遺傳實驗課總結(jié)

2）預處理：a：目的：為了有利于對有絲分裂中染色體的視察和計數(shù)，在固定之前應用理化因素進行預處理，這樣可以變更細胞質(zhì)的粘度，抑制或破壞紡錘絲的形成，促使染色體縮短和分散等。b：預處理方法：低溫預處理：剪取黑麥根尖放入盛有蒸餾水的指形管中，再將指形管置于冰水共存的冰瓶中，將冰瓶置0-3度冰箱處理24小時。染色體數(shù)較多的材料可適當延特長理時間。３）固定：a:目的：接受各種滲透力強的固定液將植物的組織、細胞快速殺死，使蛋白質(zhì)沉淀并盡量保持其原有狀態(tài)。b:固定液的配制：Carnoy’s固定液:冰醋酸：純酒精＝1:3固定時間：24hr4）解離、染色解離：酸解法；用清水沖洗根尖幾次，將根放入1mol/L鹽酸溶液中。解離是為了使胞間連絲離解掉，使細胞分散，便于壓片。染色：染液：醋酸洋紅將根取出后，用清水沖洗幾次，沖掉殘留在組織間地酸。用醋酸洋紅染色。

5）制片取一條根置于載玻片上，切取根尖分生組織約0.5mm，大小2-3段—加一滴醋酸洋紅—蓋上蓋玻片—用挑針尖輕敲根尖材料成霧狀—用拇指輕壓材料—鏡檢減數(shù)分裂偶線期：同源染色體相互縱向靠攏配對，稱為聯(lián)會。這樣聯(lián)會的一對同源染色體，稱為二價體。偶線期所表現(xiàn)的這一特征時間很短，一般較難視察到。粗線期：配對后的染色體漸漸縮短變粗，含有兩條姐妹染色單體，這樣一個二價體中就包含了四條染色單體，故又稱為四合體。在此期間各同源染色體的非姐妹染色單體間可能發(fā)生片段交換。中期Ⅰ：核仁和核膜消逝，全部二價體排列在赤道板兩側(cè)，細胞質(zhì)里出現(xiàn)紡錘體，每個二價體的兩條染色體的著絲點分別趨向紡錘體的兩極，此時最適于計數(shù)染色體的數(shù)目和視察各染色體的形態(tài)特征。第一次減數(shù)分裂后期完成染色體數(shù)目的減半。二分體：減數(shù)分裂末期I出現(xiàn)，一個細胞分裂形成兩個染色體數(shù)目減半的子細胞。四分體：減數(shù)分裂II末期形成，最終形成四個配子。1.取材及固定：取材的時間及材料大小必需特別恰當，才能獲得更多的花粉母細胞分裂相，以供視察。蠶豆：蠶豆現(xiàn)蕾后，于上午8～10時（視氣溫而定，但必需在上午11時前）摘取莖頂有效花序，將四周小葉與苞葉去掉，將花苞放入卡諾固定液中。減數(shù)分裂2.染色制片：取出經(jīng)固定的花苞，至于吸水紙上，吸去保存液或固定液，移至載玻片上，剝出花藥。用解剖針截斷花藥。輕輕擠壓，使花粉母細胞在切口處散出。滴一小滴醋酸洋紅染色液。用鑷子把藥壁夾碎——將細胞壁殘渣除去—靜置染色5～10mim——再蓋上蓋玻片——后用挑針背部或鉛筆橡皮頭處輕敲——用拇指壓片——鏡檢果蠅唾腺染色體的視察雙翅目昆蟲的幼蟲期都具有很大的唾腺細胞。因為這些細胞發(fā)育到確定階段后就不再進行有絲分裂，停止在間期。但是染色質(zhì)還是不斷地復制，形成約1000~4000拷貝的染色質(zhì)絲，比一般的有絲分裂中期的染色體大得多，稱為多線染色體和巨大染色體。巨大，是多線染色體；正常：間期DNA復制兩條染色單體著絲點裂開子染色體核分裂胞質(zhì)分裂果蠅：有絲分裂停止在分裂間期，DNA不斷自我復制，著絲點不裂開同源染色體緊密配對：體細胞聯(lián)會，所以染色體只呈現(xiàn)單倍數(shù)；形成染色中心，從染色體中心處伸出5條長臂，1條短臂；染色后，出現(xiàn)一系列寬窄不同、染色深淺不一的橫紋。這些橫紋的數(shù)目、位置、寬窄及排列依次都具有種的特異性。一旦染色體上發(fā)生了缺失，重復，倒位，易位等，也可較簡潔地在唾腺染色體上視察識別出來?？梢娡傧偃旧w技術(shù)是遺傳學探討中一項基本的技術(shù)。

