“體外診斷試劑研發(fā)全流程管理培訓(xùn)課程-分析性能評(píng)價(jià)”精彩回顧之100問

2/2“體外診斷試劑研發(fā)全流程管理培訓(xùn)課程—分析性能評(píng)價(jià)”精彩回顧之50問2022年11月17日，由中國醫(yī)學(xué)裝備協(xié)會(huì)應(yīng)用評(píng)價(jià)分會(huì)主辦，北京水木濟(jì)衡生物技術(shù)有限公司承辦的《體外診斷試劑研發(fā)全流程管理培訓(xùn)課》第三期分析性能評(píng)價(jià)課程正式開課，培訓(xùn)課程持續(xù)三天，邀請(qǐng)了多位行業(yè)資深專家授課，吸引了上百家企業(yè)參加。培訓(xùn)的最后一天，設(shè)置了討論環(huán)節(jié)，多位專家就學(xué)員提出的問題進(jìn)行了詳細(xì)的解答，現(xiàn)將部分問題及專家回復(fù)整理如下。01不同項(xiàng)目的醫(yī)學(xué)決定水平都有哪些渠道和方式可以獲得?專家答復(fù)：醫(yī)學(xué)決定水平（Medicinedecidelevel，MDL）是臨床醫(yī)生在診斷和治療疾病時(shí)應(yīng)該掌握和使用的數(shù)據(jù)，它是不同于參考值的另一些限值，臨床醫(yī)生可以通過觀察測(cè)定值是否高于或低于這些限值，可在疾病診斷中起排除或確認(rèn)的作用，或?qū)δ承┘膊∵M(jìn)行分級(jí)或分類，或?qū)︻A(yù)后作出估計(jì)，以提示醫(yī)師在臨床上應(yīng)采取何種處理方式，如進(jìn)一步進(jìn)行某一方面的檢查，或決定采取某種治療措施等等。醫(yī)學(xué)決定水平與參考值有區(qū)別。參考值來源于大量的健康人群中有關(guān)實(shí)驗(yàn)測(cè)定數(shù)據(jù)，并根據(jù)健康人群中不同年齡、性別分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得到了絕大多數(shù)人群中數(shù)據(jù)的分布范圍，并以此確定參考范圍。而醫(yī)學(xué)決定水平是來源于大量的臨床患者數(shù)據(jù)的觀察和積累，用于確定疾病的發(fā)生發(fā)展和變化情況，并針對(duì)這些情況對(duì)患者進(jìn)行診斷和治療。例如，血清白蛋白的參考范圍為35～55g/L，可將它分為3個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平，第1級(jí)決定水平為20g/L，肝病患者白蛋白低于20g/L時(shí)說明預(yù)后嚴(yán)重；第2級(jí)決定水平為35g/L，為檢查所有低白蛋白的界限值；第3級(jí)決定水平為57g/L，稍高于參考范圍上限，＞57g/L應(yīng)考慮脫水的可能性。再例如，ALT的參考范圍為5～40U/L，但其醫(yī)學(xué)決定水平有3個(gè)，第1個(gè)決定水平是300U/L，＞300U/L，通常與急性肝細(xì)胞損傷有關(guān)，如病毒性肝炎、中毒性肝炎、肝性休克等，＜300U/L，往往是酒精性肝炎，其他如傳染性單核細(xì)胞增多癥、多肌炎等；第2個(gè)決定水平是60U/L，此值比參考值上限高50%左右，一般當(dāng)ALT測(cè)定值在40～60U/L之間時(shí)，并不能確定ALT的升高是否屬于病理性改變，許多不很健康的肥胖者，其ALT值就通常浮動(dòng)在這范圍之內(nèi)，只有當(dāng)ALT值>60U/L時(shí)，才可明確診斷為肝細(xì)胞損傷，所以它是一個(gè)確認(rèn)值；ALT的第3個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平是20U/L，這是一個(gè)排除值，低于此值則可排除許多與ALT升高有關(guān)的疾病。醫(yī)學(xué)決定水平的界定需要進(jìn)行大量的臨床觀察和研究，是一項(xiàng)十分復(fù)雜的工作。目前，臨床常用檢驗(yàn)項(xiàng)目的醫(yī)學(xué)決定水平都能從各種醫(yī)學(xué)參考書籍、診療指南、專家共識(shí)查到。例如，《中國臨床血脂檢測(cè)指南》中對(duì)我國普通人群血脂水平分層標(biāo)準(zhǔn)如下：02EP文件的獲得途徑，如何及時(shí)得知相關(guān)文件和法規(guī)是否更新?有沒有專門分析學(xué)習(xí)EP文件的平臺(tái)?專家答復(fù)：EP文件可從CLSI官網(wǎng)（/）上查詢和購買。另外，國內(nèi)發(fā)布的一些性能評(píng)價(jià)相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)、指導(dǎo)原則、參考書籍在基本原則上也與CLSI的EP文件一致，具有很強(qiáng)的參考價(jià)值。