醫(yī)學(xué)免疫學(xué)課件：B淋巴細(xì)胞

1B淋巴細(xì)胞（BLymphocyte)

B淋巴細(xì)胞的發(fā)育場(chǎng)所Q1:為什么只有B細(xì)胞才能產(chǎn)生抗體？Q2:為什么我們能產(chǎn)生如此之多、可精確識(shí)別不同抗原的抗體(1010)？5學(xué)習(xí)內(nèi)容B細(xì)胞的表面分子及其作用B細(xì)胞的分化發(fā)育B細(xì)胞亞群B細(xì)胞功能6B細(xì)胞抗原受體復(fù)合物（BCR)共受體協(xié)同刺激分子抑制性受體其他表面分子一B細(xì)胞的表面分子及其作用71，BCR復(fù)合物：接受和傳遞抗原刺激信號(hào)Bcellreceptor，B細(xì)胞抗原受體B細(xì)胞特征性表面標(biāo)志異源二聚體：

mIg（membraneimmunoglobulin) Ig/（CD79a/CD79b)8mIg的結(jié)構(gòu)與功能Ig單體識(shí)別和結(jié)合抗原，接受抗原刺激信號(hào)特點(diǎn)：胞質(zhì)區(qū)短Ig/：輔助9IgSF成員Ig/近胞膜處由二硫鍵相連，構(gòu)成二聚體與mIg通過跨膜區(qū)的靜電吸引組成BCRIg/胞質(zhì)區(qū)含免疫受體酪氨酸活化基序ITAM（immunoreceptortyrosine-basedactivationmotif)Ig/（CD79a/CD79b)10Ig/（CD79a/CD79b)1112功能：加強(qiáng)B細(xì)胞活化信號(hào)的傳導(dǎo)CD19,CD21,CD81復(fù)合體，非共價(jià)結(jié)合CD19:胞質(zhì)區(qū)傳遞信號(hào)CD21:CR2（配體：C3d,C3di,C3b)EBV受體2，B細(xì)胞共受體13CD21與C3d結(jié)合，發(fā)揮共受體作用識(shí)別補(bǔ)體募集激酶穩(wěn)定連結(jié)143，協(xié)同刺激分子：B細(xì)胞活化的第一信號(hào)：由Ag與BCR結(jié)合提供B細(xì)胞活化的第二信號(hào)：

T和B細(xì)胞的協(xié)同刺激分子相互作用提供CD40：TNFRSF,恒定表達(dá)于成熟B細(xì)胞，與T細(xì)胞的CD40L(CD154)結(jié)合，B細(xì)胞活化必備信號(hào)CD80(B7.1)/CD86(B7.2)：活化B細(xì)胞表達(dá)增加

CD80/CD28：增強(qiáng)T細(xì)胞激活

CD86/CD152（CTLA-4)：抑制T細(xì)胞活化抑制性受體含ITIM(Immunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotif)CD324，抑制性受體：18CD32:FcγRⅡ，與IC交聯(lián)，負(fù)調(diào)節(jié)B細(xì)胞活化19CD22:特異性表達(dá)于B細(xì)胞，抑制性受體。負(fù)調(diào)CD19/21/81共受體。5，其他表面分子CD20:B細(xì)胞特異性標(biāo)志。調(diào)節(jié)跨膜鈣離子流動(dòng)，調(diào)節(jié)B細(xì)胞增殖分化。美羅華：第一個(gè)被FDA批準(zhǔn)用于治療彌漫大B細(xì)胞（非霍奇金）淋巴瘤的單抗.與CD20特異性結(jié)合，引起細(xì)胞溶解（可能機(jī)制：CDC，ADCC)--LFA-1--ICAM-1黏附分子：T,B細(xì)胞接觸LFA-1(Lymphocytefunction-associatedantigen1,CD11a/CD18)ICAM-1(IntercellularAdhesionMolecule1,CD54)BT絲裂原受體結(jié)合B細(xì)胞有絲分裂原(PWM、LPS)，刺激B細(xì)胞轉(zhuǎn)化

MHC分子24二B細(xì)胞的分化發(fā)育

25B細(xì)胞分化發(fā)育成熟的標(biāo)志：功能性BCR的表達(dá)自身免疫耐受的形成26BCR基因庫(kù)包括H（重鏈)，κ,λ（輕鏈)

