濃度樣本。線性驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：樣本制備：不同稀釋度（濃度）樣本制備：①應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，決定每一份樣本的實(shí)際制備體積；②宜采用高、低2個(gè)濃度樣本按不同比例準(zhǔn)確稀釋的方法制備。如：樣本1：低濃度患者樣本；樣本2：3份樣本1與1份樣本5混勻；樣本3：2份樣本1與2份樣本5混勻；樣本4：1份樣本1與3份樣本5混勻；樣本5：高濃度患者樣本線性驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：樣本數(shù)量：實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證線性時(shí)，應(yīng)在廠家聲稱線性范圍內(nèi)取5～7個(gè)濃度樣本，宜考慮各濃度間距基本相等，必要時(shí)可在特定濃度，如醫(yī)學(xué)決定水平測量點(diǎn)。線性驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：方法：5～7*1*2校準(zhǔn)方法：據(jù)說明書規(guī)定方法校準(zhǔn)。室內(nèi)質(zhì)控：樣本測量前后應(yīng)分別進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，如出現(xiàn)失控或其他操作問題，應(yīng)將此次數(shù)據(jù)棄去，重新測量。樣本測量：應(yīng)盡可能在1個(gè)批次測量中完成實(shí)驗(yàn)。每1濃度宜隨機(jī)測量，至少應(yīng)重復(fù)2次，如可能，已重復(fù)測量3～5次。線性驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：測量數(shù)據(jù)有效性判斷：實(shí)驗(yàn)日質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)確認(rèn)：按室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則評價(jià)數(shù)據(jù)有效性。離群值判斷標(biāo)準(zhǔn)：單次測量數(shù)據(jù)超出樣本均值±4s。數(shù)據(jù)剔出量<總測量數(shù)據(jù)量5%。線性驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：有效性數(shù)據(jù)處理：將有效數(shù)據(jù)與初步計(jì)算數(shù)據(jù)填表。線性驗(yàn)證數(shù)據(jù)處理表設(shè)備：XYZ分析項(xiàng)目：AB濃度：mg/dL試劑批號：MK243校準(zhǔn)品批號：RNC59YR稀釋度第一次測量第二次測量均值（實(shí)測濃度）理論濃度實(shí)測濃度-理論濃度14.74.64.654.85-0.227.87.67.77.540.17310.410.210.310.220.0841313.113.0512.910.15515.515.315.415.59-0.19線性驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：畫圖：線性回歸圖：以稀釋度為橫軸，每個(gè)稀釋度的測量均值為縱軸做線性回歸圖。肉眼判斷有無離群值。y=2.1650+2.6850xCoefficientofdeterminationR20.9982

線性驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：差值圖：按線性回歸方程式求出每一稀釋度符合線性的理論濃度，計(jì)算每一稀釋度實(shí)測值和計(jì)算理論值的差異。以理論濃度值為橫軸，差值為縱軸作圖。統(tǒng)計(jì)不同濃度處的差異。若不同濃度處差值都在廠家聲稱值的允許差異百分?jǐn)?shù)內(nèi)，可確認(rèn)廠家聲稱值是可接受的。線性驗(yàn)證數(shù)據(jù)收集和處理：差值圖：線性驗(yàn)證結(jié)果判斷：判讀項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果是否符合廠家聲稱的方程式y(tǒng)=b0+b1x，相關(guān)系數(shù)平方r2是否>0.995。線性驗(yàn)證結(jié)果判斷：判斷方法：如r2>0.995，可初步判斷廠家提供的線性范圍符合要求。