現(xiàn)對(duì)這些文件匯總?cè)缦拢?3產(chǎn)品技術(shù)要求里面的準(zhǔn)確度項(xiàng)目，是否使用正確度更為合適？現(xiàn)在很多行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)寫得都是準(zhǔn)確度。專家答復(fù)：準(zhǔn)確度和正確度是兩個(gè)不同的術(shù)語。測(cè)量正確度是評(píng)價(jià)均勻樣品的一系列測(cè)量結(jié)果中系統(tǒng)測(cè)量誤差的性能特征。正確度是一個(gè)定性概念，但測(cè)量偏倚可以被評(píng)估。評(píng)估偏倚需有可用于確定被測(cè)量參考量值的適當(dāng)參考物質(zhì)或參考測(cè)量程序。準(zhǔn)確度是一個(gè)測(cè)得量值與被測(cè)量的真量值間的差異，這個(gè)測(cè)量誤差包括由測(cè)量偏倚估計(jì)的系統(tǒng)測(cè)量誤差分量和由標(biāo)準(zhǔn)差估計(jì)的隨機(jī)測(cè)量誤分量，準(zhǔn)確度是正確度和精密度的組合。一個(gè)測(cè)量結(jié)果的不準(zhǔn)確度可以用測(cè)量不確定度來表達(dá)（以前用總誤差表達(dá)）。由于臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)工作特點(diǎn)，一般情況下我們只對(duì)每個(gè)樣品只做1次就發(fā)出報(bào)告，因此，我們報(bào)告的結(jié)果不是均值，只是一個(gè)分析中的一個(gè)抽樣值，因此考察方法或試劑的準(zhǔn)確度非常重要。目前，在定量測(cè)定試劑盒的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制修訂過程中，大多數(shù)情況下用了“準(zhǔn)確度”這一指標(biāo)，試驗(yàn)方法如下：04常規(guī)定量免疫檢測(cè)產(chǎn)品對(duì)于指尖血(非抗凝)的性能評(píng)價(jià)方法有何建議呢？因?yàn)樗芸炀湍塘?，操作起來很困難專家答復(fù)：常規(guī)定量免疫檢測(cè)產(chǎn)品如果還適用于指尖血這一樣本類型，應(yīng)采用合理方法評(píng)價(jià)這一樣本類型的適用性。對(duì)具有可比性的樣本類型，可選擇具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的樣本進(jìn)行樣本一致性的同源比對(duì)研究；對(duì)于不具有可比性的樣本類型，應(yīng)對(duì)每種樣本類型分別進(jìn)行分析性能評(píng)估。以自測(cè)用血糖監(jiān)測(cè)系統(tǒng)舉例，其適用的樣本類型如果是指尖、手掌、上臂等部位的毛細(xì)管全血，如不同采樣部位的毛細(xì)血管全血樣本具有可比性，應(yīng)選擇具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的樣本（手掌、上臂）與指尖血樣本進(jìn)行一致性的同源比對(duì)研究，明確分析結(jié)果之間是否存在顯著差異，存在的差異是否可被接受。另外，如在分析性能中采用靜脈全血進(jìn)行替代性研究，應(yīng)說明采用替代樣本的原因并進(jìn)行不同采樣部位全血與靜脈全血的等效性研究。05產(chǎn)品研發(fā)過程中，是否可以使用獲得CE認(rèn)證但未獲國內(nèi)注冊(cè)證的已上市產(chǎn)品，對(duì)使用的樣本進(jìn)行性質(zhì)及量值的確定？如使用CE認(rèn)證產(chǎn)品（國內(nèi)未獲批）對(duì)收集的臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)并確認(rèn)濃度后，進(jìn)行最低檢測(cè)限的研究。專家答復(fù)：研發(fā)階段，作為對(duì)照方法的試劑應(yīng)為成熟可靠的試劑，一般應(yīng)當(dāng)采用已上市試劑進(jìn)行研究。如確無已上市試劑，可以采用未上市但已定型的試劑進(jìn)行研究。06病原菌抗體檢測(cè)試劑盒，國內(nèi)無上市同類定量產(chǎn)品，在最低檢出限、陽性判斷值等性能研究中，是否可采用CE認(rèn)證的，選用針對(duì)不同抗原的抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)樣本進(jìn)行定值。