果蠅唾腺染色體特點：1、幼蟲選取果蠅的三齡幼蟲活體當幼蟲爬上瓶壁準備化蛹前，即為三齡幼蟲。肥大、行動遲緩。一齡幼蟲兩齡幼蟲三齡幼蟲取三齡幼蟲，置于載玻片上，并滴加一滴生理鹽水，視察幼蟲結(jié)構(gòu)：具一鈍尾和帶黑色口器的尖頭端2、腺體剖?。?/p>

取兩支解剖針，一針壓住幼蟲身體的近頭端1/3處，固定幼蟲，另一針壓住幼蟲頭部，壓點盡可能靠頭部口器處。將解剖針平穩(wěn)前移，使頭部與身體拉開，口器部分斷開，體內(nèi)各器官從切口擠出，一對唾腺也隨之而出。

唾腺脂肪體解剖針解剖針3染色：用1%醋酸洋紅染色10~20min。4壓片：用鉛筆輕輕敲蓋片幾下，然后用拇指壓片。5鏡檢：先在低倍鏡下找到染色體分散良好的圖像，再在高倍鏡下仔細觀察唾腺染色體的特征。果蠅的雜交試驗果蠅作為遺傳學探討的材料的優(yōu)點生活史的視察

圖3-1

果蠅生活史

1．卵

2．一齡幼蟲

3．二齡幼蟲

4．三齡幼蟲

5．蛹

6．成蟲(雄)

7．成蟲(雌)

雌雄果蠅的比較：

1．體型

雌果蠅體型較大，雄果蠅較?。?/p>

2．腹部末端

雌性腹部橢圓，末端稍尖，雄性末端鈍圓；

3．腹部背面

雌性有明顯5條黑色條紋，雄性有三條，前兩條細，后一條寬，延至腹面，肉眼看其腹部末端呈現(xiàn)一明顯黑點。

4．腹部腹面

雌性有較明顯的6個腹片，雄性有4個腹片。

5．性梳

雄性第一對足的跗節(jié)基部外側(cè)有黑色鬃毛狀性梳（圖3-3），雌性則無。

性梳的有無，是鑒別雌雄性果蠅的明顯標記之一。左：雄性果蠅的左前足

中：跗節(jié)基部的性梳

右：雌果蠅無性梳

白眼紅眼眼色性狀翅形性狀長翅小翅剛毛性狀直剛毛卷剛毛我們試驗課涉及的果蠅類型：黑體：黑體、紅眼、長翅、直剛毛三隱性：灰體、白眼、小翅、卷剛毛野生型：灰體、紅眼、長翅、直剛毛處女蠅因為雌果蠅生殖器官有受精囊，可保存交配所得的大量的精子，能使大量的卵細胞受精。因此，在做果蠅雜交試驗的時候，親本雌果蠅必需是處女蠅，保證明驗結(jié)果的牢靠性。

雌果蠅自羽化起先12小時之內(nèi)尚未成熟而無交配實力。選擇處女蠅時，先把培育瓶中的老果蠅全部除去，收集12小時之內(nèi)羽化出來的新果蠅，麻醉后用放大鏡在白瓷板上將果蠅雌雄分開，這時得到的雌果蠅應當全部都是處女蠅。

假如要驗證選取的處女蠅是否精確，先不要放入雄蠅，3天后看雌蠅是否產(chǎn)卵，假如產(chǎn)卵就不是處女蠅了。當證明的確是處女蠅的狀況下再放入雄蠅，進行遺傳雜交試驗。分別規(guī)律一對等位基因的雜合子中，各自保持其獨立性，在配子形成時，彼此分開，隨機進入不同的配子，在一般狀況下：F1雜合子的配子分別比例為：1:1；F2表型分別比是3:1；F2基因型分別比為1:2:1。自由組合定律支配兩對（或兩對以上）不同性狀的等位基因，在雜合狀態(tài)保持其獨立性。配子形成時，各等位基因彼此獨立分別，不同對的基因自由組合。在一般狀況下，F(xiàn)1配子分別比是1:1:1:1；F2基因型分別比：（1:2:1）2,F2表型比為：9:3:3:1。伴性遺傳由性染色體所攜帶的基因在遺傳時與性別相聯(lián)系的遺傳方式。

