《中藥淡豆豉多糖的性質(zhì)及生物活性的測(cè)定（論文）》

中文摘要中藥淡豆豉多糖的性質(zhì)及生物活性的測(cè)定摘要：目的：對(duì)淡豆豉多糖的糖含量、蛋白質(zhì)含量、紫外和紅外光譜等及其抗氧化和降血糖活性進(jìn)行測(cè)定，研究其性質(zhì)和生物活性。方法：超聲波輔助提取淡豆豉多糖、苯酚-硫酸法測(cè)定糖含量、考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白含量；紫外光譜、紅外光譜測(cè)定光譜學(xué)性質(zhì)；清除1,1-二苯基-2-苦味基肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基和羥基自由基評(píng)價(jià)體外抗氧化活性；測(cè)定對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制能力研究其體外降血糖活性；利用DEAE纖維素柱分離純化淡豆豉多糖；高效陰離子交換色譜測(cè)定單糖組成成分。結(jié)果：淡豆豉多糖的提取率為7.95%，總糖含量為87.5%（以葡萄糖計(jì)），蛋白質(zhì)含量為10.30%?？寡趸钚匝芯拷Y(jié)果表明，淡豆豉多糖對(duì)清除羥基自由基和DPPH自由基呈良好的良效關(guān)系,IC50分別為2.191mg/mL和1.607mg/mL。降血糖活性研究結(jié)果表明，淡豆豉多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶具有良好的抑制能力，其IC50為21.673mg/mL。純化后得到2個(gè)組分，對(duì)其單糖組成進(jìn)行分析，表明主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖組成。結(jié)論：淡豆豉多糖為具有一定抗氧化和降血糖活性的均一多糖。關(guān)鍵詞：淡豆豉；多糖；性質(zhì)；抗氧化活性；降血糖活性英文摘要研究論文前言淡豆豉為豆科植物大豆Glycinemax(L.)Merr.的成熟種子的發(fā)酵加工品，具有解表，除煩，宣郁，解毒的功效[1]。淡豆豉始載于《名醫(yī)別錄》，歷代本草均有記載。已報(bào)道的化學(xué)成分主要有大豆苷，大豆素，異黃酮類等，也含有少量的有機(jī)酸[2]。近年來，隨著對(duì)植物多糖的深入研究，發(fā)現(xiàn)植物多糖具有抗腫瘤，降血糖和抗氧化等生物活性[3]，且中藥多糖含量豐富，來源廣泛，細(xì)胞毒性低，是一種理想的保健食品開發(fā)來源[4]。目前對(duì)于淡豆豉的研究主要集中在異黃酮及其苷類、氨基酸、核苷等成分及其藥理活性和炮制等方面，如勞鳳云等[5]，通過對(duì)淡豆豉多糖的提取和活性研究，發(fā)現(xiàn)淡豆豉多糖對(duì)羥基自由基（?OH）、超氧陰離子自由基（?O2-）均具有明顯的抑制作用，而且隨著多糖的濃度增加，抑制作用加強(qiáng)。而對(duì)于淡豆豉多糖性質(zhì)的研究相對(duì)較少，對(duì)于淡豆豉多糖抗氧化、降血糖活性等方面的研究也鮮有報(bào)道。因此，本文主要對(duì)淡豆豉多糖進(jìn)行提取，測(cè)定其理化性質(zhì)，評(píng)價(jià)其抗氧化和降血糖活性。并對(duì)淡豆豉多糖進(jìn)行分離純化及糖組成分析，旨在為更好的開發(fā)和利用淡豆豉的多糖組分，提供理論數(shù)據(jù)。材料與方法材料與試劑（1）淡豆豉粉亳州大西北藥業(yè)有限責(zé)任公司。（2）無水乙醇、苯酚、磷酸分析純天津市永大化學(xué)試劑有限公司；（3）無水碳酸鈉、氯化鈉分析純天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司；（4）剛果紅指示劑上海阿拉丁生化科技股份有限公司；（5）考馬斯亮藍(lán)分析純合肥博美生物科技有限科技；（6）過氧化氫分析純天津政成化學(xué)制品有限公司；（7）濃硫酸分析純山東天成塑料制品有限公司；（8）氫氧化鈉分析純天津市大陸化學(xué)試劑廠；（9）PNPG分析純上海阿拉丁生化科技股份有限公司；（10）木瓜蛋白酶食品添加劑南寧廢博生物工程有限公司；（11）葡萄糖、DEAE纖維素、硫酸亞鐵、水楊酸、牛血清白蛋白、DPPH、混合磷酸鹽、α-葡萄糖苷酶、氯仿、正丁醇均為國產(chǎn)分析純。