專家答復(fù)：對(duì)于病原菌抗體檢測(cè)試劑的性能評(píng)價(jià)，所用到的陽性樣本、陰性樣本，應(yīng)有明確的臨床診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”方法或其他成熟方法對(duì)這些樣本進(jìn)行鑒定，或者這些樣本應(yīng)有準(zhǔn)確臨床診斷信息。07對(duì)于國家標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)確度檢驗(yàn)，如果國家標(biāo)準(zhǔn)品說明書中的要求和產(chǎn)品適用的推薦性標(biāo)準(zhǔn)（YY/T）不一致，是否應(yīng)該優(yōu)先參考國家標(biāo)準(zhǔn)品說明書中的要求？專家答復(fù)：一般不會(huì)出現(xiàn)國家標(biāo)準(zhǔn)品說明書與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)不一致的情況。如果確實(shí)出現(xiàn)不一致的情況，優(yōu)先參考國家標(biāo)準(zhǔn)品說明書中的要求，并及時(shí)與標(biāo)委會(huì)聯(lián)系反饋。08基于microRNA的測(cè)序檢測(cè)，沒有公認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不能監(jiān)測(cè)整個(gè)試驗(yàn)過程（不能覆蓋提取實(shí)驗(yàn)，只能以RNA對(duì)測(cè)序?qū)嶒?yàn)進(jìn)行參考），如何判定其定量性能？專家答復(fù)：這種情況下，企業(yè)應(yīng)先建立自己的全過程監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)，確定自己的定量性能。過程中注意：提取效率驗(yàn)證一般采用臨床樣本進(jìn)行，可以通過梯度稀釋及對(duì)照等方式，計(jì)算提取效率；microRNA在外周血中主要存在于外泌體中，外泌體為細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，一般認(rèn)為對(duì)提取過程的影響較小，且現(xiàn)在無人工模擬外泌體的方法，一般均將microRNA直接混入外周血來制備企業(yè)參考品。09當(dāng)樣本類型為血清、血漿、靜脈全血與指尖全血時(shí)，指尖全血是否需要單獨(dú)進(jìn)行分析性能評(píng)估，如精密度，分析靈敏度等專家答復(fù)：同問題4的答復(fù)。10當(dāng)企業(yè)無法獲得大量正常人血清的情況下，可以用其他的血清做實(shí)驗(yàn)嗎？專家答復(fù)：體外診斷試劑用于對(duì)人體樣本(血液、體液、細(xì)胞、組織樣本等)進(jìn)行檢測(cè)的，因此在產(chǎn)品研發(fā)階段分析性能評(píng)價(jià)、企業(yè)參考品制備、產(chǎn)品校準(zhǔn)品和質(zhì)控品制備生產(chǎn)、陽性對(duì)照品和陰性對(duì)照品制備生產(chǎn)、國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制等過程大量使用臨床樣本。這些臨床樣本，大部分不是特意采集的患者樣本，是實(shí)驗(yàn)室廢棄樣本，不會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)，不干預(yù)患者診療，也不會(huì)造成人類遺傳信息泄露。但是在目前國家《獻(xiàn)血法》、《醫(yī)療廢棄物管理?xiàng)l例》、《人類遺傳資源管理?xiàng)l例》、《人類遺傳資源采集、收集、買賣、出口、出境審批行政許可事項(xiàng)服務(wù)指南》、《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》等法規(guī)規(guī)定下，實(shí)驗(yàn)室出于生物安全、患者知情等因素，一般不愿意提供給企業(yè)，血源性原料獲得存在非常大的困難。為了振興我國的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)和醫(yī)療器械產(chǎn)業(yè)，確保生產(chǎn)、研發(fā)對(duì)血源性原料的供給，為此相關(guān)IVD行業(yè)協(xié)會(huì)多次建議國家出臺(tái)相關(guān)法規(guī)，推動(dòng)血源合法化。11咨詢問題老師講的精密度建立過程中需要用的3個(gè)臨床樣本和3個(gè)質(zhì)控品，可以只用3個(gè)臨床樣本嗎？或者質(zhì)控品是否可以減少濃度點(diǎn)？