實驗五微生物培養(yǎng)基配制與滅菌詳解演示文稿

實驗五微生物培養(yǎng)基配制與滅菌詳解演示文稿當前1頁，總共70頁。優(yōu)選實驗五微生物培養(yǎng)基配制與滅菌當前2頁，總共70頁。一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質1.基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽2.特殊營養(yǎng)：維生素、生長因子等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧氣的需求：細菌：；

放線菌：；真菌：。4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無凝固劑瓊脂分離鑒定工業(yè)生產化學成分：物理性質：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基當前3頁，總共70頁。微生物培養(yǎng)基的配制與滅菌當前4頁，總共70頁。目的要求1.明確培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制的一般方法和步驟。2.了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。3.熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關準備工作及操作方法。（預習）當前5頁，總共70頁。培養(yǎng)基配制原則⑴目的明確：⑵營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當⑶適宜的pH值：有機碳源異養(yǎng)型：根據微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑細菌偏堿，真菌偏酸（CO2碳源）生產科研當前6頁，總共70頁。培養(yǎng)基的配制方法和步驟稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，溶解。調pH值：用1NNaOH或1NHCl調pH，用pH試紙對照。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當補水。過濾分裝包扎，掛上標簽（滅菌指示條），注明何種培養(yǎng)基和配制時間。滅菌：1210C20min倒置平板檢查：培養(yǎng)基滅菌后必須在370C下恒溫培養(yǎng)24h，確定無菌生長，方可使用。按培養(yǎng)基

配方稱量加水加

熱熔化調節(jié)

pH值過濾分裝

包裝滅菌檢查滅菌

徹底與否當前7頁，總共70頁。培養(yǎng)基的配制和滅菌過程中的注意事項1.蛋白胨很易吸濕，在稱取時動作要迅速。3.在瓊脂溶化過程中，應控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦，配制培養(yǎng)基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養(yǎng)基中，影響細菌生長。4.pH不要調過頭，以免回調而影響培養(yǎng)基內各離子的濃度。5.分裝過程中，注意不要使培養(yǎng)基沾在管（瓶）口上以免引起污染。2.稱藥品時嚴防藥品混雜，一把牛交匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈，擦干，再稱取另一藥品。瓶蓋也不要蓋錯。當前8頁，總共70頁。培養(yǎng)基配制

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器材培養(yǎng)基、玻璃器皿天平秤、藥匙當前9頁，總共70頁。培養(yǎng)基的配制

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裝水以量桶裝取適當量蒸餾水于玻璃容器中于玻璃容器上標示培養(yǎng)基名稱當前10頁，總共70頁。培養(yǎng)基配制–

秤藥放上秤藥紙并歸零以秤藥匙舀出適當量培養(yǎng)基(請看培養(yǎng)基罐上說明)當前11頁，總共70頁。培養(yǎng)基配制–

溶解培養(yǎng)基傾倒培養(yǎng)基時小心不要沾到玻璃壁上當前12頁，總共70頁。注意事項–

配藥結束清理配藥桌面與天平清洗秤藥匙，擦干放回藥品放回藥品柜當前13頁，總共70頁。培養(yǎng)基配制–

分裝調整分注器(Dispensette)

刻度分裝試管蓋上試管蓋當前14頁，總共70頁。6.在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內冷空氣的排除是否完全極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸氣的膨脹壓，所以，當水蒸氣中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸氣的溫度低于飽和蒸氣的溫度。不能滅菌的物質：

1.爆炸性物質硝化丙烷、硝化甘油、硝化纖維，含氮硅酯。三硝基苯、三硝基甲苯、苦味酸、和其它爆炸性含氮復合物。過醋酸、過氧化甲乙酮、過氧化苯甲酰和其它過氧化有機物。

