臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)：非發(fā)酵菌概述、假單胞菌和嗜麥芽窄食單胞菌

非發(fā)酵革蘭陰性桿菌

(nonfermentativebacilli,NFB)

概述不發(fā)酵菌概念關(guān)鍵點(diǎn)：不發(fā)酵葡萄糖多為專性需氧菌革蘭陰性桿菌不發(fā)酵菌共性：

不發(fā)酵葡萄糖（氧化利用或不利用）氧化酶陽性（除嗜麥芽和不動(dòng)桿菌）

動(dòng)力陽性（除不動(dòng)桿菌和莫拉菌）

不發(fā)酵菌不是嚴(yán)格意義上的分類學(xué)命名僅是具有某些共同表型特征（如形態(tài)結(jié)構(gòu)和生化反應(yīng)類似）的一些細(xì)菌統(tǒng)稱。臨床常見不發(fā)酵菌假單胞菌屬（Pseudomonas）不動(dòng)桿菌屬

(Acinetobacter)窄食單胞菌屬（Stenotrophomonas）

其他臨床較常見非發(fā)酵菌

伯克霍爾德菌屬（Burkholderia)產(chǎn)堿桿菌屬(Alcaligenes)莫拉菌屬(Moraxella)黃桿菌屬(Flavobacterium)軍團(tuán)菌屬(Legionella)分屬不同的科屬種

由復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院抗生素研究所牽頭成立的“中國CHINET細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)”成立于2004年10月涉及北京、上海、杭州、廣州、武漢、重慶等6個(gè)城市的8所三級(jí)甲等醫(yī)院（教學(xué)醫(yī)院）?2006年發(fā)展到12家（2所兒童醫(yī)院，以及新疆和甘肅的2所）?2009年發(fā)展到14家（昆明和安徽的2所）按統(tǒng)一方法（K-B法）、標(biāo)準(zhǔn)化的材料進(jìn)行動(dòng)態(tài)性耐藥性監(jiān)測(cè)The

SENTRYAntimicrobialSurveillanceProgramwasinitiatedinJanuary1997andwasdesignedtomonitorthepredominantpathogensandantimicrobialresistanceforbothnosocomialandcommunity-acquiredinfectionsgloballybyusingvalidated,reference-qualityidentificationandsusceptibilitytestingmethodsperformedinacentrallaboratory.

NNIS:NationalNosocomialInfectionSurveillanceSystem(國立醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)系統(tǒng))由美國政府于1970年建立，是美國全國性醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)系統(tǒng)

第一節(jié)

假單胞菌屬

（Pseudomonas）Pseudomonas分類隸屬于假單胞菌科（Pseudomonadaceae)與人類疾病有關(guān)的主要有11個(gè)種。代表菌為銅綠假單胞菌。假單胞菌屬原來和現(xiàn)行分類對(duì)照原假單胞菌屬rRNA同源群現(xiàn)行分類rRNA同源群Ⅰ假單胞菌屬rRNA同源群Ⅱ伯克霍爾德菌屬rRNA同源群Ⅲ叢毛單胞菌科（叢毛單胞菌屬、食酸菌屬）rRNA同源群Ⅳ短波單胞菌屬rRNA同源群Ⅴ窄食單胞菌屬銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌屬于熒光組假單胞菌，可產(chǎn)生青膿素（水溶性、黃褐色、在短波長(zhǎng)的紫外光下可發(fā)熒光），42℃不生長(zhǎng)（銅綠除外）。斯氏、門多薩、產(chǎn)堿、假產(chǎn)堿、淺黃和棲稻（氧化酶陰性）假單胞菌屬非熒光組假單胞菌，不產(chǎn)生青膿素，42℃可生長(zhǎng)。臨床常見假單胞菌及特點(diǎn)Pseudomonas臨床意義分布廣泛多存在于潮濕環(huán)境條件致病皮膚粘膜破損感染（燒傷患者感染等）醫(yī)院感染（呼吸道、泌尿道等感染）Pseudomonas形態(tài)和培養(yǎng)特征形態(tài)：桿菌染色性：革蘭陰性排列：散在排列特殊結(jié)構(gòu)：