專家答復(fù)精密度確認(rèn)過程中，對(duì)于測(cè)量范圍確定，不同濃度水平精密度一致或相差不大的測(cè)量系統(tǒng)，可以減少樣本數(shù)量，3個(gè)臨床樣本；但對(duì)不同濃度水平精密度相差較大（低水平精密度差一些，高水平精密度好一些）的測(cè)量系統(tǒng)，樣本數(shù)量不建議少，EP05-A3上是至少5個(gè)水平；上述2種情況，在進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)時(shí)，均需運(yùn)行室內(nèi)質(zhì)控程序來保證測(cè)量系統(tǒng)的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性，質(zhì)控品可以減少至2個(gè)濃度水平（低、高兩個(gè)水平）。12咨詢問題是否需要研究不同型別？專家答復(fù)在研發(fā)初期還不能判斷樣本的類型是否會(huì)影響精密度時(shí)，建議進(jìn)行考察；優(yōu)先考察臨床患者樣本，臨床患者樣本不滿足要求時(shí)可對(duì)其他可替代的產(chǎn)品進(jìn)行考察。13咨詢問題定性產(chǎn)品的精密性研究，選擇的3個(gè)水平樣本（最低檢出限水平、陽性水平、陰性），其中陰性滿足C50-20%濃度要求、陽性水平樣本滿足C50+20%濃度要求且高于最低檢出限水平。此時(shí)，是否可以不再重復(fù)做臨界值水平的精密性研究（不再分別重復(fù)進(jìn)行40次檢測(cè)）。專家答復(fù)參考定性檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2022年第36號(hào)）中3.2條款：3.2臨界值水平的精密度研究（如適用）除上述精密度研究外，建議申請(qǐng)人對(duì)申報(bào)產(chǎn)品的臨界值進(jìn)行確定，并采用該濃度/水平樣本進(jìn)行精密度研究。此處所述臨界值水平不同于通過ROC曲線等方法確定的陽性判斷值。理想情況下，臨界值濃度水平，即為多次重復(fù)試驗(yàn)時(shí)，50%的結(jié)果為陰性，50%的結(jié)果為陽性濃度水平，在本文以C50表示。如果臨界值水平可以確定，仍建議對(duì)其進(jìn)行精密度研究（40次重復(fù)性檢測(cè)）。14咨詢問題下述精密性研究方案是否可行？3個(gè)水平樣本（最低檢出限水平、中強(qiáng)濃度水平、陰性）使用2個(gè)批次試劑，分別進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)和再現(xiàn)性試驗(yàn)。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)方案：3個(gè)水平樣本，使用每個(gè)批次試劑分別重復(fù)2次檢測(cè)，進(jìn)行20天，共使用2個(gè)批次試劑。（每個(gè)水平樣本檢測(cè)數(shù)量：2次重復(fù)檢測(cè)×2批試劑×20天）再現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)方案：分別在3個(gè)環(huán)境下對(duì)3個(gè)水平樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每個(gè)批次試劑分別重復(fù)5次檢測(cè)，進(jìn)行5天，共使用2個(gè)批次試劑。（每個(gè)水平樣本每個(gè)批次試劑檢測(cè)數(shù)量：5次重復(fù)檢測(cè)×3個(gè)環(huán)境×5天）。專家答復(fù)：重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中數(shù)據(jù)分析時(shí)建議用1個(gè)批次試劑就可以滿足研究要求，若要按定量產(chǎn)品中單點(diǎn)精密度來評(píng)價(jià)的話，用1個(gè)批次試劑，增加1個(gè)分析批（2次重復(fù)檢測(cè)）。再現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)方案中建議增加重復(fù)測(cè)量次數(shù)，即由5次增加到8次（參考精密度評(píng)價(jià)研究時(shí)定性產(chǎn)品的重復(fù)測(cè)量次數(shù)需達(dá)到40次及以上），這樣每個(gè)環(huán)境下各水平樣本的檢測(cè)次數(shù)也可滿足統(tǒng)計(jì)要求。15咨詢問題除上述精密性實(shí)驗(yàn)外，是否還需要再進(jìn)行中間精密度？專家答復(fù)：上述兩種方案的測(cè)量條件已經(jīng)是中間精密度的其中一種（不同天、不同試劑批號(hào)、不同環(huán)境等），如果發(fā)現(xiàn)有其他影響較大的因素則可進(jìn)行相關(guān)的條件改變，進(jìn)行相關(guān)的精密度研究。