臨床判斷值差異值≤廠家聲稱值，可確認(rèn)廠家聲稱可測量范圍是可接受的。當(dāng)不符合上述標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)或增加測量樣本數(shù)量到7～11個(gè)，或增加每個(gè)濃度樣本重復(fù)測量次數(shù)。線性驗(yàn)證結(jié)果判斷：判斷方法：如重復(fù)測量結(jié)果仍未得到理想結(jié)果，應(yīng)與廠家聯(lián)系并取得幫助，或?qū)嶒?yàn)室嘗試尋找是否存在以下問題：樣本中存在干擾物質(zhì)。測量時(shí)因交叉污染或結(jié)果偏高或漂移。方法或試劑盒存在較大的變異。測量結(jié)果具有較大偏移。線性驗(yàn)證驗(yàn)證結(jié)論：舉例：廠家聲稱的線性范圍可靠。151設(shè)備熟悉階段檢驗(yàn)人員應(yīng)熟悉檢測系統(tǒng)的操作、正確的質(zhì)控和校準(zhǔn)、恰當(dāng)?shù)臉?biāo)本制備。線性評估實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證廠商聲明：5～7個(gè)濃度*重復(fù)2次。廠商建立新方法：9～11個(gè)濃度*重復(fù)2～4次。實(shí)驗(yàn)室改良已建立的方法：7～9個(gè)濃度*重復(fù)2～3次。時(shí)間：最好一天內(nèi)完成。確認(rèn)：EP6-A方案和要求EP6-A方案和要求實(shí)驗(yàn)要求測量順序：應(yīng)隨機(jī)。如存在明顯攜帶污染或漂移，選擇對后續(xù)標(biāo)本影響最小的順序進(jìn)行。分析范圍：應(yīng)接近或等于最低和最高廠商聲明的性能范圍。EP6-A方案和要求EP6-A方案和要求確定分析測量范圍作一元一次（直線）、二次（拋物線）或三次（S形）多項(xiàng)回歸分析。階別回歸方程自由度一次Y=b0+b1X2二次Y=b0+b1X+b2X23三次Y=b0+b1X+b2X2+b3X34EP6-A方案和要求確定分析測量范圍一元一次：直線，是判斷某種方法是否為線性的最適方程。一元二次：拋物線，有增加趨勢或減少趨勢。一元三次：S形，呈非線性，b2和b3做t檢驗(yàn)證明非線性。EP6-A方案和要求線性評價(jià)-Westgard混合物記錄均值123X1（0％）6666X2（25％）138138138138X3（50％）278277279278X4（75％）410411411411X5（100％）545546543545線性評價(jià)混合物均值（Y）理論值（X）偏倚誤差％X160（X3均值×0）+6N/AX2138139（X3均值×0.5）-1-0.7％X3278278（X3均值）00X4411417（X3均值×1.5）-6-1.4％X5545556（X3均值×2.0）-11-2.0％驗(yàn)證：臨床可報(bào)告范圍實(shí)驗(yàn)方法：尚無公認(rèn)方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析計(jì)算回收率：回收率=（實(shí)測值/預(yù)期值）*100%按廠家說明書要求判斷結(jié)果。舉例（最高）稀釋倍數(shù)實(shí)測值預(yù)期值回收率1:106688.96688.9100.01:207193.86688.9104.91:1007509.36688.9112.31:2007560.86688.9113.0可報(bào)告范圍上限：20*6688.9=133778舉例（最低）-檢出限稀釋倍數(shù)實(shí)測值預(yù)期值回收率1:1092.585.70107.91:4023.621.42110.21:5019.617.14114.41:10011.38.57131.91:2006.754.29157.3可報(bào)告范圍下限：85.70/5=17.14458四、生物參考區(qū)間biologicalreferenceinterval參考區(qū)間referenceinterval取自生物參考人群的值分布的規(guī)定區(qū)間。示例：假定健康的男性和女性人群血清鈉離子濃度值的中間95%生物參考區(qū)間為135mmol/L～145mmol/L。459生物參考區(qū)間注1：參考區(qū)間一般定義為中間95%區(qū)間，特定情況下，其他寬度或非對稱定位的參考區(qū)間可能更為適宜。注2：參考區(qū)間可能會取決于原始樣品種類和所用的檢驗(yàn)程序。注3：某些情況下，只有一個(gè)生物參考限才是重要的，如上限x，此時(shí)相應(yīng)的參考區(qū)間即是小于或等于x。