儀器與設(shè)備（1）超微粉碎機(jī)1400mmX800mmX1630mmX濟(jì)南銀潤(rùn)包裝機(jī)械有限公司；（2）恒溫水浴鍋HH-2江蘇金壇宏華儀器廠；（3）水浴鍋SB-1200上海艾郎儀器有限公司；（4）紫外可見分光光度儀752上海光譜儀器有限公司；（5）紫外分光光度儀UV-2550島津公司；（6）循環(huán)水式多用真空泵SHB-Ш鄭州城科工貿(mào)有限公司；（7）恒流泵YZ9901上海滬西分析儀器廠有限公司；（8）數(shù)控超聲波清洗儀KS-300DE昆山潔力美超聲儀器有限公司；（9）電熱鼓風(fēng)干燥箱101-2AB天津市泰斯儀器有限公司；（10）高速離心機(jī)TGL-158上海安亭科學(xué)儀器廠；（11）BSZ-100自動(dòng)部分收集器BSZ-100上海滬西分析儀器廠有限公司；（12）傅里葉紅外光譜儀S-100；（13）電子稱JJ500常熱市雙杰測(cè)試儀器廠；（14）電子天平梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；（15）各種型號(hào)標(biāo)準(zhǔn)口玻璃儀器石家莊現(xiàn)代儀器表化工有限公司。方法1.3.1淡豆豉多糖的提取采用超聲波輔助水提醇沉法提取淡豆豉粗多糖。準(zhǔn)確稱取淡豆豉500g，制成超微粉，精確稱取粉末質(zhì)量，用10倍體積的80%的乙醇超聲回流提取3次，每次30min，以除去其中的脂溶性成分，過濾后取濾渣風(fēng)干，備用。稱量醇提后的淡豆豉粉末436g，加入40倍體積的蒸餾水提取，在超聲波輔助的條件下，50℃恒溫提取2次，每次20min，合并水提液，過濾，用恒溫水浴鍋濃縮濾液至10mL左右，使用4倍體積的80%的無水乙醇沉淀，常溫下靜置24h，過濾，水浴烘干，沉淀為淡豆豉粗多糖（SSPP）。1.3.2淡豆豉多糖的總糖含量測(cè)定本文在測(cè)定多糖總含糖量方面，主要采取的是硫酸-苯酚法[6]。精確稱取5mg葡萄糖，加適量蒸餾水，將葡萄糖用超聲波溶解在蒸餾水中，定容到50mL容量瓶中，得到濃度為0.1mg/mL的溶液。分別移取0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL的所得溶液，并標(biāo)上1、2、3、4、5號(hào)，吸取以上五種標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0mL，分別加入6%的苯酚溶液和濃硫酸分別為0.5mL和2.5mL，將所有溶液振蕩混勻，在室溫下靜置半個(gè)小時(shí)，然后利用分光光度計(jì)測(cè)量溶液的吸光度值，在490nm處測(cè)定，然后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線的橫縱坐標(biāo)分別為多糖濃度和吸光度。將2.5mg淡豆豉多糖加適量蒸餾水溶解，定容至25mL容量瓶中，得待測(cè)液，濃度為0.1mg/mL。取其中的0.8mL定容至10mL容量瓶中，所得待測(cè)液的濃度為0.008mg/mL。將1mL此時(shí)得到的待測(cè)液放入試管中，加入6%的苯酚溶液和濃硫酸分別為0.5mL和2.5mL，將所有溶液振蕩混勻，在室溫下靜置半個(gè)小時(shí)，然后利用分光光度計(jì)測(cè)量溶液的吸光度值，在490nm處測(cè)定，平行操作三次，取平均值，將吸光度帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算可溶性糖含量。1.3.3淡豆豉多糖的蛋白質(zhì)含量測(cè)定由于蛋白質(zhì)分子中含有酰胺基團(tuán)，棕紅色的考馬斯亮藍(lán)G-250染料上的陰離子與蛋白質(zhì)中的酰胺集團(tuán)反應(yīng)，并使溶液由棕紅色變成藍(lán)色，它的最大吸收峰為595nm，蛋白質(zhì)在1～1000μg之間其吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可采用考馬斯亮藍(lán)法[7]測(cè)定淡豆豉多糖蛋白質(zhì)含量。稱取10.0mg的牛血清白蛋于試管中，并用少量蒸餾水溶解，然后定容至100mL，得到了的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)也濃度為0.1g/L，將蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)也放入4℃冰箱中保存。