血液檢測技術(shù) ABO血型鑒定

臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)ABO血型鑒定教學(xué)培訓(xùn)課件學(xué)習(xí)目標(biāo)1、常用紅細(xì)胞懸液的制備方法2、血型鑒定卡式法、試管法原理、結(jié)果判斷及質(zhì)量控制?？ㄊ椒?現(xiàn)推薦方法，靈敏度高、重復(fù)性好、可自動化操作，但成本較高試管法2傳統(tǒng)方法，操作簡便、設(shè)備簡單、成本低廉，但影響因素多、靈敏度低ABO血型鑒定試管法包括鹽水凝集試驗(yàn)、低離子強(qiáng)度鹽水試驗(yàn)、酶試驗(yàn)、凝聚胺試驗(yàn)、抗人球蛋白試驗(yàn)等，本課以鹽水凝集試驗(yàn)為例。現(xiàn)目前兩種方法均在臨床使用中，故均需掌握。一、紅細(xì)胞懸液制備常用濃度：1%、2%、5%、10%。方法：①抗凝血移去上層血漿待測②洗滌：剩余的紅細(xì)胞中加5MLNS，混勻，洗滌，棄上清，此步驟重復(fù)3次，最后一次上清應(yīng)清亮并全部棄去。③配制懸液。（根據(jù)要求濃度）如5%：洗滌后壓積紅細(xì)胞1滴+19滴NS，混勻3000r/min5min3000r/min5min二、試管法血型鑒定正定型原理：用特異性血型抗體檢測被檢RBC,在鹽水介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集，從而測定被檢RBC膜上有無與特異性血型抗體相對應(yīng)的抗原，進(jìn)一步判定血型。正定型方法：加標(biāo)準(zhǔn)血清1滴（-A-B）加紅細(xì)胞懸液1滴（5%）混勻，離心觀察結(jié)果-A-B1000r/min1min二、試管法血型鑒定正定型結(jié)果判定：試管法：輕輕搖動（或捻動）試管，使沉于管底的RBC浮起，觀察有無凝集或溶血，如上層清亮，管底有RBC凝塊，輕彈管底，凝塊無散開，為凝集（＋）；如上層清亮，管底有RBC沉積，邊緣整齊，輕彈管底，RBC浮起或成為均勻的RBC懸液，則為不凝集（一）；若不確定，可將反應(yīng)物倒在載玻片上，顯微鏡下觀察。注意：若上層為清亮的櫻紅色，考慮是否溶血二、試管法血型鑒定抗A抗B結(jié)果＋—A—＋B＋＋AB——O正定型結(jié)果判定：二、試管法血型鑒定二、試管法血型鑒定反定型原理：原理：用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢測被檢血清（血漿）,在鹽水介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集，從而測定被檢血清（血漿）中有無與標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞相對應(yīng)的抗體，進(jìn)一步判定血型。二、試管法血型鑒定反定型方法：加待測血清2滴（-A-B）加標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液2滴（5%）混勻，離心觀察結(jié)果-A-B1000r/min1min（方法同正定型）二、試管法血型鑒定抗A抗B結(jié)果＋—A—＋B＋＋AB——O正定型結(jié)果判定：結(jié)果判定：A(RBC)B(RBC)結(jié)果＋—B—＋A＋＋O——AB反定型結(jié)果判定：二、試管法血型鑒定注意：1、正反定型一致才能確定結(jié)果；2、所用器材必須清潔干凈，避免溶血，專型專用；3、控制離心速度和時(shí)間，防止假陽性和假陰性；4、抗原抗體比例要適當(dāng)；5、溶血時(shí)，注意結(jié)果的判定；6、正反定型結(jié)果不一致時(shí)，不可輕易判定，需查明原因，可能有技術(shù)問題也可能有標(biāo)本問題。二、試管法血型鑒定檢測原理：正定型原理：在事先包被好抗A與抗B的凝膠介質(zhì)中，加入待測的紅細(xì)胞懸液，抗原與抗體結(jié)合，經(jīng)低速離心，未與抗體結(jié)合的紅細(xì)胞沉于凝膠底部，而已經(jīng)結(jié)合的凝集的紅細(xì)胞，位于凝膠上部或懸浮與凝膠中。反定型原理：采用中性微柱凝膠，加入待測的血清與標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，其余同正定型。三、卡式法血型鑒定卡的結(jié)構(gòu)：凝膠微柱：試管上端（反應(yīng)池）、柱體（分離池）過濾介質(zhì)：顆粒直徑26-103nm的葡聚糖100凝膠，凝膠間縫隙只允許游離紅細(xì)胞通過緩沖液：LISS（加或不加抗血清）三、卡式法血型鑒定卡式法方法：正定：將待測紅細(xì)胞懸液加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察反定：將待測血清和標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察陽性：凝集的紅細(xì)胞，被阻擋在小柱中凝膠的上部或中央陰性：游離的紅細(xì)胞，被擠過裝有過濾介質(zhì)的小柱，而到達(dá)小柱的底部三、卡式法血型鑒定結(jié)果判讀模式：三、卡式法血型鑒定結(jié)果判讀模式：三、卡式法血型鑒定卡式微柱凝膠試驗(yàn)就是利用實(shí)驗(yàn)中紅細(xì)胞在凝膠微柱中的移動，來指示肉眼所不能見的紅細(xì)胞