注4：“正常范圍”、“正常值”及“臨床范圍”等術(shù)語意義不清，因此不建議使用。164參考范圍所有參考抽樣組的各個(gè)參考值的集合。注1：假定參考總體分布范圍可通過參考抽樣組參考范圍和使用適當(dāng)統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行檢驗(yàn)。注2：參考抽樣組是能代表參考總體的足夠數(shù)量的個(gè)體。165參考個(gè)體和參考總體參考個(gè)體：按明確標(biāo)準(zhǔn)選擇的用作檢驗(yàn)對象的個(gè)體。通常健康人的標(biāo)準(zhǔn)是難以制訂的，但可以制訂不健康因素的排除標(biāo)準(zhǔn)。參考總體：所有參考個(gè)體的總和。注：參考總體中的參考個(gè)體數(shù)量通常未知，因此它是一個(gè)假設(shè)的實(shí)體。166生物參考區(qū)間參考區(qū)間參考范圍167C28-A3c，Defining,Establishing,andVerifyingReferenceIntervalsintheClinicalLaboratory，2010參考區(qū)間建立-CLSI文件WS/T406-2012參考區(qū)間建立生物參考區(qū)間：新的檢驗(yàn)項(xiàng)目或檢驗(yàn)方法已檢測過的檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間制定方法驗(yàn)證生物參考區(qū)間：參考區(qū)間的轉(zhuǎn)換參考區(qū)間的驗(yàn)證WS/T402-2012臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定新的檢驗(yàn)項(xiàng)目或檢驗(yàn)方法步驟和流程：按醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)，建立相應(yīng)生物變異和分析干擾物目錄。制訂選擇（或排除）和分組標(biāo)準(zhǔn)，制訂相應(yīng)調(diào)查問卷，以便潛在的參考個(gè)體能使用此標(biāo)準(zhǔn)。參加參考區(qū)間研究個(gè)體，需簽署書面知情同意書，參考個(gè)體需完成調(diào)查問卷。按調(diào)查問卷和其他相應(yīng)健康評估結(jié)果，對潛在參考個(gè)體進(jìn)行分類。按排除標(biāo)準(zhǔn)或其他表明缺乏良好健康狀況的評估情況，將相應(yīng)個(gè)體排除出參考樣品組。按期望參考極值，確定相應(yīng)參考個(gè)體數(shù)量。新的檢驗(yàn)項(xiàng)目或檢驗(yàn)方法步驟和流程：選擇相應(yīng)個(gè)體進(jìn)行標(biāo)本采集，以便按常規(guī)患者標(biāo)本操作方式對指定分析物進(jìn)行檢測。按常規(guī)操作方式，正確采集和處理患者標(biāo)本。在明確條件下，通過常規(guī)患者標(biāo)本操作方式，使用相應(yīng)分析方法對標(biāo)本進(jìn)行分析，并獲取參考值。對參考值進(jìn)行審核，制備直方圖評估數(shù)據(jù)分布情況。確定可能數(shù)據(jù)誤差和（或）離群值。分析參考值，即選擇一種評估方法，評估參考極值和參考區(qū)間。記錄前述所有步驟和流程。已檢測過的檢驗(yàn)項(xiàng)目直接將實(shí)驗(yàn)室或廠家參考值研究建立的有效參考區(qū)間進(jìn)行轉(zhuǎn)換，獲得相應(yīng)參考區(qū)間，而無需進(jìn)行全新研究。僅測試對象人群、所用全部方法完全相同或具有適當(dāng)可比性時(shí)，才能進(jìn)行轉(zhuǎn)換?；虬础墩_度驗(yàn)證》文件所述方法，對測量系統(tǒng)進(jìn)行可比性驗(yàn)證，通過替代方法和比較方法間比較，證實(shí)兩方法間數(shù)學(xué)關(guān)系，作為調(diào)整、糾正或規(guī)定參考區(qū)間依據(jù)。172轉(zhuǎn)移：參考區(qū)間由方法比對計(jì)算：計(jì)算回歸方程。對比方法：X下限和X上限。實(shí)驗(yàn)方法：Y下限=a+bX下限。Y上限=a+bX上限。參考區(qū)間制定方法參考個(gè)體選擇參考樣本檢驗(yàn)前準(zhǔn)備參考值數(shù)據(jù)檢測、要求和分析參考值分析參考區(qū)間確定參考區(qū)間制定方法參考個(gè)體選擇：篩選標(biāo)準(zhǔn)有：1）飲酒，如酗酒；2）長期或近期獻(xiàn)血；3）血壓異常；4）近期與既往疾病；5）妊娠、哺乳期；6）藥物，如藥物濫用、處方藥、非處方藥、避孕藥等；7）肥胖；8）吸毒；9）特殊職業(yè)；10）環(huán)境因素；11）飲食，如素食、節(jié)食等；12）近期外科手術(shù)；13）吸煙；14）遺傳；15）輸血史；16）濫用維生素；17）運(yùn)動。