稱取100.0mg的考馬斯亮藍(lán)G-250于試管中，依次在其中放入50mL和100mL的95%乙醇溶液和85%磷酸溶液，接著用蒸餾水定容至1000mL，得到0.01%考馬斯亮藍(lán)G-250試劑，并將其置于棕色瓶中保存。分別取6支10mL具塞試管，在其中加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL的標(biāo)準(zhǔn)液，接著在每支試管中分別加入1mL蒸餾水和5mL考馬斯亮藍(lán)G-250溶液，將各試管混合均勻并靜置10min，然后測(cè)量吸光度，在595nm處測(cè)量。通過統(tǒng)計(jì)結(jié)果，得到如下回歸方程：y=7.8371x+0.6788（R2=0.9991）。該方程具有較好的線性關(guān)系。取三支試管，分別在其中加入30.0mg的淡豆豉多糖樣品，利用用去離子水超聲溶解，將溶液定容至50mL，得到濃度為0.2mg/mL的溶液，該溶液作為空白試劑使用。根據(jù)所得標(biāo)準(zhǔn)線來測(cè)定吸光度，從而計(jì)算樣品的蛋白質(zhì)含量。1.3.4淡豆豉多糖的紅外光譜分析精確稱取1.0mg淡豆豉多糖SSPP，以KBr混合研磨成極細(xì)粉末，壓片，在4000~400cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外光譜掃描[8]。1.3.5淡豆豉多糖的紫外光譜分析精確稱取淡豆豉多糖0.01g，用少量蒸餾水溶解，定容至10mL的容量瓶中，使其配成質(zhì)量濃度為1.0mg/mL的多糖溶液，在200~800nm波長(zhǎng)處進(jìn)行掃描。1.3.6淡豆豉多糖抗氧化活性測(cè)定按照參照文獻(xiàn)[9]的方法測(cè)量淡豆豉多糖消除DPPH自由基、羥基自由基的能力。DPPH自由基測(cè)定：將1.6g淡豆豉多糖溶解在適量蒸餾水中，并在50mL容量瓶中定容，得到32mg/mL的多糖樣品溶液。在0.032gDPPH試劑中加入無水乙醇溶解，并在500mL容量瓶中定容至0.16mmol/L的濃度。在該溶液的基礎(chǔ)上配置不同濃度的多糖樣品溶液，這些濃度分別為16mg/mL、8mg/mL、4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL。分別取2mL各濃度的溶液于試管中，在其中加入DPPH溶液1mL，將混合液震蕩均勻，并在室溫下放置半個(gè)小時(shí)的，在10000rmp的離心機(jī)中離心8min，然后測(cè)量起吸光度值，在490nm處測(cè)定，并記錄數(shù)值，為A1。為了保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，建議每個(gè)樣品平行測(cè)量三次取平均值?？瞻捉M為蒸餾水，就是把上述2mL樣品換成2mL蒸餾水，在測(cè)量方法相同的情況測(cè)定吸光度值，得到A0；在其他溶液和測(cè)定方法不同的情況下將1mLDPPH換成1mL乙醇測(cè)定吸光度值，為A2；用下面公式計(jì)算清除率：K-清除率，%A1-多糖樣品的吸光度A2-本底吸光度A0-空白對(duì)照的吸光度清除羥基自由基活性測(cè)定：用蒸餾水將800mg淡豆豉多糖充分溶解，然后在50mL容量瓶中定容，得到濃度為16mg/mL的多糖溶液。用蒸餾水將0.137gFeS04充分溶解，并定容至100mL容量瓶中，得到濃度為9mmol/L的FeS04溶液。將0.124g水楊酸充分溶解在適量蒸餾水中，并定容至100mL容量瓶，得到濃度為9mmol/L的水楊酸溶液。用滴管移取30%H2O2溶液0.1mL，充分溶解在蒸餾水中，并在100mL容量瓶中國定容至8.8mmol/L的H2O2溶液。在濃度為16mg/mL的多糖溶液的基礎(chǔ)上配置五種不同濃度的多糖樣品溶液，濃度分別為8mg/mL、4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5mg/ml。