2.lgnitable物質金屬鋰、鉀、鈉、黃磷、氧化硫，和紅磷。培養(yǎng)基的配制和滅菌過程中的注意事項當前15頁，總共70頁。實驗室的常用培養(yǎng)基：細菌：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；放線菌：高氏1號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；霉菌：查氏合成培養(yǎng)基；當前16頁，總共70頁。牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基:用于分離和培養(yǎng)細菌的基礎培養(yǎng)基，又稱天然培養(yǎng)基。

配方如下：牛肉膏3g蛋白胨10g氯化鈉5g瓊脂20g自來水1000mLpH7.2~7.4當前17頁，總共70頁。淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏一號），用于分離和培養(yǎng)放線菌，是一種合成培養(yǎng)基。

配方如下：

可溶性淀粉20.0gKNO31.0gK2HPO40.5gMgSO4?7H2O0.5gNaCl0.5gFeSO4?7H2O0.01g瓊脂20g自來水1000mLpH7.4－7.6當前18頁，總共70頁。查氏培養(yǎng)基，用于分離和培養(yǎng)霉菌，是一種合成培養(yǎng)基。

配方如下：

NaNO32.0gK2HPO41.0gKCl0.5gMgSO40.5gFeSO40.01g

蔗糖30g

瓊脂20g自來水1000mLpH自然當前19頁，總共70頁。LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)基1000mlLB培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mL胰蛋白胨(Tryptone)10g氯化鈉（NaCl）10g瓊脂（agar）15g酵母提取物(Yeast

extract)5g

20g當前20頁，總共70頁。YPD培養(yǎng)基foryeast1000mlYPD培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mL蛋白胨(peptone)20g瓊脂（agar）20g酵母提取物(Yeast

extract)10g

葡萄糖1-2%當前21頁，總共70頁。耐高溫需保持干燥的物品，160～170℃1-2小時接種環(huán)、接種針等金屬用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121℃、15～30min二.無菌技術：防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：當前22頁，總共70頁。濕熱滅菌的優(yōu)點濕熱滅菌法菌體吸收水分蛋白質較易凝固濕熱的穿透力比干熱大，水的傳熱能力比許多非導體的固體強濕熱的蒸汽有潛熱存在，1g水在100℃由氣態(tài)變?yōu)橐后w態(tài)可放出2.26kJ，可增強滅菌效果當前23頁，總共70頁。培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法當前24頁，總共70頁。當前25頁，總共70頁。放入殺菌鍋

(Autoclave)

滅菌培養(yǎng)基配制–

滅菌當前26頁，總共70頁。加水蓋過鐵板放東西關門調整溫度時間關緊泄壓閥注意事項–

殺菌鍋的使用當前27頁，總共70頁。注意事項–

殺菌釜使用滅菌結束后，等壓力降回零時才可打開門進入殺菌釜之物品，蓋子不可關太緊或太松當前28頁，總共70頁。注意事項–

殺菌釜使用拿滅菌后物品請記得帶耐熱手套當前29頁，總共70頁。培養(yǎng)基配制–

平板培養(yǎng)基滅過菌之固態(tài)培養(yǎng)基于無菌操作臺(Laminarflow)內倒制平板培養(yǎng)基(Plate)日光燈UV燈風扇當前30頁，總共70頁。培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法當前31頁，總共70頁。培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法當前32頁，總共70頁。間歇滅菌法：待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，連續(xù)3d重復進行。在每兩次蒸煮之間，將物品（指培養(yǎng)基）放在370C恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，以便下次蒸煮時殺滅。培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法當前33頁，總共70頁。過濾除菌法：不能用加熱滅菌的液體物質（如維生素、血清），一般可用細菌過濾器進行除菌。培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法當前34頁，總共70頁。紫外線滅菌法：一般30W燈管，9m3空間，距地面2m每次打開紫外線照射0.5h，就使室內空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學消毒劑，可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌。培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法當前35頁，總共70頁?；瘜W藥劑消毒滅菌：微生物實驗室中常用的化學殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液，它們有的是殺菌劑，有的是抑菌劑。培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法當前36頁，總共70頁。本次實驗報告內容記錄本實驗配制培養(yǎng)基的名稱、數量，并圖解說明其配制過程，指明要點。當前37頁，總共70頁。思考題固體培養(yǎng)基加瓊脂的作用是什么？干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌和有何不同？培養(yǎng)基配制完成后，為什么必須立即滅菌?若不能及時滅菌應如何處理?已滅菌的培養(yǎng)基如何進行無菌檢查?當前38頁，總共70頁。實驗五第二節(jié)

