華南農業(yè)大學萬樹青藥物動物學藥用動物活性成分類型與

華南農業(yè)大學萬樹青藥物動物學藥用動物活性成分類型與第1頁/共84頁第一節(jié)動物藥活性成分類型1蛋白質（酶）、多肽及氨基酸類蚯蚓中蚓激酶能降解纖維蛋白原;蛇毒蛋白酶、蛇毒酶等用于血栓治療；動物尿液中的尿激酶、激肽釋放酶以及胰臟中提取的彈性蛋白酶等用于治療心血管疾?。徊溉轭悇游锖网B類的臟器及豚鼠血清中的天門冬酰胺酶、精氨酸酶等臨床用于治療腫瘤;第2頁/共84頁糖蛋白，如圓蛤中蛤素具有抗腫瘤、抗病毒活性；中華大蟾蜍的糖蛋白具有強心利尿作用；。第3頁/共84頁五谷蟲(大頭金蠅Chrysomyismegacephala(Fab.))胰蛋白酶、腸肽酶有助消化作用；蝮蛇毒中分出的以精氨酸酶用于治療腦血栓及血栓閉塞性動脈炎有效。第4頁/共84頁毒肽如眼鏡蛇毒主要用于晚期轉移癌痛、神經痛、風濕性關節(jié)痛、偏頭痛等頑固性疼痛；蜂毒肽有強溶血作用和表面活性，能阻礙肌肉神經間的傳導；第5頁/共84頁水蛭素具有抗凝血作用和溶解血栓的作用；蚯蚓中分得一種分子量為510.8Da的短肽具有抗菌活性；海綿動物、軟體動物、昆蟲及兩棲動物皮膚中的抗生肽也用于抗細菌和病毒；第6頁/共84頁氨基酸

:地龍的解熱作用與其氨基酸含量成正比；紫河車(人胎盤)的氨基酸提取物對白細胞減少癥有一定治療作用；牛黃(牛膽囊結石)的?；撬嵊写碳つ懼置诤徒档脱蹓鹤饔?第7頁/共84頁2生物堿類

蛤蚧及全蝎中的肉毒堿，為氨基酸衍生物，能防止室性心律不齊；河豚卵巢中的河豚毒素，屬胍類衍生物，毒性極強，阻斷軸突傳導作用比可卡因強16萬倍，并有松弛肌肉痙攣、減輕晚期癌痛的作用；第8頁/共84頁動物膽汁中得到的膽紅素屬吡咯衍生物，有促進紅細胞新生、血清抗炎、治療肝硬變作用；蟾蜍色胺屬吲哚類生物堿；箭毒蛙所含的哌啶類生物堿能麻痹骨骼??；第9頁/共84頁烏賊墨主要成分黑色素有止血作用；地龍的次黃嘌呤有抗組胺、平喘、降壓作用

第10頁/共84頁3多糖類

動物各種組織中的肝素用于抗凝；甲殼動物和昆蟲體壁外的甲殼素用于抗菌抗輻射；棘皮動物粘多糖具抗癌和抗凝血酶活性；鯊魚及深海軟骨魚骨骼所含雜多糖，具有顯著的腫瘤抑制作用；軟體動物中所含葡聚糖被證實具有較好的抗腫瘤活性。第11頁/共84頁4甾體類

甾體類化合物在藥用動物中廣泛分布，化學結構變化多，生物活性多樣，如性激素、膽汁酸、蟾毒、蛻皮素及甾體皂苷等。第12頁/共84頁性激素或性信息素的有紫河車中的黃體酮、鹿茸中的雌酮、海狗腎中的雄甾酮等。第13頁/共84頁動物膽汁中發(fā)現的膽汁酸有近百種，常見的有膽酸、去氧膽酸、豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸等。去氧膽酸解痙作用明顯；熊去氧膽酸、鵝去氧膽酸能溶解膽結石;昆蟲蛻皮激素有促進人體蛋白質合成，排除體內膽甾醇，降低血脂和抑制血糖上升等作用;蟾毒甾體有強心作用;第14頁/共84頁棘皮動物的海參綱及海星綱均含皂苷，如梅花參中的梅花參素A、B，刺參中的刺參素A、B、C以及多棘海盤車中的海星皂苷等，這些皂苷一般能抑制癌細胞的生長，并有抗真菌、抗輻射、增強白細胞吞噬的功能。第15頁/共84頁5萜類

