臨床本科3溶貧檢測

臨床本科3溶貧檢測第1頁/共46頁freeHb(a2b2

tetramers)HbdimersHaptoglobin（Hp）haptoglobin-hemoglobincomplexkidneyslivermetHbbindstohemopexin&albuminferriheme(Fe3+)globin第2頁/共46頁溶貧的臨床表現(xiàn)急性：發(fā)熱、畏寒，可出現(xiàn)Hb尿，腎功能改變慢性：貧血、黃疸、脾腫大、免疫指標(biāo)異常，膽紅素代謝異常第3頁/共46頁紅細(xì)胞破壞增多的依據(jù)RBC壽命<15天血片見RBC碎片血漿游離Hb增高（血管內(nèi)溶血）Hb尿檢測（＋），醬油色尿含鐵血黃素試驗（＋）血清非結(jié)合膽紅素增高尿膽原增高血清結(jié)合珠蛋白減低血漿高鐵血紅素白蛋白檢測第4頁/共46頁球形紅細(xì)胞第5頁/共46頁破碎紅細(xì)胞、盔形紅細(xì)胞等第6頁/共46頁一、溶貧篩查試驗1、血漿游離Hb測定

正常值：<50mg/L

意義：血管內(nèi)溶血的指征第7頁/共46頁2、血清結(jié)合珠蛋白測定正常值：0.7~1.5g/L各種溶血時結(jié)合珠蛋白均可減低，嚴(yán)重血管內(nèi)溶血明顯減低，甚至測不出（血漿游離血紅蛋白超過1.3g/L時）。巨幼細(xì)胞貧血、嚴(yán)重肝病、口服避孕藥、先天性無結(jié)合珠蛋白血癥等減低或消失。增高見于炎癥、感染、組織壞死、惡性腫瘤、風(fēng)濕性疾病、口服避孕藥、類固醇激素治療。第8頁/共46頁3、血漿高鐵血紅素清蛋白檢測

正常：陰性嚴(yán)重血管內(nèi)溶血時呈陽性4、RBC壽命測定（最佳）正常值：25~32天51Cr同位素標(biāo)記，半衰期<15天，說明有溶血存在。第9頁/共46頁5、尿含鐵血黃素試驗（Roustest)正常值：陰性溶貧中陽性只占10~20%第10頁/共46頁第11頁/共46頁二、紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗1、RBC滲透脆性試驗檢測紅細(xì)胞在不同濃度低滲鹽水中的抵抗力RBC表面積/RBC容積比值與RBC脆性成反比第12頁/共46頁參考值：開始溶血0.42%~0.46%(NaCl液)完全溶血0.28%~0.32%(NaCl液)意義：脆性增高遺傳性球形細(xì)胞增多癥脆性減低地中海貧血、缺鐵性貧血第13頁/共46頁2、自身溶血試驗及其糾正試驗正常人紅細(xì)胞經(jīng)孵育48h后，溶血率很低<4.0%，加葡萄糖或ATP后更低（<0.6%）膜缺陷性溶貧時，溶血率升高，但可被糾正G6PD缺陷：＋ATP：可糾正但不能糾至正常＋G：同上PK缺陷：＋ATP：可糾正＋G：不糾正第14頁/共46頁三、酶缺陷的檢驗1、高鐵血紅蛋白還原試驗

G6PD高鐵血紅蛋白還原酶G6PNADP還原型美蘭HbFe3+6PGNADPH氧化型美蘭HbFe2+NaNO2

第15頁/共46頁正常值：定性法（－）半定量法還原率>75%G6PD缺陷：定性（＋），半定量<70%。第16頁/共46頁2、氰化物-抗壞血酸試驗原理：略結(jié)果：正常血液幾小時后變暗色意義：G6PD缺乏者血液變成棕色（巧克力色），純合子在2h內(nèi)即變色，雜合子要3~4h變化第17頁/共46頁3、變性珠蛋白小體生成試驗受檢RBC＋乙酰苯肼作活體染色（甲基紫）

37℃1~2h

有變性珠蛋白小體，則膜上形成紫黑色顆粒下一張G6PD缺乏致GSH減少，高鐵Hb增多，形成Heinz小體第18頁/共46頁體外活體染色后，光鏡下發(fā)現(xiàn)的1~2μm顆粒狀折光小體。

結(jié)果：正常人<30%意義：見于不穩(wěn)定血紅蛋白病、G6PD缺陷癥和芳香族苯胺或硝基類化合物中毒所致的溶貧。第19頁/共46頁4、G6PDPK活性測定第20頁/共46頁四、珠蛋白生成異常試驗包括血紅蛋白電泳、HbF定量測定（堿變性試驗）等第21頁/共46頁五、免疫性溶血的檢驗1、抗人球蛋白試驗（Coombs`test）直接法、間接法第22頁/共46頁直接抗人球蛋白試驗（DAGT）測RBC表面結(jié)合的抗體（更重要，價值高）受檢者RBC懸液+等量抗人球蛋白試劑