有鞭毛（端、叢）有菌毛無芽胞

無莢膜

Pseudomonas形態(tài)和培養(yǎng)特征培養(yǎng)特征：專性需氧營(yíng)養(yǎng)要求不高最適生長(zhǎng)溫度35℃最適pH7.0有些菌生長(zhǎng)過程中產(chǎn)色素（水溶性）表面生長(zhǎng)惡臭假單胞菌在血平板和中國藍(lán)平板上菌落水溶性黃綠色色素脂溶性色素Pseudomonas生化特征氧化酶陽性觸酶陽性Pseudomonas生化特征氧化分解葡萄糖硝酸鹽還原（＋）[Pf(-/+)、Pp(-)]VP、甲基紅、吲哚均（－）藥物敏感性試驗(yàn)根據(jù)CLSI規(guī)定:非發(fā)酵菌中僅

銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、洋蔥伯克霍爾德菌和嗜麥芽窄食單胞菌可使用K-B法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)

其余非發(fā)酵菌均需使用肉湯或瓊脂稀釋法或E-test法檢查藥敏情況。Pseudomonas微生物檢驗(yàn)程序：

標(biāo)本血平板和Mac平板可疑菌落涂片革蘭染色

革蘭陰性桿菌，氧化酶試驗(yàn)（+）、OF：O、動(dòng)力（＋）

非發(fā)酵菌鑒定系統(tǒng)（自動(dòng)或半自動(dòng)）鑒定到種肉湯增菌銅綠假單胞菌

（Pseudomonasaureginosa)Pseudomonasaeruginosa

臨床意義存在于醫(yī)院潮濕環(huán)境中條件致病多引起醫(yī)院感染致病因子：黏附和定植莢膜樣物質(zhì)抗吞噬外毒素A、內(nèi)毒素

其他毒素

引起的疾病?條件致病菌（opportunisticpathogen）尿路感染（urinarytractinfections）呼吸系統(tǒng)感染（respiratorysysteminfections）皮膚軟組織感染（dermatitis,softtissueinfections）菌血癥（bacteremia）骨關(guān)節(jié)感染（boneandjointinfections）胃腸感染（gastrointestinalinfections）各種系統(tǒng)感染尤其是嚴(yán)重?zé)齻颊摺橛忻庖咭种频陌┌Y和艾滋患者（avarietyofsystemicinfections,particularlyinpatientswithsevereburnsandincancerandAIDSpatientswhoareimmunosuppressed）目前，燒傷創(chuàng)面細(xì)菌生態(tài)學(xué)呈現(xiàn)如下特點(diǎn)：

1.革蘭氏陽性球菌檢出率超過革蘭氏陰性桿菌。

金葡菌和表皮葡萄球菌檢出率增加，耐甲氧西林金葡菌（MRSA）在檢出的金葡菌中高達(dá)70%—80%。

2.在革蘭氏陰性桿菌中以菌種而言，銅綠假單胞菌仍占首位。

Pseudomonasaureginosa

形態(tài)和培養(yǎng)特征形態(tài)：桿菌染色性：革蘭陰性排列：散在特殊結(jié)構(gòu)：有單鞭毛有菌毛無芽孢

無莢膜痰涂片中被吞噬的銅綠假單胞菌痰涂片中粘液型銅綠假單胞菌痰涂片中粘液型銅綠假單胞菌Pseudomonasaureginosa

形態(tài)和培養(yǎng)特征專性需氧（部分菌株可兼性厭氧）營(yíng)養(yǎng)要求不高最適生長(zhǎng)溫度25~30℃，42℃生長(zhǎng)，4℃不生長(zhǎng)Pseudomonasaeruginosa

形態(tài)及培養(yǎng)特征普通瓊脂平板上可生長(zhǎng)，產(chǎn)水溶性藍(lán)綠色色素（Nutrientagarhasastrawcolouration.Pseudomonasaeruginosaproducesablue-greenpigment,pyocyanin,whichdiffusesintothemediumgivingtheplateacharacteristiccolour.）銅綠假單胞菌菌落-產(chǎn)水溶性黃綠色素（普通平板）綠膿素?zé)晒馑?fluorescein)Pseudomonasaureginosa

形態(tài)及培養(yǎng)特征銅綠假單胞菌可產(chǎn)生青膿素即熒光素（pyoverdin）銅綠假單胞菌產(chǎn)生的青膿素Pseudomonasaureginosa

形態(tài)及培養(yǎng)特征血平板上生長(zhǎng)良好銅綠假單胞菌菌落（血平板）銅綠假單胞菌菌落（血平板）Pseudomonasaeruginosa

形態(tài)及培養(yǎng)特征均可在麥康凱上生長(zhǎng)(不分解乳糖菌落）銅綠假單胞菌菌落（麥康凱瓊脂）銅綠假單胞菌菌落（麥康凱瓊脂）Pseudomonasaeruginosa