斑蝥素為芫菁科昆蟲分泌的單萜類防御物質，具抗癌、抗病毒、抗真菌作用；腔腸動物海鞭的pseudopterosins，為二萜糖苷類化合物，具有很強的消炎止痛作用.第16頁/共84頁鯊魚肝所含鯊烯是殺菌劑，并具有抗癌活性；海綿屬動物含有的環(huán)烯醚萜類成分有抗白色粘球菌作用等第17頁/共84頁6酚、酮、酸類

海綿所含酚類成分siphonodictyal-A及siphonodictyal-B具有抗菌活性；麝香中的麝香酮有強心、抗炎、興奮呼吸和中樞神經的作用；第18頁/共84頁地龍中的花生四烯酸有解熱作用；膽汁酸有利膽、溶解膽結石、鎮(zhèn)咳祛痰、解熱、抗菌抑癌等多種功用；蜂王漿中的王漿酸有抗菌、抗腫瘤作用。第19頁/共84頁第二節(jié)

動物藥有效成分的提取一、溶劑提取法

原理：

1相似相溶

2擴散作用技術要求:

粉碎防霉第20頁/共84頁溶劑的選擇選擇溶劑要注意以下三點：①溶劑對有效成分溶解度大，對雜質溶解度??；②溶劑不能與中藥的成分起化學變化；③溶劑要經濟、易得、使用安全等。第21頁/共84頁常見的提取溶劑

1）水：

水是一種強的極性溶劑。中草藥中親水性的成分，如無機鹽、糖類、分子不太大的多糖類、鞣質、氨基酸、蛋白質、有機酸鹽、生物堿鹽及甙類等都能被水溶出。為了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及堿水作為提取溶劑。酸水提取，可使生物堿與酸生成鹽類而溶出，堿水提取可使有機酸、黃酮、蒽醌、內酯、香豆素以及酚類成分溶出。第22頁/共84頁問題:易霉壞變質

;

沸水提取時，中草藥中的淀粉可被糊化，而增加過濾的困難;

提取液中含有皂甙及粘液質類成分，在減壓濃縮時，還會產生大量泡沫，造成濃縮的困難。第23頁/共84頁2)親水性的有機溶劑：

如乙醇、甲醇、丙酮等，以乙醇最常用。對中草藥細胞的穿透能力較強。親水性的成分除蛋白質、粘液質、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。甲醇的性質和乙醇相似，沸點較低（64℃），但有毒性，使用時應注意。

第24頁/共84頁親脂溶劑

石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。這些溶劑的選擇性能強，不能或不容易提取親水性雜質。但這類溶劑揮發(fā)性大，多易燃（氯仿除外），一般有毒，價格較貴，設備要求較高，且它們透入植物組織的能力較弱，往往需要長時間反復提取才能提取完全。如果藥材中含有較多的水分，用這類溶劑就很難浸出其有效成分.第25頁/共84頁提取方法

常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法及連續(xù)回流提取法等第26頁/共84頁1）浸漬法：

將中草藥粉末或碎塊裝人適當的容器中，加入適宜的溶劑（如乙醇、稀醇或水），浸漬藥材以溶出其中成分的方法。第27頁/共84頁2）滲漉法：

將中草藥粉末裝在滲漉器中，不斷添加新溶劑，使其滲透過藥材，自上而下從滲漉器下部流出浸出液的一種浸出方法，當溶劑滲進藥粉溶出成分比重加大而向下移動時，上層的溶液或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴散能較好地進行，故浸出效果優(yōu)于浸漬法。第28頁/共84頁滲漉器第29頁/共84頁注意事項

但應控制流速，在滲渡過程中隨時自藥面上補充新溶劑，使藥材中有效成分充分浸出為止?；虍敐B滴液顏色極淺或滲液的體積相當于原藥材重的10倍時，便可認為基本上已提取完全。在大量生產中常將收集的稀滲液作為另一批新原料的溶劑之用。第30頁/共84頁3）煎煮法

是我國最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法。所用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加熱時最好時常攪拌，以免局部藥材受熱太高，容易焦糊。第31頁/共84頁煎煮器第32頁/共84頁4）回流提取法：

應用有機溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶內裝藥材約為容量，溶劑浸過藥材表面約1～2cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰一定的時間，放冷過濾，再在藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時，或至基本提盡有效成分為止。此法提取效率較冷浸法高，大量生產中多采用連續(xù)提取法。第33頁/共84頁回流提取裝置第34頁/共84頁5）連續(xù)提取法

應用揮發(fā)性有機溶劑提取中草藥有效成分，不論小型實驗或大型生產，均以連續(xù)提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取成分也較完全。實驗室常用脂肪提取器或稱索氏提取器。連續(xù)提取法，一般需數小時才能提取完全。提取成分受熱時間較長，遇熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法。第35頁/共84頁第36頁/共84頁二、水蒸氣蒸餾法