參考區(qū)間制定方法參考個(gè)體分組：常考慮分組因素有：1）年齡；2）性別；3）血型；4）種族；5）晝夜節(jié)律；6）取樣時(shí)狀態(tài)及時(shí)間；7）月經(jīng)周期；8）妊娠時(shí)期；9）鍛煉（運(yùn)動）；10）飲食；11）吸煙；12）職業(yè)；13）其他。參考個(gè)體選擇：應(yīng)保證研究對象同質(zhì)性，如調(diào)查季節(jié)、時(shí)間、空腹與否等。參考區(qū)間制定方法參考樣本檢驗(yàn)前準(zhǔn)備參考個(gè)體狀態(tài)：樣本采集前是否空腹會對多種檢驗(yàn)項(xiàng)目有直接、間接影響，而長期節(jié)食也會造成許多指標(biāo)改變。樣本數(shù)量：以非參數(shù)方法估計(jì)樣本的參考區(qū)間，至少需要120例，若需分組，則每組至少120人。參考區(qū)間制定方法樣本采集：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對樣本采集、處理、儲存制定操作手冊，有助于醫(yī)生解讀患者檢測結(jié)果。樣本處理與儲存：應(yīng)嚴(yán)格按WS/T225《臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本的收集與處理》文件的規(guī)定進(jìn)行。參考區(qū)間制定方法參考值數(shù)據(jù)檢測、要求和分析測量系統(tǒng)要求：①參加室間質(zhì)評，成績合格；②實(shí)施室內(nèi)質(zhì)控，CV在允許范圍內(nèi)；③實(shí)施檢測系統(tǒng)精密度、正確度驗(yàn)證；④配套系統(tǒng)應(yīng)要求廠家提供校準(zhǔn)品溯源性證明材料；⑤非配套系統(tǒng)應(yīng)與配套系統(tǒng)進(jìn)行比對試驗(yàn)，偏移在允許范圍內(nèi)；⑥操作步驟應(yīng)嚴(yán)格按廠商要求、作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行，正確記錄檢測所得參考值數(shù)據(jù)。參考區(qū)間制定方法離群值判斷：如疑有離群數(shù)據(jù)，應(yīng)將疑似離群值的檢測結(jié)果和其相鄰值的差D和數(shù)據(jù)全距R相除，若D/R≥1/3考慮為離群值。繪制分布圖：目的是了解所測得數(shù)據(jù)分布特性，判斷資料是否正態(tài)分布。參考區(qū)間制定方法參考值分析按檢驗(yàn)與臨床專業(yè)知識確定，參考區(qū)間有單側(cè)參考限和雙側(cè)參考限。采用非參數(shù)方法計(jì)算參考區(qū)間上下限各自的90%置信區(qū)間。參考區(qū)間制定方法參考區(qū)間確定參考區(qū)間統(tǒng)計(jì)方法：①正態(tài)分布資料；②偏態(tài)分布資料。參考區(qū)間分組：參考區(qū)間是否需要分組主要根據(jù)不同檢驗(yàn)項(xiàng)目的臨床意義。182參考區(qū)間分組參考分組：兩組間均值差異有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，作Z檢驗(yàn)。三個(gè)或更多組別間均值差異有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推薦使用ANOVA統(tǒng)計(jì)。183240名醫(yī)學(xué)生按性別鈣頻數(shù)分布184分析物均值標(biāo)準(zhǔn)差男性女性男性女性鈣(mg/dL)9.89.573.12.9z=(9.8-9.57)/√(3.1/120)2+(2.9/120)25.94年輕男性、女性120例分組鈣的均值和標(biāo)準(zhǔn)差參考區(qū)間轉(zhuǎn)換測量系統(tǒng)具有可比性時(shí)參考區(qū)間轉(zhuǎn)換：按EP9文件要求，在進(jìn)行方法學(xué)比較時(shí)，替代方法和比較方法間若具有相似不精密度和已知干擾物、使用相同或具有可比性標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品、使用相同報(bào)告單位、方法間差異絕對值具有可比性的話，比較方法的參考區(qū)間就可以向新建方法轉(zhuǎn)換。