色譜柱的選擇博納艾杰爾科技

色譜柱的選擇博納艾杰爾科技第一頁，共三十頁，2022年，8月28日影響C18色譜柱性能的主要因素色譜柱與色譜填料的特性1、柱填料

硅膠純度粒徑比表面積孔徑2、色譜柱的構(gòu)型

色譜柱直徑色譜柱長度3、固定相鍵合類型殘余硅羥基的影響反相鍵合相的保留行為鍵合硅膠的穩(wěn)定性物理因素化學(xué)因素第二頁，共三十頁，2022年，8月28日柱填料對(duì)色譜柱性能的影響第三頁，共三十頁，2022年，8月28日柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：硅膠純度I2.3-二羥基萘2.7-二羥基萘TF=1.31BrandW,AQColumn5μm,4.6mm×150mm

BrandZ,C18Column5μm,4.6mm×150mm

VenusilMPC185μm,4.6mm×150mmBrandH,C18Column5μm,4.6mm×150mmBrandU,C18Column5μm,4.6mm×150mm！TF=1.42TF=1.39TF=1.69TF=？流動(dòng)相：

甲醇：水=65：35流速：

1mL/min溫度： 35℃檢測波長： 230nm進(jìn)樣量： 20μL硅膠純度－金屬含量第四頁，共三十頁，2022年，8月28日柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：硅膠純度II

硅膠純度－金屬含量d第五頁，共三十頁，2022年，8月28日柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：粒徑

硅膠粒徑和類型對(duì)柱效的影響d硅膠粒徑和類型對(duì)壓力的影響第六頁，共三十頁，2022年，8月28日柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：粒徑II

目前市場主要可供選擇的填料粒徑1.7μm，1.8μm，2.2μm－快速液相色譜柱：匹配快速色譜儀

2.7μm－多孔殼層：在常規(guī)液相色譜儀上實(shí)現(xiàn)快速分離(Halo)3.0μm，3.5μm－普通快速分析5.0μm－常規(guī)分析顆粒越小，柱效越高,但是耐污染性能下降，柱壓升高.第七頁，共三十頁，2022年，8月28日柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：比表面積

每克填料的表面積，與粒度，孔徑有關(guān)比表面積大，保留增加，載樣量增加，平衡時(shí)間增加(梯度洗脫尤為注意)根據(jù)需要選擇合適的比表面積第八頁，共三十頁，2022年，8月28日柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：孔徑I

多孔材料的95%以上表面在孔內(nèi)部樣品分子直徑小于平均孔徑，才能進(jìn)入微粒內(nèi)部孔徑至少是樣品流體學(xué)直徑的4倍

300?孔徑用于：超過50個(gè)氨基酸的肽或25個(gè)殘基的低聚寡核苷酸樣品分子直徑小于平均孔徑，才能進(jìn)入微粒內(nèi)部第九頁，共三十頁，2022年，8月28日柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：孔徑II

小生物分子的保留值在小孔徑填料通常更大條件： C8色譜柱，4.6×150mm， 3.5um，A溶劑，0.1%TFA水溶液；B溶劑，0.1%TFA于80%乙腈－

水中；20min梯度，10 30%B；60°C， 1.5ml/min第十頁，共三十頁，2022年，8月28日色譜柱的構(gòu)型對(duì)色譜柱性能的影響第十一頁，共三十頁，2022年，8月28日色譜柱的構(gòu)型對(duì)色譜柱性能的影響：長度和直徑色譜柱尺寸對(duì)色譜分離的影響：?短柱(15-100mm)-運(yùn)行時(shí)間短,柱壓低

?長柱(150-250mm)-分辨率高,運(yùn)行時(shí)間長

?窄徑柱(2.1mm)-檢測器靈敏度高?寬徑柱(3-21.2mm)-載樣量高第十二頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響第十三頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：鍵合類型A縱向交聯(lián)：保留和選擇不穩(wěn)定B橫向交聯(lián)：寬pH適用，Durashell，C單體鍵合：重現(xiàn)性好，柱效高D單體（空間保護(hù)）：低pH穩(wěn)定（VenusilASB）第十四頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響殘余硅羥基的影響普通硅膠當(dāng)流動(dòng)相的pH值大于4.5-5.0時(shí)，表面的硅羥基會(huì)帶負(fù)電荷，堿性化合物拖尾。解決方法封尾雙層表面修飾第十五頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響封尾鍵合填料與小硅烷進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)，如三甲基氯硅烷，反應(yīng)掉部分殘余硅羥基，以增加表面覆蓋率。缺點(diǎn)：不能完全反應(yīng)（仍有50%的硅羥基未被反應(yīng)）在pH<3時(shí)，TMS易流失，耐用性，穩(wěn)定性不好TMS第十六頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響不同長度和體積的鍵合相對(duì)表面覆蓋率的影響第十七頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響雙層表面修飾降低表面硅羥基活性，硅膠表面更加均勻第十八頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響硅膠雙層表面修飾后

新增加表面層硅羥基活性更低－新硅羥基pH=5.2，普通硅羥基pH約為3.5更對(duì)稱的峰型

硅膠表面更均勻－硅膠微晶形成過程中的不光滑表面被覆蓋重現(xiàn)性更好

表面純度更高－硅膠金屬雜質(zhì)被覆蓋極性化合物保留和分離更好第十九頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響雙層表面修飾代表產(chǎn)品：VenusilMPC18，VenusilASBC18，Venusil

HILIC0.01ng/mLPseudoephedrineAgelaVenusilASBC18,2.1×50mm,5μmBrand

A

C182.1×50mm,5μmPhenomenexLunaC18,2.0×50mm,5μm第二十頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：反相鍵合相的保留行為同一廠家相同硅膠基質(zhì)的反相柱：

保留值隨含碳量的增加而增加比表面積越大，保留值越大鍵合碳鏈越長，保留越大C18

C8>C3>C1，長鏈之間差別不大≈第二十一頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：反相鍵合相的保留行為不同廠家色譜柱的保留值，選擇性與峰型色譜柱：4.6*150mm，流動(dòng)相：乙腈－0.05M磷酸鉀緩沖液，pH3.2(65:35);流速：1ml/min，拖尾峰T0（尿嘧啶）P:

吡啶L:

苯酚N:

N,N-二甲基苯胺

B:

4-丁基苯甲酸J:

甲苯第二十二頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：鍵合硅膠的穩(wěn)定性鍵合硅膠的穩(wěn)定性

低pH值，鍵合相流失高pH值，硅膠溶解影響色譜柱壽命，方法不重現(xiàn)

第二十三頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：鍵合硅膠的穩(wěn)定性低pH值，鍵合相流失第二十四頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：鍵合硅膠的穩(wěn)定性空間位阻保護(hù)，延緩鍵合相流失空間位阻鍵合代表產(chǎn)品：VenusilASBC18ZorbaxSBC18第二十五頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：鍵合硅膠的穩(wěn)定性高pH值，硅膠基質(zhì)溶解pH9時(shí)，色譜柱的穩(wěn)定性第二十六頁，共三十頁，2022年，8月28日固定相對(duì)色譜柱性能的影響：

鍵合硅膠的穩(wěn)定性碳雜化，延硅膠緩高pH值水解表面碳雜化Agela

DurashellRP表面碳雜化示意圖第二十七頁，共三十頁，2022年，8月28日博納艾杰爾為您提供全面的LC解決方案2010版藥典LC方法開發(fā)服務(wù)全面的色譜柱選擇低pH條件色譜柱（pH=0.8）VenusilASBC18高pH條件色譜柱（pH=1-12）