形態(tài)及培養(yǎng)特征銅綠假單胞菌在平板上常見菌落特征：

典型型大腸菌樣型粘液型侏儒型粗糙型粘液型侏儒型大腸菌樣型典型型粗糙型TheColoniesofPseudomonasaeruginosaPseudomonasaeruginosa

生化反應(yīng)氧化酶陽性氧化分解葡萄糖、果糖等硝酸鹽還原（＋）產(chǎn)氣(N2)利用枸櫞酸鹽、乙酰胺酶（+）精氨酸雙水解（＋）MR、VP、吲哚均（－），IMViC---+與其他假單胞菌區(qū)別特征P.

aeruginosahasseveralfeaturesthatdistinguishitfromotherspeciesofPseudomonas:

42℃生長(zhǎng)（Itcangrowat42degreescelsius）產(chǎn)生水溶性色素[Producesabluishpigment(pyocyanin)andagreenishpigment(pyoverdin)]特殊的氣味（Characteristicfruityodor）Pseudomonasaeruginosa的鑒定特征革蘭陰性桿菌，動(dòng)力陽性（極端單鞭毛）特征性的菌落（扁平、濕潤(rùn)有金屬光澤）、色素、特殊氣味42℃可生長(zhǎng)，4℃不生長(zhǎng)氧化酶（Oxidase+）、氧化分解葡萄糖乙酰胺水解（+）、還原硝酸鹽生成氮?dú)饩彼犭p水解（+）、枸櫞酸鹽利用（+）Pseudomonasaeruginosa的耐藥性易產(chǎn)生耐藥性，診斷一定要與臨床表現(xiàn)相結(jié)合，治療過程中，3－4天后重復(fù)藥敏測(cè)試。耐藥機(jī)制：①產(chǎn)酶：金屬酶，OXA酶②外膜蛋白的改變（Outermembraneproteins，OMP）為主要機(jī)制（如oprD2孔蛋白缺失、PBPs變異）③主動(dòng)泵出機(jī)制：對(duì)喹諾酮類，

MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-OprJ④整合子攜帶耐藥基因盒：1類，3類（多重耐藥）⑤生物膜形成阻礙抗菌藥物進(jìn)入臨床治療假單胞菌感染常用抗菌藥物主要有：

β內(nèi)酰胺類氨基糖苷類喹諾酮類銅綠假單胞菌固有耐藥種類

氨芐西林、阿莫西林、頭孢噻肟、厄他培南、四環(huán)素/替加環(huán)素、復(fù)方磺胺甲惡唑、氯霉素等熒光假單胞菌（P.fluorescens，Pf）

鑒定特征革蘭陰性桿菌，極端叢鞭毛專性需氧，麥康凱生長(zhǎng)，產(chǎn)青膿素（熒光素）不產(chǎn)綠膿素4℃可生長(zhǎng)（嗜冷性），42℃不生長(zhǎng)（可在室溫孵育），最適生長(zhǎng)溫度4～30℃。氧化酶（+），氧化分解葡萄糖、果糖等精氨酸雙水解酶（+），液化明膠硝酸鹽還原（-），乙酰胺水解（-）與血液制品污染有關(guān)惡臭假單胞菌（P.putida，Pp）

鑒定特征革蘭陰性桿菌，極端叢鞭毛專性需氧，麥康凱生長(zhǎng)，產(chǎn)青膿素（熒光素）不產(chǎn)綠膿素，陳舊培養(yǎng)物有腥臭味。最適生長(zhǎng)溫度25~30℃，4℃和42℃均不生長(zhǎng)。氧化酶（+），氧化分解葡萄糖、果糖等精氨酸雙水解酶（+），不液化明膠硝酸鹽還原（-），乙酰胺水解（-）KEYPOINTSThetermnonfermentingbacilli(NFB)describesalargegroupofaerobic,non-fermentative,non-sporeing,grame-negativebacillibelongingtotaxonomicallydiversegenera,speciesthatallsharethecommonphenotypicfeatures.MostNFBaresaprophytesfoundwidelyinsoil,water,andothermoistenvironments.NFBaregenerallyconsideredtobeoflowvirulenceandusuallyareopportunisticpathogen.