取6組試管，分別加入2mL以上濃度的溶液，接著分別依次加入硫酸亞鐵、水楊酸、雙氧水溶液各0.5mL，在充分震蕩和混勻的情況下放在37℃恒溫水浴鍋中保溫半個(gè)小時(shí)，然后用紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)量吸光度值，在510nm處測(cè)定，所得數(shù)字為A1；接著測(cè)量A0和A2，A0的測(cè)量方法就是在其他情況不變的情況下將2mL樣品換成2mL蒸餾水，A2的測(cè)量方法就是在其他情況不變的情況下將0.5mL雙氧水換成0.5mL蒸餾水；為了保障結(jié)果的準(zhǔn)確性，主要同伙平行測(cè)量三次取平均值的方法，然后按照下面公式計(jì)算清除率：K-清除率，%A1-多糖樣品的吸光度A2-本底吸光度A0-空白對(duì)照的吸光度1.3.7淡豆豉多糖的體外降血糖活性測(cè)定[10]以PNPG為底物，測(cè)定α-葡萄糖苷酶的活性。具體操作為：首先配制pH6.81的緩沖溶液；將0.0301g的PNPG（對(duì)硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷）溶解在適量的蒸餾水中，并在50mL容量瓶中定容至濃度為2mmol/L的溶液；將5.3gNa2CO3溶解在少量的蒸餾水中，定容至50mL容量瓶中，得到濃度為1mol/L的碳酸鈉溶液；利用蒸餾水將0.02gα-葡萄糖苷酶（10萬μ/g）充分溶解，并在50mL容量瓶中定容至40μ/mL。將800mg的淡豆豉多糖800mg利用適量蒸餾水溶解，并在50mL容量瓶中定容至濃度為16mg/mL。在此溶液的基礎(chǔ)上配置其他五個(gè)濃度的溶液，濃度分別為8mg/mL、4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL。在1支試管中分別加依次加入緩沖溶液、PNPG溶液各3mL、0.8mL，并在37℃水浴鍋放置20min，加入α-葡萄糖苷酶1mL，然后繼續(xù)加熱20min，最后加入1mL碳酸鈉，當(dāng)反應(yīng)結(jié)束后，就利用紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)量吸光度值，在400nm處測(cè)定，得到A1。測(cè)量對(duì)照組A2，A2在其他條件不變的情況將1mLα-葡萄糖苷酶換為1mL蒸餾水進(jìn)行測(cè)量。取6支試管，分別加入2mL緩沖溶液、0.8mLPNPG、1mL以上濃度多糖樣品溶液，37℃水浴鍋保溫20min，加入1mLα-葡萄糖苷酶，繼續(xù)加熱20min，加入1mL碳酸鈉終止反應(yīng)，用紫外-可見分光光度計(jì)在400nm處測(cè)吸光度，做為樣品組，為A3，平行測(cè)定三次。將體系中的1mLα-葡萄糖苷酶換為1mL蒸餾水，其余溶液不變，在相同的條件下測(cè)定吸光度值，作為樣品對(duì)照組，為A4。用下面公式計(jì)算清除率：A1-對(duì)照組A2-空白組A3-樣品組A4-樣品對(duì)照組1.3.8淡豆豉粗多糖的分離純化精確稱取SSPP200mg，定容到10mL的容量瓶中，離心后放入小燒杯中備用。安裝好DEAE–52纖維素層析柱，然后加入樣品，以蒸餾水線性洗脫，根據(jù)線性洗脫結(jié)果確定梯度洗脫的條件，每10min收集一管，用苯酚-硫酸法測(cè)定是否含有糖，于490nm處測(cè)定吸光度，糖含量越高，顏色越深，當(dāng)用水洗脫液至糖含量很少時(shí)，用0.0~1.0mol/LNaCl溶液進(jìn)行梯度洗脫，每10min收集一管，在490nm波長(zhǎng)處以苯酚-硫酸法測(cè)定其吸光度值，糖含量很少時(shí)，停止收集，將纖維柱拆下并沖洗。繪制蒸餾水和氯化鈉的洗脫曲線，橫坐標(biāo)設(shè)置為接收管數(shù)，縱坐標(biāo)為吸光度值和氯化鈉濃度，繪制雙坐標(biāo)曲線。蒸餾水洗脫液經(jīng)濃縮，干燥制成精制多糖，NaCl洗脫液濃縮至20mL左右，放置于透析袋中，用流水浸泡24h，再用蒸餾水浸泡24h中間換一次蒸餾水。1.3.9淡豆豉多糖的單糖組成分析精確稱取9種標(biāo)準(zhǔn)品各10mg，用少量蒸餾水溶解，并定容至10mL容量瓶中，使其濃度為1mg/mL。在0.2mL的具塞玻璃離心管中分別加入0.2mL的濃度為0.5mol/L的PMP甲醇溶液以及0.2mL的濃度為0.3mol/L的NaOH溶液，混勻后放入70℃的水浴鍋中加熱半個(gè)小時(shí)，冷卻后加入依次加入0.3mol/L的鹽酸溶液和氯仿溶液分別為0.2mL、1mL，通過萃取和離心等操作，獲得上清液，重復(fù)操作三次取得上清液，然后用水稀釋、定容至5mL容量瓶中。