低速離心后觀察凝集37℃，15min

第23頁/共46頁間接法（IAGT）：測游離特異的抗體（先使RBC致敏，再與抗人球蛋白血清結(jié)合）第24頁/共46頁Coombs`test臨床意義正常人抗人球蛋白試驗直接、間接均陰性自身免疫性溶血性貧血（溫抗體型37℃條件下作用最強(qiáng)IgG）,(冷抗體型4℃條件下進(jìn)行試驗IgM)

新生兒同種免疫溶血病、SLE、RA、HD、NHL可陽性。第25頁/共46頁2、冷熱溶血試驗

檢測補(bǔ)體依賴性冷熱溶血素存在D-L雙向抗體，則（+）正常為（-），（+）見于PNH

3、冷凝集素試驗

參考值：效價<1:40意義：AIHA↑↑↑第26頁/共46頁六、PNH相關(guān)檢測屬于紅細(xì)胞膜缺陷，慢性血管內(nèi)溶血PNH不同時間尿樣第27頁/共46頁1、酸化溶血試驗（Hamtest）特異性高，是國內(nèi)外公認(rèn)的PNH確診試驗利用補(bǔ)體在弱酸性環(huán)境中激活，并攻擊RBC膜，致溶血。正常人陰性，PNH陽性。第28頁/共46頁2、蔗糖溶血試驗特異性敏感性均不如Ham試驗，僅做篩選。參考值：陰性3、蛇毒因子溶血試驗特異檢測PNH第29頁/共46頁第四節(jié)血型鑒定與交叉配血第30頁/共46頁血型定義：紅細(xì)胞系統(tǒng)血型：第31頁/共46頁一、ABO系統(tǒng)與臨床意義

1、分型原則

根據(jù)紅細(xì)胞膜上含有抗原和血漿中含有相應(yīng)抗體分為A、B、AB、O四型

血型（表型）紅細(xì)胞上抗原血漿中抗體基因型

AA抗BAA、AO

BB抗ABB、BO

O無

抗A、

抗B、抗ABOO

ABA、B無

AB

第32頁/共46頁第33頁/共46頁父母的血型與子女的血型關(guān)系

第34頁/共46頁2、抗原

A、B抗原（含H抗原）在胚胎期已形成，出生時抗原性不強(qiáng)，故胎兒、新生兒定血型時凝集性差。血型抗原終生不變。H抗原屬分泌型物質(zhì)，存在各組織中，以唾液為多，可輔助鑒定ABO血型。第35頁/共46頁3、抗體

抗A、抗B、抗AB屬IgG或IgM型，天然性抗體以IgM為主，免疫性以IgG為主（如輸血、妊娠后）。O血型血清內(nèi)抗體屬IgG。新生兒溶血與IgG有關(guān)。抗體也終生不變

抗A、抗B在生后3-6月才開始產(chǎn)生,5-6歲達(dá)高峰，故嬰幼兒定血型時，抗體效價低，抗原位點少，易誤定第36頁/共46頁

ABO亞型亞型是指屬同一血型抗原，但抗原結(jié)構(gòu)或抗原位點數(shù)有一定差異。最多見的最有意義亞型是A型中的A1、A2（A1A、A1B、A2B)。A2B含有A1抗體。凡在血型鑒定過程中出現(xiàn)不明顯或可疑結(jié)果時應(yīng)做亞型鑒定。第37頁/共46頁4、血型鑒定第38頁/共46頁正向直接定型：用已知抗體血清檢查紅細(xì)胞的抗原反轉(zhuǎn)定型：用已知血型的紅細(xì)胞檢查血清中抗體

正定型 反定型 抗A抗B抗AB A細(xì)胞B細(xì)胞O細(xì)胞

+-+ -+- A- ++ + -- B+++- -- AB- - - + +- O

血型第39頁/共46頁三、交叉配血、輸血原則

1、交叉配血主側(cè)交叉配血：次側(cè)交叉配血:：第40頁/共46頁

2、輸血原則

輸血前復(fù)查血型，做交叉配血;輸同型血，多個不同血源間互相交叉配血;

嚴(yán)格掌握輸血指征;

提倡成分輸血

第41頁/共46頁

意義輸血；輔助診斷新生兒溶血??；器官移植；遺傳分析；其他第42頁/共46頁二、Rh系統(tǒng)與臨床意義

1900年發(fā)現(xiàn)ABO血型，1940年發(fā)現(xiàn)Rh血型。抗原有CcDEe五種，一般以D定型。含有D抗原的紅細(xì)胞稱為Rh陽性，不含D抗原的為Rh陰性.