參考區(qū)間轉(zhuǎn)換檢測人群具有可比性時(shí)參考區(qū)間轉(zhuǎn)換：如實(shí)驗(yàn)室使用測量系統(tǒng)與制造商/其他實(shí)驗(yàn)室相同或具有可比性測量系統(tǒng)時(shí)，參考區(qū)間轉(zhuǎn)換就涉及參考人群的問題，應(yīng)考慮參考個(gè)體的準(zhǔn)備和標(biāo)本采集和處理步驟。參考區(qū)間轉(zhuǎn)換通過方法學(xué)比較轉(zhuǎn)移參考區(qū)間方法：Koivula提出由臨床實(shí)驗(yàn)室與參考實(shí)驗(yàn)室通過方法學(xué)比較來轉(zhuǎn)移參考區(qū)間，即臨床實(shí)驗(yàn)室從能力驗(yàn)證結(jié)果中仔細(xì)選取6～7個(gè)結(jié)果，計(jì)算與參考實(shí)驗(yàn)室結(jié)果間回歸方程，由此計(jì)算出臨床實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間。參考區(qū)間驗(yàn)證直接使用：分析廠家或其他實(shí)驗(yàn)室提供參考區(qū)間原始資料，內(nèi)容包括：檢驗(yàn)前、中、后程序，參考區(qū)間的估計(jì)方法，以及參考人群地理分布、人口統(tǒng)計(jì)學(xué)資料等。若實(shí)驗(yàn)室判斷自己的情況與這些資料一致，則參考區(qū)間可不經(jīng)驗(yàn)證直接使用。參考區(qū)間驗(yàn)證小樣本驗(yàn)證：若實(shí)驗(yàn)室希望或需要對參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，則實(shí)驗(yàn)室可從本地參考人群中篩選少量參考個(gè)體（n=20），將測得值與參考區(qū)間原始參考值比較。需注意，檢驗(yàn)前、中因素應(yīng)與參考區(qū)間提供實(shí)驗(yàn)室相一致。參考區(qū)間驗(yàn)證小樣本驗(yàn)證方法：按篩選標(biāo)準(zhǔn)從本地參考人群募集參考個(gè)體20人，采樣并測定，剔除離群值后若不滿20例需補(bǔ)足。將20個(gè)測定值與需驗(yàn)證參考區(qū)間比較，若落在參考限外測定值不超過2個(gè)，則該參考區(qū)間可直接使用。參考區(qū)間驗(yàn)證小樣本驗(yàn)證方法：若≥3個(gè)測定值超出，則需重新篩選20人，重復(fù)上述操作，同樣若不超過2個(gè)測定值超出該參考區(qū)間則可使用。若仍有3個(gè)或3個(gè)以上測定值超出，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)重新檢查所用分析程序，考慮是否有人群差異，考慮是否需自己建立參考區(qū)間。參考區(qū)間驗(yàn)證大樣本驗(yàn)證：對某些重要項(xiàng)目參考區(qū)間驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)室可加大參考個(gè)體樣本量（n=60），將其測得值與參考區(qū)間的原始參考值相比較。實(shí)驗(yàn)室分析前、中因素應(yīng)與提供參考區(qū)間的實(shí)驗(yàn)室一致。在統(tǒng)計(jì)學(xué)上，隨樣本量增加，用統(tǒng)計(jì)學(xué)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間人群差異的能力會更強(qiáng)。參考區(qū)間驗(yàn)證大樣本驗(yàn)證方法：按篩選標(biāo)準(zhǔn)得到參考個(gè)體，測定參考值，將其與需驗(yàn)證的參考區(qū)間比較，判斷它們之間的差異是否顯著。若沒有顯著性差異存在，則可接受由制造商或其他實(shí)驗(yàn)室提供的參考區(qū)間。參考區(qū)間驗(yàn)證大樣本驗(yàn)證方法：若有差異，一是實(shí)驗(yàn)室再增加參考個(gè)體的樣本量達(dá)到IFCC制定參考區(qū)間最少樣本量的要求，制定符合本地人群特征的參考區(qū)間；二是使用穩(wěn)健法，直接利用這60名參考個(gè)體所提供的參考值計(jì)算參考區(qū)間。參考區(qū)間驗(yàn)證大樣本驗(yàn)證：不論是樣本大小，若已知實(shí)驗(yàn)室所在地人群和參考區(qū)間原始人群之間在地理分布、人口統(tǒng)計(jì)學(xué)方面有差異，則沒有必要驗(yàn)證，應(yīng)考慮建立新的符合本地人群特征的參考區(qū)間。