諾如病毒G1型RT-PCR試劑盒使用說明書

/諾如病毒G1型RT—PCR試劑盒使用說明書產(chǎn)品及特點：諾如病毒（NorwalkVirus）是單股正鏈RNA病毒，屬于人類杯狀病毒屬，是一種引起非細菌性急性腸胃炎的病毒，如諾病毒感染性強，以腸道傳播為主，通過口糞傳播，以污染的水源、食物、貝類、物品、空氣作為重要傳播載體。諾如病毒可分為GIG五個基因群，其中引起人類感染的重要是G1和G2群。因此快速靈敏診斷具有緊要意義。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，采納RTPCR技術檢測疑似感染動物血清或組織中的諾如病毒G1型。它具有下列特點：1.即開即用，用戶只需要供給樣品RNA模板。2.供給陽性對比，便于區(qū)分假陰性樣品。3.產(chǎn)品細心優(yōu)化且特異性高，引物是依據(jù)諾如病毒G1型RNA高度保守區(qū)設計，不會跟除此之外的其它病毒RNA發(fā)生交叉反應。4.RTPCRmix中含上樣染料，擴增反應后可以直接上樣電泳。5.本產(chǎn)品充足50次20μL體系的PCR反應。6.本產(chǎn)品只能用于定性試驗，不能用于定量。7.本產(chǎn)品只能用于科研。規(guī)格及成分：成份ABCDE使用手冊注：為避開擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不供給活體樣品做陽性對比，只供給專一的核酸片段作為陽性對比。運輸及保存：低溫運輸，20℃保存，保存期限為12個月。自備試劑：樣品RNA使用方法：一、樣品DNA的制備1.假如有N個樣品，必需設置N+2個提取反應，多出的兩個中一個是PC（樣品制備陽性對比），一個是NC（樣品制備陰性對比）?？梢杂?0μL諾如病毒G1型PCR陽性對比（1×10E6拷貝/μL，本試劑盒供給）再加上肯定量的水作為制備的陽性對比（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）。可以用水作為制備的陰性對比。2.用自選方法純化上述N+2個樣品的DNA。本試劑盒跟市場上大多數(shù)細菌DNA提取試劑盒兼容。二、設置PCR反應（20μL體系）3.標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的DNA樣品，額外加添的兩個管一個用于PCR陽性對比，另一個用于PCR陰性對比。依照下表在各PCR管中加入下列成分：成分/每管樣品管N+2個PCR陰性對比PCR陽性對比A10μL10μL10μLD2μL2μL2μL制備的N+2個DNA樣品7μLC7μLE7μLB1μL1μL1μL4.上機進行PCR，PCR反應參數(shù)為:過程溫度時間逆轉(zhuǎn)錄50℃20min預變性95℃10minPCR反應（45個循環(huán)）95℃30sec55℃60sec72℃60sec延長72℃7min三、電泳分析5.取510uL擴增產(chǎn)物進行常規(guī)瓊脂糖電泳，檢測擴增效果，由于擴增產(chǎn)物較短，建議用1.5%2.0%的瓊脂糖凝膠。6.陽性樣品預期得到的擴增產(chǎn)物長度為220bp左右。假如兩個陰性對比（樣品制備陰性對比或PCR陰性對比）有此擴增產(chǎn)物，說明環(huán)境污染，則整個試驗無效，不需要分析試驗結果。7.假如全部樣品和PCR陽性對比均無此擴增產(chǎn)物，則說明有系統(tǒng)性的問題（試劑、設備、程序、操作等），需要重復