取水相部分用0.45μm微孔濾膜過濾，然后供HPLC進(jìn)樣分析。流動(dòng)相為0.05mol/mL磷酸鹽緩沖溶液(PH6.8)：乙腈（體積比為83:17），流速為0.8mL/min，柱溫為30℃，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)245nm，進(jìn)樣量為20μL。將20mgSSPP樣品溶解在5mL2M的TFA中，將管口密封，并利在110℃下水解6h。冷卻后減壓濃縮，不斷加入甲醇，直到完全蒸干，在剩下的TFA中取0.4mL放入具塞玻璃離心管中，然后加入0.4mL0.5mol/L的PMP甲醇溶液、0.4mL的0.3mol/L的NaOH溶液，將溶液混勻后放入70℃水浴鍋加熱半個(gè)小時(shí)，直到溶液冷卻后，加入0.3mol/L的鹽酸溶液中和以及0.3mol/L的鹽酸溶液，其中，鹽酸溶液和氯仿溶液的量分別為0.2mL、2mL。取上清液重復(fù)操作3次，用水稀釋，定容至2mL，按上述條件進(jìn)樣分析,根據(jù)各峰的保留時(shí)間和峰面積比計(jì)算出樣品的單糖組成和摩爾比。結(jié)果與分析2.1淡豆豉多糖的提取淡豆豉經(jīng)過粉碎、乙醇除脂、超聲波輔助提取、乙醇沉淀后得到的淡豆豉粗多糖SSPP39.73g，提取率為7.95%。2.2淡豆豉多糖的總糖和蛋白質(zhì)含量淡豆豉多糖SSPP總糖含量分析：根據(jù)葡萄糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：y=18.45x+0.1011(R2=0.9992)，計(jì)算得出SSPP的總糖濃度為0.0075mg/mL。分析結(jié)果表明：淡豆豉多糖SSPP的總糖含量為93.50%。圖1多糖總含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1Standardcurveoftotalpolysaccharidecontent淡豆豉多糖SSPP蛋白質(zhì)含量分析：根據(jù)制作出的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程y=7.8371x+0.6788（R2=0.9991），計(jì)算得出SSPP的蛋白質(zhì)含量為0.0618mg/mL。分析結(jié)果表明；淡豆豉多糖SSPP的蛋白質(zhì)含量為10.30%。圖2蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2Standardcurveofproteincontent2.3淡豆豉多糖的紫外分析圖3淡豆豉多糖SSPP紫外光譜圖（A：波數(shù)/cm-1、B：透光率%）Fig.3LightsoybeanpolysaccharideSSPPUVspectrum(A:wavenumber/cm-1B:transmittance%)如圖3所示，在230~300cm-1之間有特征吸收峰，說明淡豆豉多糖內(nèi)含有蛋白質(zhì)、核酸等成分。2.4淡豆豉多糖的紅外光譜分析圖4淡豆豉多糖SSPP紅外光譜分析（A：波數(shù)cm-1；B:透光率%）Fig.4SSPPinfraredspectrumanalysisoflightsoybeanpolysaccharides(A:wavenumbercm-1B:transmittance%)如圖4所示，在3379cm-1左右的特征吸收峰為-OH的伸縮振動(dòng)，形寬且較鈍，說明羥基不是游離的，而是在分子間發(fā)生了締合反應(yīng)；在1641cm-1附近可能是COO-中C=O的伸縮振動(dòng)吸收峰，證明其可能存在與多糖相結(jié)合的蛋白質(zhì)；1423cm-1附近的吸收峰是C-H的彎曲振動(dòng)；從以上幾組吸收峰可判斷出該物質(zhì)應(yīng)屬于糖類化合物[11]。1199~1095cm-1之間的吸收峰可能屬于吡喃環(huán)的伸縮振動(dòng)，說明SSPP可能為吡喃環(huán)結(jié)構(gòu)。2.5淡豆豉多糖的抗氧化活性圖5淡豆豉多糖SSPP清除羥基自由基活性Fig.5hydroxylradicalscavengingactivityofSSPP由圖5可知，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，SSPP質(zhì)量濃度不斷增加，淡豆豉多糖清除對(duì)羥基自由基的活性也在不斷增加，二者處于正相關(guān)關(guān)系。