H基因庫(kù)（重鏈基因連鎖群）：

---第14號(hào)染色體κ基因庫(kù)（κ鏈基因連鎖群）：

---第2號(hào)染色體λ基因庫(kù)（λ鏈基因連鎖群）：

---第22號(hào)染色體1，BCR基因結(jié)構(gòu)及其重排(拓展材料）BCR胚系基因以基因片段的形式存在:V區(qū)：重鏈（V、D、J）；輕鏈（V、J）。C區(qū)：V區(qū)基因的下游。各種基因片段都有多個(gè)拷貝，但只有一個(gè)參與組成編碼基因。V：variablegenesegmentD:diversitygenesegmentJ:joininggenesegment289括號(hào)中的數(shù)字代表基因片斷數(shù)29BCR基因重排基因重排：

B細(xì)胞在分化成熟過程中，V區(qū)基因由分隔的，無(wú)轉(zhuǎn)錄活性的基因片段在特異性重組酶作用下，連接成一個(gè)完整的具轉(zhuǎn)錄活性功能基因的過程。重鏈V區(qū)基因（DJ,VDJ)重排V與C基因片斷連接，表達(dá)重鏈輕鏈基因重排()Ig表達(dá)重鏈基因重排過程重組信號(hào)序列(RSS)：recombinationsignalsequence，位于V,D,J基因片斷兩側(cè)，包含七聚體CACAGTG及九聚體ACAAAAACC,其間有間隔序列?；蛑嘏畔嚓P(guān)元件32重組酶（recombinase)：重組激活酶（RAG1/2)：只表達(dá)于不成熟B細(xì)胞，識(shí)別并切除RSS序列末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT)DNA外切酶，DNA合成酶TdT的作用非模板編碼，將nt插入到DNA末端重組過程：識(shí)別RSS，切斷，環(huán)出，連接，修復(fù)DNA35Video：generecombination36BCR基因表達(dá)的特點(diǎn)一個(gè)B細(xì)胞克隆只分泌一種Ig等位基因排斥(allelicexclusion)

位于一對(duì)染色體上的輕重鏈基因，只有其中一條染色體上的基因表達(dá)，先重排成功的基因抑制另一等位基因的重排。同種型排斥(isotypeexclusion)κ輕鏈基因的表達(dá)可抑制λ輕鏈基因的表達(dá)，一個(gè)Ig分子只表達(dá)一種輕鏈。382，BCR多樣性產(chǎn)生的機(jī)制組合多樣性連接多樣性體細(xì)胞高頻突變（1）組合多樣性（combinationaldiversity)40X530X465X27X6200+12010,530CombinationsV(D)J:32010,530X=3,369,600H/L:40（2）連接多樣性（junctionaldiversity)基因片斷間的連接不準(zhǔn)確（TdT)： 插入 替換 缺失41CTATCAVH--DHCATVH-CA-DHTCAVH-A-DHVH-CA-DHTHis-SerSerGln連接多樣性+43（3）體細(xì)胞高頻突變（somatichypermutation)發(fā)生于外周淋巴器官之生發(fā)中心點(diǎn)突變的方式V區(qū)CDR(HVR)區(qū)，促進(jìn)抗體的親和力成熟44低親和力B高親和力Bmutationselection生發(fā)中心VHVLAgVHVLVHVLVHVLVHVLAgVHVL3，B細(xì)胞的分化發(fā)育B細(xì)胞由原始造血干細(xì)胞到成熟B細(xì)胞，需經(jīng)歷多個(gè)連續(xù)、特征性變化階段。

外周淋巴器官StemCell早期pro-B晚期pro-B大pre-B小pre-B未成熟B成熟Bcell46兩個(gè)階段：1，抗原非依賴期(中樞免疫器官)：祖B細(xì)胞與前B細(xì)胞發(fā)生基因重排和表達(dá)，產(chǎn)生B細(xì)胞中樞耐受2，抗原依賴期(外周免疫器官)

成熟B細(xì)胞在生發(fā)中心發(fā)生體細(xì)胞高頻突變，Ig親和力成熟。

47YYYYYYYYLymphoidStemCellPre-BCellPlasmaCellMemoryBCellMatureBCellImmatureBCell抗原依賴期ActivatedBCell抗原非依賴期骨髓外周淋巴器官YYIgMYIgMIgD抗原Pro-BCellYYOmnipotentStemCell48分泌CK2.基質(zhì)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子B骨髓基質(zhì)細(xì)胞提供B細(xì)胞分化發(fā)育的條件Stromalcell1.基質(zhì)細(xì)胞與B細(xì)胞的接觸細(xì)胞接觸49BBStromalcell50抗原非依賴期的發(fā)育階段