適用于能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞的中藥成分的提取。此類成分的沸點多在100℃以上，與水不相混溶或僅微溶，且在約100℃時存一定的蒸氣壓。當與水在一起加熱時，其蒸氣壓和水的蒸氣壓總和為一個大氣壓時，液體就開始沸騰，水蒸氣將揮發(fā)性物質一并帶出。第37頁/共84頁水蒸氣蒸餾裝置第38頁/共84頁

中草藥中的揮發(fā)油，某些小分子生物堿一麻黃堿、檳榔堿，以及某些小分子的酚性物質。牡丹酚等，都可應用本法提取。有些揮發(fā)性成分在水中的溶解度稍大些，常將蒸餾液重新蒸餾，在最先蒸餾出的部分，分出揮發(fā)油層，或在蒸餾液水層經鹽析法并用低沸點溶劑將成分提取出來。例如玫瑰油、原白頭翁素等的制備多采用此法。第39頁/共84頁三、升華法

固體物質受熱直接氣化，遇冷后又凝固為固體化合物，稱為升華。

中草藥中有一些成分具有升華的性質，故可利用升華法直接自中草藥中提取出來。例如樟木中升華的樟腦（camphor）。茶葉中的咖啡堿在178℃以上就能升華而不被分解。游離羥基蒽醌類成分，一些香豆素類，有機酸類成分，有些也具有升華的性質。例如七葉內酯及苯甲酸等。第40頁/共84頁升華裝置第41頁/共84頁四、分離和純化

可采用的方法:溶劑分離法兩相溶劑萃取法沉淀法鹽析法透析法結晶、重結晶和分步結晶法層析法超臨界CO2流體萃取技術第42頁/共84頁1溶劑分離法(萃取)

原理:

總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離

要求:

選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進行提取分離.第43頁/共84頁例如:

防己乙醇浸膏，堿化后可利用乙醚溶出脂溶性生物堿，再以冷苯處理溶出防己堿，與其結構類似的防己諾林堿比前者少一甲基而有一酚羥基，不溶于冷苯而得以分離.第44頁/共84頁水浸膏或乙醇浸膏常常為膠狀物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌于適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取

.第45頁/共84頁水提液中常含有樹膠、粘液質、蛋白質、糊化淀粉等，可以加入一定量的乙醇，使這些不溶于乙醇的成分自溶液中沉淀析出，而達到與其它成分分離的目的.水提取液中獲得白及膠，可采用加乙醇沉淀法；括樓根汁中制取天花粉素，可滴入丙酮使分次沉淀析出;提取多糖及多肽類化合物，多采用水溶解、濃縮、加乙醇或丙酮析出的辦法。第46頁/共84頁利用某些成分能在酸或堿中溶解，又在加堿或加酸變更溶液的pH后，成不溶物而析出以達到分離目的.內酯類化合物不溶于水，但遇堿開環(huán)生成羧酸鹽溶于水，再加酸酸化，又重新形成內酯環(huán)從溶液中析出，從而與其它雜質分離.第47頁/共84頁

中草藥總提取物用酸水、堿水先后處理，可以分為三部分：溶于酸水的為堿性成分（如生物堿），溶于堿水的為酸性成分（如有機酸），酸、堿均不溶的為中性成分（如甾醇）。例如:

長春花生物堿、石蒜生物堿的分離;

紫董定堿（corydine）;

蝙蝠葛堿（dauricins）;

四氫掌葉防己堿第48頁/共84頁2兩相溶劑萃取法

原理:

利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數的不同而達到分離的方法。萃取時如果各成分在兩相溶劑中分配系數相差越大，則分離效率越高、如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質，一般多用親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚進行兩相萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。第49頁/共84頁分液漏斗第50頁/共84頁注意以下幾點和處理：

(1)出現乳化現象(2)水提取液的濃度最好比重(3)溶劑與水溶液應保持一定量的比例(4)一般萃取多次.第51頁/共84頁2沉淀法

是在中藥提取液中加入某些試劑使產生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質的方法。第52頁/共84頁(1)鉛鹽沉淀法

分離某些中草藥成分的經典方法之一。由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的鉛鹽或絡鹽沉淀，故可利用這種性質使有效成分與雜質分離。常用以沉淀有機酸、氨基酸、蛋白質、粘液質、鞣質、樹脂、酸性皂甙、部分黃酮等。第53頁/共84頁

脫鉛方法:

硫化氫脫鉛用硫酸、磷酸、硫酸鈉、磷酸鈉等除鉛

例如:

在黃芩水煎液中加入明礬溶液，黃芩甙就與鋁鹽絡合生成難溶于水的絡化物而與雜質分離，這種絡化物經用水洗凈就可直接供藥用。

第54頁/共84頁(2)試劑沉淀法

在生物堿鹽的溶液中，加入某些生物堿沉淀試劑，則生物堿生成不溶性復鹽而析出。水溶性生物堿難以用萃取法提取分出，常加入雷氏銨鹽使生成生物堿雷氏鹽沉淀析出。橙皮甙、蘆丁、黃芩甙、甘草皂甙均易溶于堿性溶液，當加入酸后可使之沉淀析出。某些蛋白質溶液，可以變更溶液的pH值利用其在等電點時溶解度最小的性質而使之沉淀析出。第55頁/共84頁3鹽析法

是在中草藥的水提液中、加入無機鹽至一定濃度，或達到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質分離.

鹽析的無機鹽:

氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。

例如:

三七的水提取液中加硫酸鎂至飽和狀態(tài)，三七皂甙乙即可沉淀析出:

黃藤中提取掌葉防己堿，三顆針中提取小檗堿在生產上都是用氯化鈉或硫酸胺鹽析制備。第56頁/共84頁4透析法

利用小分子物質在溶液中可通過半透膜，而大分子物質不能通過半透膜的性質，達到分離的方法。透析膜:

動物性膜、火棉膠膜、羊皮紙膜（硫酸紙膜）、蛋白質膠膜、玻璃紙膜等。常用市售的玻璃紙或動物性半透膜扎成袋狀，外面用尼龍網袋加以保護，小心加入欲透析的樣品溶液，懸掛在清水容器中。

例如:

分離和純化皂甙、蛋白質、多肽、多糖等物質時，可用透析法以除去無機鹽、單糖、雙糖等雜質.第57頁/共84頁5結晶、重結晶和分步結晶法

結晶的意義:

鑒定中草藥化學成分，研究其化學結構，必須首先將中藥成分制備成單體純品。一般來說，中草藥化學成分在常溫下多半是固體的物質，都具有結晶的通性，可以根據溶解度的不同用結晶法來達到分離精制的目的。一旦獲得結晶，就能有效地進一步精制成為單體純品。純化合物的結晶有一定的熔點和結晶學的特征，有利于鑒定.第58頁/共84頁第59頁/共84頁制備結晶

1選擇合宜的溶劑和應用適量的溶劑

一般常用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙醋作制備結晶的溶劑

有些化合物在某些溶劑中則易于形成結晶。

例如:

葛根素、逆沒食子酸在冰醋酸中易形成結晶;

大黃素在吡啶中易于結晶;

萱草毒素在N，N一二甲基甲酰胺（DMF）中易得到結晶;

穿心蓮亞硫酸氫鈉加成物在丙酮一水中較易得到結晶;

蝙蝠葛堿通常為無定形粉未，但能和氯仿或乙醚形成為加成物結晶。第60頁/共84頁結晶溶液的制備

制備結晶的溶液，需要成為過飽和的溶液。一般是應用適量的溶劑在加溫的情況下，將化合物溶解再放置冷處。如果在室溫中可以析出結晶，就不一定放置于冰箱中，以免伴隨結晶析出更多的雜質。如果溶液濃度適當，溫度慢慢降低，可析出結晶較大而純度較高的結晶。有的化合物其結晶的形成需要較長的時間，例如鈴蘭毒甙等，有時需放置數天或更長的時間。第61頁/共84頁制備結晶操作

1放置過程中，最好先塞緊瓶塞，避免液面先出現結晶，而致結晶純度較低。2放置一段時間后沒有結晶析出，可以加入極微量的種晶，即同種化合物結晶的微小顆粒。加種晶是誘導晶核形成常用而有效的手段。3沒有種晶時，可用玻璃棒蘸過飽和溶液一滴，在空氣中任溶劑揮散，再用以磨擦容器內壁溶液邊緣處，以誘導結晶的形成。4如仍無結晶析出，可打開瓶塞任溶液逐步揮散，慢慢析晶。5或另選適當溶劑處理，或再精制一次，盡可能除盡雜質后進行結晶操作。第62頁/共84頁重結晶及分步結晶

在制備結晶時，最好在形成一批結晶后，立即傾出上層溶液，然后再放置以得到第二批結晶。晶態(tài)物質可以用溶劑溶解再次結晶精制。這種方法稱為重結晶法。結晶經重結晶后所得各部分母液，再經處理又可分別得到第二批、第三批結晶。這種方法則稱為分步結晶法或分級結晶法。第63頁/共84頁結晶純度的判定

化合物的結晶都有一定的結晶形狀、色澤、熔點和熔距可以作為鑒定的初步依據.