微生物檢驗的基本操作技術當前39頁，總共70頁。主要內容無菌技術M的接種與分離技術微生物的培養(yǎng)方法微生物的生長現象與觀察當前40頁，總共70頁。（一）什么是無菌技術指在微生物實驗工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關措施。當前41頁，總共70頁。（二）無菌環(huán)境無菌室無菌柜超凈工作臺當前42頁，總共70頁。1、無菌室（1）無菌室的結構：更衣間、緩沖間、操作間（2）無菌室的消毒和防污染每日（使用前）紫外線照射（1~2小時）.每周用甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時）.每月用新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進行消毒。當前43頁，總共70頁。2、超凈工作臺

超凈臺的使用與保養(yǎng):（1）風速保持在米/秒;（2）使用前開啟紫外燈照射30分鐘以上;（3）讓超凈臺預工作10－15分鐘;（4）使用完畢后，用70%酒精將臺面和臺內四周擦拭干凈.當前44頁，總共70頁。

（三）無菌器材滅菌器材：玻璃器皿、培養(yǎng)基、無菌衣等.

消毒器材：無菌室內的凳子、試管架、天平、工作臺、手等當前45頁，總共70頁。（四）無菌操作1、目的：（1）是保證待檢物品不被環(huán)境中微生物的污染；（2）是防止被檢微生物在操作中污染環(huán)境或感染操作人員。當前46頁，總共70頁。2、進入無菌室前的準備（1）、定期檢查無菌環(huán)境的空氣是否符合規(guī)定；（2）、用紫外線滅菌處理30~60分鐘；（3）、檢查無菌器材是否完備；（4）、洗手消毒；（5）、手部消毒后，再穿戴無菌工作服。當前47頁，總共70頁。3、檢驗操作過程的無菌操作要求（1）、在操作中不應有大幅度或快速的動作；（2）、使用玻璃器皿應輕取輕放。（3）、在正火焰上方操作；（4）、接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌；（5）、在接種培養(yǎng)物時，協(xié)作應輕、準。（6）、不能用嘴直接吸吹吸管。（7）、帶有菌液的吸管、玻片等器材應及時置于盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內消毒。

當前48頁，總共70頁。無菌操作斜面接種時的無菌操作(1)接種滅菌

(2)開啟棉塞

(3)管口滅菌

(4)挑起菌苔

(5)接種

(6)塞好棉塞當前49頁，總共70頁。1.接種環(huán)前端鐵絲部分以酒精燈燒紅來菌，后端鐵棒部分過火無菌操作–

取菌技巧1當前50頁，總共70頁。2.試管前端過火3.打開試管蓋無菌操作–

取菌技巧1當前51頁，總共70頁。4.試管傾斜，放入接種環(huán)無菌操作–

取菌技巧1當前52頁，總共70頁。5.試管前端過火，蓋上試管蓋6.接種環(huán)燒紅滅菌無菌操作–

取菌技巧1當前53頁，總共70頁。5.試管前端過火，蓋上試管蓋6.接種環(huán)燒紅滅菌無菌操作–

取菌技巧1當前54頁，總共70頁。2.自Plate

上取單一菌落(方法一：蓋子微開遮住培養(yǎng)基，避免空氣中菌體掉入)(方法二：plate反面拿起)無菌操作–

取菌技巧2當前55頁，總共70頁。1.擠出安全吸球內空氣，插上滅過菌之玻璃吸管2.向上為吸，向下為放無菌操作–

取菌技巧3當前56頁，總共70頁。1.調整