當(dāng)濃度達(dá)到一定范圍后，自由基的清除率將維持穩(wěn)定，其中質(zhì)量濃度為8mg/mL是時(shí)的清除率最大為84.44%，但針對(duì)VC而言，濃度只需要達(dá)到0.5mg/mL，清除率就可以達(dá)到86.85%，因此其清除效果較對(duì)照品VC弱，淡豆豉多糖SSPP和VC的半數(shù)清除率（halfmaximalinhibitoryconcentration,IC50）分別為2.191mg/mL和0.072mg/mL。圖6淡豆豉多糖SSPP清除DPPH自由基活性Fig.6DPPHfreeradicalscavengingactivityoflightsoybeanpolysaccharideSSPP由圖6可知，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著SSPP質(zhì)量濃度的增加，其對(duì)DPPH自由基的清除率也逐漸增大，其中，在質(zhì)量濃度為2mg/mL時(shí)，其清除率為65.41%，但較VC的清除率低。淡豆豉多糖SSPP和VC的半數(shù)清除率分別為1.607mg/mL和0.005mg/mL。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，淡豆豉多糖具有較強(qiáng)的清除自由基的能力，推測(cè)可能與多糖分子含有的單糖種類和糖苷鍵連接方式有關(guān)，多糖分子中含有大量的羥基，羥基上的氫和化學(xué)性質(zhì)活潑的?OH反應(yīng)，生成穩(wěn)定的碳自由基和水，達(dá)到清除?OH的目的，或者多糖環(huán)上的羥基可與產(chǎn)生?OH等所必需的金屬離子（如Fe2+、Cu2+等）絡(luò)合，使其不產(chǎn)生啟動(dòng)脂質(zhì)過氧化的?OH，從而抑制活性自由基的產(chǎn)生[12]。另外，多糖自身大分子具有空間結(jié)構(gòu)，對(duì)羥基自由基和DPPH自由基產(chǎn)生包合作用，從而抑制自由基的反應(yīng)[13]。如封燕等[11]報(bào)道的金蟬花多糖由葡萄糖、半乳糖和甘露糖組成，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.8mg/mL時(shí)，對(duì)羥基自由基和DPPH自由基的清除率分別為94.12%、79.16%，本研究與其結(jié)果相差不大。2.6淡豆豉多糖的降血糖活性圖7淡豆豉多糖SSPP對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性Fig.7inhibitoryactivityofSSPPonα-glucosidase如圖7所示，SSPP對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性會(huì)隨著SSPP的質(zhì)量濃度增加而增大。由結(jié)果可知，在16mg/ml處為45.08%，其IC50為21.637mg/ml，可見淡豆豉多糖的對(duì)α-葡萄糖苷酶的活性抑制一般。研究者發(fā)現(xiàn)，遠(yuǎn)志多糖、荔枝多糖及南瓜多糖等對(duì)α-葡萄糖苷酶的活性均有較強(qiáng)的抑制能力，并且這些活性多糖主要有葡萄糖、半乳糖和鼠甘露糖等組成。如遠(yuǎn)志多糖由半乳糖、葡萄糖、甘露糖組成，比例為3.92:1.00:2.08[10]；荔枝多糖由半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖和鼠李糖等組成[14]；南瓜多糖也由葡萄糖、半乳糖和甘露糖組成，比例為1.00:7.47:5.50[15]。本實(shí)驗(yàn)中的淡豆豉多糖由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖組成，比例為1.000:14.617:1.620:0.305:3.324，推測(cè)，淡豆豉多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的活性抑制能力相對(duì)較弱，或許是由于半乳糖的含量較少。2.7淡豆豉多糖的分離純化圖8SSPP的纖維素DEAE-52柱層析色譜圖（SSPP-1為蒸餾水洗脫組分，SSPP-2為1mpl/L的NaCl溶液梯度洗脫組分）Fig.8CelluloseDEAE-52columnchromatogramofSSPP(SSPP-1isagradientelutioncomponentofNaClsolutionwithdistilledwaterelutioncomponentSSPP-2=1mplp/L)由圖8可知，淡豆豉多糖過cellulose