高壓液譜、氣相層析、紫外光譜等，均有助于檢識結晶樣品的純度。第64頁/共84頁6層析法基本原理：

層析過程是基于樣品組分在互不相溶的兩“相”溶劑之間的分配系數之差（分配層析），組分對吸附劑吸附能力不同（吸附層析），和離子交換，分子的大?。ㄅ抛鑼游觯┒蛛x。通常又將一般的以流動相為氣體的稱為氣相層析，流動相為液體的稱為液相層析。第65頁/共84頁柱層析裝置第66頁/共84頁吸附層析法（AdsorptionChromatography）

特別適用于很多中等分子量的樣品（分子量小于1，000的低揮發(fā)性樣品）的分離，尤其是脂溶性成分，一般不適用于高分子量樣品如蛋白質、多糖或離子型親水性化合物等的分離.

吸附層析的分離效果，決定于吸附劑、溶劑和被分離化合物的性質.第67頁/共84頁吸附劑：

常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、活性炭、硅酸鎂、聚酰胺、硅藻土等。溶劑：

在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開劑。洗脫劑的選擇:

須根據被分離物質與所選用的吸附劑性質這兩者結合起來加以考慮.第68頁/共84頁被分離物質的性質：

被分離的物質與吸附劑，洗脫劑共同構成吸附層析中的三個要素，彼此緊密相連。第69頁/共84頁薄層層析

薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進行層析時一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細，一般應小于250目，并要求粒度均勻.第70頁/共84頁薄層層析第71頁/共84頁8超臨界CO2流體萃取技術

利用壓力和溫度對超臨界流體溶解能力的影響而進行的萃取技術。在超臨界狀態(tài)下，將超臨界流體與待分離的物質接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點高低和分子量大小的成分依次萃取出來。超臨界CO2流體萃取過程是由萃取和分離過程組合而成的。

超臨界流體萃取是70年代末發(fā)展起來的一種新型物質分離、精制技術。第72頁/共84頁超臨界CO2流體萃取儀第73頁/共84頁超臨界流體定義

任何一種物質都存在三種相態(tài)-氣相、液相、固相。三相成平衡態(tài)共存的點叫三相點。液、氣兩相成平衡狀態(tài)的點叫臨界點。在臨界點時的溫度和壓力稱為臨界壓力。不同的物質其臨界點所要求的壓力和溫度各不相同。

超臨界流體(Supercriticalfluid，SCF)技術

指溫度和壓力均高于臨界點的流體,如二氧化碳臨界溫度Tc=31.26℃、臨界壓力Pc=7.2MPa。高于臨界溫度和臨界壓力而接近臨界點的狀態(tài)稱為超臨界狀態(tài)。處于超臨界狀態(tài)時，氣液兩相性質非常相近，以至無法分別，所以稱之為SCF。第74頁/共84頁

處于臨界點以上溫度和壓力區(qū)域下的流體，在臨界點附近，會出現流體的密度、粘度、溶解度、熱容量、介電常數等所有流體的物性發(fā)生急劇變化。第75頁/共84頁超臨界流體萃取分離原理

利用超臨界流體的溶解能力與其密度的關系，即利用壓力和溫度對超臨界流體溶解能力的影響而進行的。當氣體處于超臨界狀態(tài)時,成為性質介于液體和氣體之間的單一相態(tài),具有和液體相近的密度,粘度雖高于氣體但明顯低于液體,擴散系數為液體的10～100倍;

因此對物料有較好的滲透性和較強的溶解能力,能夠將物料中某些成分提取出來。

第76頁/共84頁

在超臨界狀態(tài)下，將超臨界流體與待分離的物質接觸，使其有選擇性地依次把極性大小、沸點高低和分子量大小的成分萃取出來。并且超臨界流體的密度和介電常數隨著密閉體系壓力的增加而增加,極性增大,利用程序升壓可將不同極性的成分進行分步提取。當然，對應各壓力范圍所得到的萃取物不可能是單一的，但可以通過控制條件得到最佳比例的混合成分，然后借助減壓、升溫的方法使超臨界流體變成普通氣體，被萃取物質則自動完全或基本析出，從而達到分離提純的目的，并將萃取分離兩過程合為一體，這就是超臨界流體萃取分離的基本原理。第