正交:♀黑體(eeX+X+)×♂三隱性(EEXWY)F1♀♂灰體紅眼(EeX+XW,EeX+Y)F2(灰紅:灰白:黑紅:黑白)

兩對性狀的獨立遺傳試驗反交:♀三隱性(EEXWXW)×♂黑體(eeX+Y)F1:

♀灰體紅眼:♂灰體白眼

(EeX+XW:EeXWY)F2:灰紅:灰白:黑紅:黑白對于果蠅兩對性狀的獨立遺傳試驗：正交組合F2代的性狀表現(xiàn)：灰體紅眼:灰體白眼:黑體紅眼:黑體白眼＝9:3:3:1反交組合F2代的性狀表現(xiàn)：灰體紅眼:灰體白眼:黑體紅眼:黑體白眼＝3:3:1:1伴性遺傳正交:黑體(X+X+)×三隱性(XwY)F1X+Xw×X+YF2X+X+X+YX+XwXwY反交：三隱性(XwXw)×黑體(X+Y)XwX+×XwY

XwXwX+YX+XwXwY對于果蠅伴性遺傳試驗：正交組合F2代的性狀表現(xiàn)：紅眼:白眼＝3:1反交組合F2代的性狀表現(xiàn)：紅眼:白眼＝1:1連鎖遺傳

XwsnmXwsnm（三隱性）×X+++Y（野生型）

F1（三雜合體）XwsnmX+++

，

XwsnmY（三隱性）

配子Xwsnm,

X+++,Xw+m,X+sn+Xwsn+,X++m,X+snm,Xw++

×

Xwsnm

Y

姊妹交Ft眼色w、剛毛sn、翅形m（三點測驗）

對于果蠅連鎖遺傳試驗：眼色、剛毛和翅型基因在X染色體上的排列依次以及相互間的遺傳距離可以參考書本98－102頁。試驗結(jié)果分析相符：不相符合的緣由：由于果蠅麻醉過渡，致使群體數(shù)量有限；雌雄果蠅的發(fā)育不同步，雌果蠅相對發(fā)育的比較快，而雄果蠅發(fā)育的比較慢；果蠅雌雄識別以及性狀的鑒別可能有誤。果蠅試驗果蠅的優(yōu)點：果蠅的雌雄識別：伴性遺傳的特點：自己設計試驗驗證獨立安排規(guī)律和伴性遺傳規(guī)律：確定要清晰自己設計的試驗中所涉及的性狀位于哪個染色體上：如限制果蠅眼色（紅眼和白眼）的基因位于性染色體X上，限制果蠅剛毛（直和卷剛毛）的基因位于性染色體X上，限制果蠅翅型（長和小翅）的基因位于性染色體X上，限制果蠅體色（灰體和黑體）的基因位于常染色體上。留意限制果蠅殘翅的基因位于常染色體上。另外，依據(jù)果蠅的生活史確定要寫出具體的試驗步驟以及留意事項。適合度檢驗卡方測驗：測定實測值與理論值間符合程度的一種統(tǒng)計方法。遺傳探討中，雜交后代中各種類型的個體數(shù)往往與理論預期有確定的偏差。這種偏差主要是由于兩種緣由造成：一是由于群體小而產(chǎn)生的機會偏差，另一是由于遺傳緣由造成的本質(zhì)差異，若要判定是機會誤差還是本質(zhì)差異，就須要進行卡方測驗。通常首先建立無效假說，即認為觀測值與理論值的差異是由于隨機誤差所致；再確定由于隨機誤差而導致該特定差異的概率；最終依據(jù)該概率作出相應的結(jié)論，如該概率大于某特定概率標準（即顯著水準，生物統(tǒng)計學上一般定為0.05），則認為無效假設成立，即實測值與理論值的差異是由于隨機誤差引起的，進而得出試驗值與理論值相符合的結(jié)論。χ2的計算公式為：（o-e）2χ2=∑——————e公式中o是實際視察值，e為理論預期值，∑為積加符號。df自由度，等于類型數(shù)減1。如自由度（df）等于1，須要矯正：將視察值與理論值之差的確定值應減去校正數(shù)0.5，上式可寫為：（|o-e|-0.5）2χ2=∑——————