DEAE-52柱得到兩個(gè)洗脫組分，SSPP-1為蒸餾水洗脫部分，主要集中在20-40管，SSPP-2為0~1mol/L的NaCl溶液梯度洗脫部分，主要集中在70-90管，對(duì)SSPP-1收集液進(jìn)行濃縮干燥，SSPP-2收集液進(jìn)行透析，濃縮，干燥，進(jìn)行下一步的研究。0.2g淡豆豉多糖分離純化干燥后得到的SSPP-1質(zhì)量為0.101g，產(chǎn)率為50.5%，SSPP-2干燥后質(zhì)量為0.037g產(chǎn)率為18.3%。 2.8淡豆豉多糖的單糖組成分析為進(jìn)一步了解多糖的組成，采用PMP衍生化HPLC法對(duì)SSPP-1和SSPP-2的水解產(chǎn)物的單糖組分進(jìn)行鑒定并計(jì)算了比例。圖9標(biāo)準(zhǔn)品-PMP衍生物的HPLC圖譜1Mac2Rha3GlcUA4GalUA5Glc6Gal7Xyl8Ara9FucFig.9HPLCchromatogramofstandardcompound-PMPderivative1Mac2Rha3GlcUA4GalUA5Glc6Gal7Xyl8Ara9Fuc圖10SSPP-1-PMP衍生物的HPLC圖譜1Man2Glc3Gal4Xyl5AraFig.10HPLCspectraofSSPP-1-PMPderivatives1Man2Glc3Gal4Xyl5Ara對(duì)淡豆豉多糖用蒸餾水洗脫，可得到單糖的組成成分，由圖10可知，淡豆豉多糖水解得到的單糖種類有五種，分別為甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖，這五者的比例分別為1.000:14.617:1.620:0.305:3.324，可見，含量最高的是阿拉伯糖，該糖類為中性糖。圖11SSPP2-PMP衍生物的HPLC圖譜1Man2Rha3GlcUA4GalUA5Glc6Gal7Xyl8AraFig.11HPLCchromatogramofSSPP2-PMPderivatives1Man2Rha3GlcUA4GalUA5Glc6Gal7Xyl8Ara單糖種類比例甘露糖1.000、鼠李糖0.519、葡萄糖醛酸0.757、半乳糖醛酸6.320、葡萄糖2.869、半乳糖3.895、木糖2.157、阿拉伯糖10.260。由圖11結(jié)果表明，由氯化鈉進(jìn)行梯度洗脫的淡豆豉多糖主要含有8種單糖，即甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖，比例為1.000:0.519:0.757:6.320:2.869:3.895:2.157:10.260，其中阿拉伯糖所占比例最高，其中葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸、鼠李糖都屬于酸性糖。這些單糖種類的不同可能會(huì)對(duì)生物活性有影響。結(jié)論采用超聲輔助提取法，將淡豆豉經(jīng)過粉碎、乙醇除脂、超聲波輔助提取、乙醇沉淀后得到淡豆豉粗多糖。測(cè)得SSPP總糖含量為97.50%，蛋白質(zhì)含量為10.30%，其單糖組成成分主要為甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖。抗氧化活性研究結(jié)果表明，在一定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，淡豆豉多糖SSPP對(duì)羥基自由基和DPPH自由基均具有明顯的劑量效應(yīng)，IC50值分別為2.191mg/ml和1.607mg/ml；降血糖活性研究表明，淡豆豉多糖SSPP具有一定的α-葡萄糖苷酶活性抑制能力，IC50為21.637mg/ml，說明淡豆豉多糖與α-葡萄糖胺酶形成競(jìng)爭(zhēng)抑制效應(yīng)可能是淡豆豉多糖的降血糖途徑之一。淡豆豉多糖以其優(yōu)良的降血糖和抗氧化活性在醫(yī)療、化妝品