（1）祖B細(xì)胞(pro-B)D-JV-DJ重排開始表達(dá)Ig/異源二聚體早期祖B細(xì)胞重鏈重排晚期祖B細(xì)胞重鏈重排（2）前B細(xì)胞（pre-B）大前B細(xì)胞：表達(dá)pre-B受體（鏈+替代輕鏈）可抑制另一條H鏈重排小前B細(xì)胞：L基因發(fā)生V-J重排

53（3）未成熟B細(xì)胞（immatureBcell）表達(dá)B細(xì)胞抗原受體mIgM陰性選擇：具備識(shí)別抗原能力，與抗原結(jié)合產(chǎn)生負(fù)應(yīng)答，使B細(xì)胞發(fā)生凋亡（克隆清除，clonedeletion）是自身免疫耐受形成的關(guān)鍵點(diǎn)54（4）成熟B細(xì)胞（matrueBcell）

又稱初始B細(xì)胞（naiveBcell)同時(shí)表達(dá)mIgM和mIgD（差異剪接）離開骨髓，定居于外周淋巴結(jié)，介導(dǎo)特異性體液免疫應(yīng)答（抗原依賴期）55IgMandIgDmRNA的差異剪切Cm1Cm2Cm3Cm4Cd1Cd2Cd3pA1VDJCm1Cm2Cm3Cm4Cd1Cd2Cd3VDJAAA在pA2處進(jìn)行RNA剪切和加尾VDJCmIgMmRNAVDJCdIgDmRNACg1Cg3CdCmVDJCm1Cm2Cm3Cm4Cd1Cd2Cd3DNApA1pA2VDJ在pA1處進(jìn)行RNA剪切和加尾AAAB細(xì)胞發(fā)育各階段的變化主要為Ig基因重排和膜表面標(biāo)志，以及黏附分子和CKR的變化。B細(xì)胞重鏈和輕鏈的重排早期祖B晚期祖B前BVH-DJH第一條染色體VH-DJH第二條染色體未成熟BNOYESNOBk第一條染色體k第二條染色體l第一條染色體l第二條染色體NONONONOYESYESNOYESYESYESYESYIgMkBYIgMlBDH-JH第一條染色體DH-JH第二條染色體YESNO584，B細(xì)胞中樞免疫耐受的形成1,克隆清除（clonedeletion)：未成熟B細(xì)胞mIgM若與自身抗原結(jié)合，將不會(huì)活化B細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡2,受體編輯（“再改造”：一些識(shí)別自身抗原的未成熟B可通過受體編輯（receptorediting)改變BCR。細(xì)胞識(shí)別自身抗原后，活化RAG，使輕鏈VJ再次重排，合成L鏈3,無(wú)能（anergy)：一些B細(xì)胞mIgM表達(dá)下調(diào)，進(jìn)入外周淋巴器官，但對(duì)抗原刺激不會(huì)產(chǎn)生應(yīng)答克隆清除未成熟B識(shí)別自身抗原MULTIVALENTB凋亡YYBImmatureBBSmallpre-B小前B細(xì)胞輕鏈重排再改造：受體編輯，輕鏈VJ重排輕鏈重排受體編輯VCJVVVYBB識(shí)別自身抗原B凋亡YBB識(shí)別新抗原，接受檢查CJVVVV激活RAG-1andRAG-2B細(xì)胞無(wú)能（anergy)mIgM表達(dá)下調(diào)表達(dá)IgD離開骨髓對(duì)自身抗原無(wú)反應(yīng)性存活1-5days64通過克隆清除、受體編輯、失能，B細(xì)胞形成了對(duì)自身抗原的中樞免疫耐受65三、B細(xì)胞亞群

兩個(gè)亞群：

CD5+：B-1細(xì)胞，固有免疫

CD5-：B-2細(xì)胞，適應(yīng)性免疫

661，B-1細(xì)胞亞群

產(chǎn)生于個(gè)體發(fā)育的胚胎期，自我更新分布于胸腔、腹腔和腸壁固有層中針對(duì)細(xì)菌多糖等TI抗原結(jié)合不同的抗原表位—多反應(yīng)性產(chǎn)生IgM類低親和力抗體產(chǎn)生針對(duì)自身Ag的抗體，與自身免疫病有關(guān)CD5BYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYIgM672，B-2細(xì)胞亞群分泌抗體，參與體液免疫應(yīng)答出現(xiàn)較晚，需要Th

最終分化為漿細(xì)胞抗原遞呈免疫調(diào)節(jié)68(P79)69調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Breg)1996年,Janeway等在小鼠EAE模型中證實(shí)Breg的存在（JEM,184）。1997年，Mizoguchi引入Breg概念（JEM,186）定義：來