檢驗(yàn)方法評價(jià)（2）197檢出限、空白限、定量檢出限的定義？分析靈敏度、分析干擾、診斷靈敏性、診斷特異度的定義？驗(yàn)證檢出限的方法？本次講課內(nèi)容197檢出限detectionlimit，limitofdetection，LoD由給定測量程序獲得的測得值，其聲稱的物質(zhì)成分不存在的誤判概率為β，聲稱物質(zhì)成分存在的誤判概率為α。注1：IUPAC推薦α和β的默認(rèn)值為0.05。注2：不要用術(shù)語“靈敏度”表示“檢出限”。199定量檢出限limitofquantitation，LoQ在規(guī)定可接受精密度和正確度條件下，能定量測出標(biāo)本中分析物的最小量。也稱為確定低限、檢測范圍的低限。200空白限limitofblank，LoB在規(guī)定條件下，空白標(biāo)本被觀察到的最大檢測結(jié)果。注1：LoB不是實(shí)際檢測到的濃度，是在實(shí)際濃度處陽性信號，同樣，是在規(guī)定條件下，含有分析物等于LoD水平樣品的預(yù)期最低值。注2：是檢測下限、最小可檢測濃度。201概率分布曲線202EP17-A2，EvaluationofDetectionCapabilityforClinicalLaboratoryMeasurementProcedures，2012檢出限評價(jià)-CLSI文件檢出限驗(yàn)證LoB驗(yàn)證：2～4*3*2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：最小方案：一個(gè)批號試劑、一臺測量設(shè)備；2個(gè)空白標(biāo)本、3天、每天每個(gè)標(biāo)本重復(fù)測定2次；20個(gè)空白重復(fù)結(jié)果。數(shù)據(jù)處理和分析：計(jì)算≤LoB聲稱結(jié)果的百分率。結(jié)果判斷：計(jì)算%若>85%，廠商聲稱值可靠。若<85%，驗(yàn)證失敗，與廠家聯(lián)系，重新驗(yàn)證或建立新的LoB。檢出限驗(yàn)證研究測量總數(shù)（N）觀察比率界值2085%3087%4088%5088%6090%7090%8090%10091%檢出限驗(yàn)證LoD驗(yàn)證：2～4*3*2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：最小方案：一個(gè)批號試劑、一臺測量設(shè)備；2個(gè)廠家聲稱LoD標(biāo)本、3天、每天每個(gè)標(biāo)本重復(fù)測定2次；20個(gè)低值標(biāo)本重復(fù)結(jié)果。數(shù)據(jù)處理和分析：計(jì)算%≥LoB聲稱結(jié)果的百分率。結(jié)果判斷：計(jì)算%若>85%，廠商聲稱值可靠。若<85%，驗(yàn)證失敗，與廠家聯(lián)系，重新驗(yàn)證或建立新的LoD。定量檢出限驗(yàn)證LoQ驗(yàn)證：2～4*3*2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：最小方案：一個(gè)批號試劑、一臺測量設(shè)備；2個(gè)廠家聲稱LoQ標(biāo)本、3天、每天每個(gè)標(biāo)本重復(fù)測定2次；20個(gè)空白重復(fù)結(jié)果。數(shù)據(jù)處理和分析：計(jì)算每次測試的誤差，與允許誤差比較；計(jì)算落在允許誤差范圍內(nèi)測試數(shù)。結(jié)果判斷：計(jì)算%若>85%，廠商聲稱值可靠。若<85%，驗(yàn)證失敗，與廠家聯(lián)系，重新驗(yàn)證或建立新的LoQ。檢出限確認(rèn)LoB和LoD確認(rèn)：4～10*3*2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：最小方案：2個(gè)批號試劑、一臺測量設(shè)備；4個(gè)空白標(biāo)本、4個(gè)低值標(biāo)本、3天、每天每個(gè)標(biāo)本重復(fù)測定2次；60個(gè)空白重復(fù)結(jié)果、60個(gè)低值標(biāo)本重復(fù)結(jié)果。檢出限確認(rèn)LoB和LoD確認(rèn)：在規(guī)定水平Ⅰ類錯(cuò)誤和Ⅱ類錯(cuò)誤。α＝β＝5％檢出限確認(rèn)計(jì)算LoB方法：數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布：空白限LoB：LoB＝μB+1.645σB/(1-(1/4(B-K)))μB：空白檢測均值；σB：空白檢測標(biāo)準(zhǔn)差。