KEYPOINTSNonfermentingbacillimainlyinclude:Pseudomonas,Acinetobacter,Stenotrophomonas,Burkholderia,Alcaligenes,Achromobacter,Chryseobacterium（金色桿菌屬），Moraxella,Agrobacterium（土壤桿菌屬）,Comanonas（叢毛單胞菌屬）,Acidovorax（食酸菌屬）etc.KEYPOINTSPseudomonasaeruginosaisthespeciesmostcommonlyassociatedwithhumandiseaseamongnonfermentingbacilli,followedbyAcinetobacterbaumanniiandStenotrophomonasmaltophilia.Pseudomonasaeruginosaisalsoafrequentcauseofnosocomialinfectionssuchaspneumonia,urinarytractinfections(UTIs),andbacteremia.Pseudomonalinfectionsarecomplicatedandcanbelifethreatening.思考題1.假單胞菌屬的共性？2.何為不發(fā)酵菌？3.銅綠假單胞菌的形態(tài)和培養(yǎng)特性？4.銅綠假單胞菌的鑒定特征？窄食單胞菌屬Stenotrophomonas分類黃單胞菌科窄食單胞菌屬有5個(gè)種

嗜麥芽窄食單胞菌S.maltophilia

非洲窄食單胞菌S.africanaS.acidaminiphilaS.nitritireducensS.rhizophila臨床意義廣泛分布于自然界、人體條件致病菌

引起院內(nèi)感染常引起菌血癥、呼吸道、尿道、傷口等感染臨床分離率：在非發(fā)酵菌中僅次于銅綠和鮑曼不動(dòng)桿菌居第3位白內(nèi)障術(shù)后嗜麥芽窄食單胞菌眼內(nèi)炎主要生物學(xué)特性G-b一端叢鞭毛動(dòng)力+

無芽胞無莢膜專性需氧菌營(yíng)養(yǎng)要求不高

普平、麥康凱平板生長(zhǎng)，血平不溶血。產(chǎn)黃色色素最適生長(zhǎng)溫度35℃微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本采集痰液、尿液、分泌物等標(biāo)本直接鏡檢

G-b，菌體直或略彎

培養(yǎng)特性

微生物學(xué)檢驗(yàn)血平：圓形光滑中等大小不透明不溶血

普平：淡黃色菌落35℃18-24h嗜麥芽在普平上生長(zhǎng)24h圓形中等大淡黃色不透明Mac上為乳糖不發(fā)酵菌落(24h)Mac上乳糖不發(fā)酵菌落(48h)嗜麥芽窄食單胞菌在血平板菌落圓形光滑淡黃色、中等大小不透明不溶血嗜麥芽窄食單胞菌在血平板菌落（黃色素不典型菌落）生化特性

微生物學(xué)檢驗(yàn)

葡賴硝D明麥氧萄氨酸N膠芽化糖酸鹽A液糖酶緩脫還酶化+-

慢羧原+

+

氧酶+化+DNA酶陽性鑒定鏡下形態(tài)菌落（多黃色）

生化反應(yīng)

耐藥性產(chǎn)生多種β內(nèi)酰胺酶（金屬酶）：

耐受β-內(nèi)酰胺類藥物

氨基糖苷、喹諾酮類多耐藥磺胺類天然敏感K-B法藥敏暫有3種藥的標(biāo)準(zhǔn)亞胺培南天然耐藥左氧氟沙星米諾環(huán)素復(fù)方磺胺2015年CLSI關(guān)于嗜麥芽藥敏選藥2016年CLSI關(guān)于嗜麥芽藥敏選藥嗜麥芽窄食單胞菌能產(chǎn)生含鋅的-內(nèi)酰胺酶，該酶又稱為金屬酶。金屬酶能水解多種β內(nèi)酰胺類抗菌藥，包括碳青霉烯類。目前，除了金屬螫合劑外，未發(fā)現(xiàn)對(duì)金屬酶有抑制作用的藥物，因此產(chǎn)金屬酶菌株的感染在臨床治療上較棘手。嗜麥芽窄食單胞菌天然耐藥：

氨芐西林、阿莫西林、哌拉西林、替卡西林、上述藥物含酶抑制劑復(fù)合藥物、頭孢噻肟、頭孢曲松、氨曲南、碳青霉烯類、氨基糖苷類、甲氧芐啶金屬酶：幾乎能水解所有-內(nèi)酰胺抗生素對(duì)氨曲南水解能力弱能被EDTA、巰基丙酸抑制與其他非發(fā)酵菌比較嗜麥芽與不動(dòng)桿菌區(qū)別嗜麥芽與銅綠區(qū)別