數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布：空白限LoB：估計(jì)95%位數(shù)：PX＝NB*0.95+0.5，LoB=PctB100-α如：ρ＝95，NB＝60，PX＝57.5，LoB＝（X57+X58）/2檢出限確認(rèn)計(jì)算LoD方法：數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布：為實(shí)際標(biāo)本檢測結(jié)果中位數(shù)；數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布：為實(shí)際標(biāo)本檢測結(jié)果5％位點(diǎn)與LoB之和。LoD＝LoB+1.645σs/(1-(1/4(B-K)))μs：低值標(biāo)本檢測均值；σs：低值標(biāo)本檢測標(biāo)準(zhǔn)差?？瞻紫?檢出限定量檢出限確認(rèn)LoQ確認(rèn)：4*3*3驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：最小方案：2個(gè)批號試劑、一臺測量設(shè)備；4個(gè)低值標(biāo)本、3天、每天每個(gè)標(biāo)本重復(fù)測定3次；36個(gè)低值重復(fù)結(jié)果。定量檢出限確認(rèn)計(jì)算LoQ方法：計(jì)算每個(gè)標(biāo)本的均值和標(biāo)準(zhǔn)差；計(jì)算每個(gè)標(biāo)本的偏移；計(jì)算總誤差（TE）=偏移+2*s；TE與預(yù)期目標(biāo)比較，則最低濃度作為LoQ。通常：LoB≤LoD≤LoQ。定量結(jié)果報(bào)告定量結(jié)果報(bào)告結(jié)果≤LoB：報(bào)告為不能檢出，但濃度<LoD。LoB<結(jié)果<LoD：報(bào)告為檢出分析物，但濃度<LoQ。LoD≤結(jié)果<LoQ：報(bào)告為檢出分析物，但濃度<LoQ；或報(bào)告結(jié)果，并告知有高不確定度的可能。結(jié)果≥LoQ：可直接報(bào)告結(jié)果。測量系統(tǒng)的靈敏度sensitivityofameasuringsystem簡稱靈敏度sensitivity測量系統(tǒng)的示值變化除以相應(yīng)被測量的量值變化所得的商。注1：可能與被測量的量值有關(guān)。注2：所考慮的被測量值的變化應(yīng)大于測量系統(tǒng)的分辨力。分析干擾analyticalinterference在測定某分析物的濃度或活性時(shí)，受另一非分析物影響而導(dǎo)致測定結(jié)果增高或減低。分為：絕對干擾：指患者標(biāo)本中不含有某物質(zhì)，如存在即會引起干擾。相對干擾：指患者標(biāo)本中含有某物質(zhì)，其含量變化可引起干擾。干擾物interferingsubstance不是被測量，是對測量結(jié)果有影響的量。內(nèi)源性干擾物：因病理原因在樣品中出現(xiàn)的物質(zhì)（如Bil、Hb），可干擾其他物質(zhì)的檢測。外源性干擾物：因樣品中的體外物質(zhì)（如藥物及代謝物、防腐劑等），可干擾其他物質(zhì)的檢測。認(rèn)識干擾效果的重要性方法總分析誤差有3類：不精密度、方法特異性偏差、樣品特異性偏差。在方法學(xué)評價(jià)時(shí)通常只考慮前兩者，樣品特異性偏差常認(rèn)為與特定樣品有關(guān)，不屬于方法學(xué)計(jì)量特性，但如一種檢測方法本身易受某種干擾物質(zhì)影響，則干擾物既可引起系統(tǒng)誤差也可引起偶然誤差。干擾物的干擾效果當(dāng)采用特異性更好的方法作為比對方法時(shí)，特定患者人群樣品中某種干擾物的平均濃度可引起系統(tǒng)偏差，而偏離平均偏差的個(gè)體差異則成為總偶然誤差成分。某些方法中隨機(jī)干擾效果可能超過不精密度成為偶然誤差的主要來源。對于個(gè)體患者，干擾物的干擾效果可隨樣品中干擾物濃度不同而變，易誤認(rèn)為是患者病情的改變。干擾物的干擾效果干擾物對檢測結(jié)果的影響可通過某些方法進(jìn)行補(bǔ)償或修正，使干擾效果在特定患者群體中減小，對常見內(nèi)源性干擾物（如Bil、Hb、脂類等），可通過樣品前處理、樣品空白、血清基質(zhì)校準(zhǔn)或數(shù)學(xué)修正等方法減少干擾效果。干擾效果機(jī)制化學(xué)效應(yīng)：干擾物通過與試劑競爭或抑制指示反應(yīng)改變結(jié)果，或通過絡(luò)合或沉淀作用改變分析物形式。物理效應(yīng)：干擾物與被測