16咨詢問題精密度的3批試劑批間差設(shè)計(jì)方案有建議嗎？專家答復(fù)：建議由同一個(gè)操作人員在同一臺(tái)儀器上按相同的測(cè)量程序進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)批號(hào)試劑用配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后，測(cè)量同一個(gè)質(zhì)控品或臨床樣本。檢測(cè)可不在同一時(shí)間，如環(huán)境對(duì)檢測(cè)影響較大，建議3批試劑檢測(cè)期間控制環(huán)境條件盡量保持一致。17咨詢問題：一般法規(guī)中對(duì)精密度的要求如下，就是這個(gè)n≥20一般指的是什么意思呢，每天檢測(cè)的每份樣本要檢測(cè)20次？還是需要不同的20個(gè)陰性樣本、20個(gè)臨界陽性樣本、20個(gè)中陽樣本？專家答復(fù)：n≥20指的是檢測(cè)20次或有20個(gè)測(cè)量結(jié)果；不是需要不同的20個(gè)陰性樣本、20個(gè)臨陽樣本、20個(gè)中陽樣本。待評(píng)價(jià)樣本至少有3個(gè)水平：陰性樣本、臨陽樣本、中陽樣本，各只有1個(gè)，樣本需足量滿足精密度實(shí)驗(yàn)需求。18咨詢問題精密度中自由度和s倍數(shù)對(duì)應(yīng)表中，怎么選擇合適的s倍數(shù)和自由度？專家答復(fù)：一般取95%的置信區(qū)間，有效自由度無窮大時(shí)，s的倍數(shù)正好是1.96。我們也可以通過查表得到：95%的置信區(qū)間，s倍數(shù)為2.009的時(shí)候，有效自由度為50。在實(shí)際工作中，我們不可能去做無窮多次，可以假設(shè)為s倍數(shù)為2時(shí)，對(duì)應(yīng)的有效自由度為50。19咨詢問題精密度評(píng)價(jià)，重復(fù)性、中間精密度、再現(xiàn)性，三個(gè)都需要評(píng)估嗎？按照EP05-A3的20×2×2模型進(jìn)行評(píng)估，是否能滿足指導(dǎo)原則的要求？專家答復(fù)：指導(dǎo)原則要求應(yīng)根據(jù)各測(cè)量條件對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響程度的分析，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度和批間（lot-to-lot）精密度。按照EP05-A3的20×2×2模型進(jìn)行評(píng)估，每批兩個(gè)結(jié)果（４０對(duì)）間的差異，就是該樣品批內(nèi)不精密度的具體表現(xiàn)，根據(jù)這個(gè)結(jié)果計(jì)算出來的不精密度是改變了重復(fù)性條件的批內(nèi)不精密度。20×2×2模型考慮了體外診斷試劑在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用過程中的分析批、時(shí)間等影響因素，歸類為中間精密度的一種情況。20咨詢問題對(duì)于定性試劑的精密度測(cè)試實(shí)驗(yàn)怎么設(shè)計(jì)呢？專家答復(fù)：參考《定性檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》。應(yīng)根據(jù)各測(cè)量條件對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響程度的分析，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度和批間（lot-to-lot）精密度。應(yīng)選擇包括最低檢出限水平、中強(qiáng)濃度水平、陰性的至少三個(gè)分析物濃度水平樣本進(jìn)行精密度研究。如適用，還應(yīng)進(jìn)行臨界值水平的精密度研究。21：咨詢問題正確度評(píng)價(jià)，參考物質(zhì)、比對(duì)試驗(yàn)、回收試驗(yàn)這三種方式選擇上有優(yōu)先級(jí)嗎？有些項(xiàng)目，盡管有有證參考物質(zhì)，但是購買不到，可否采用方法學(xué)比對(duì)的方式？專家答復(fù)正確度評(píng)價(jià)有三種方法：第一種方法是分析具有被測(cè)量參考量值的適當(dāng)參考物質(zhì)；第二種方法是基于用患者樣品進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)并估計(jì)偏倚，此種偏倚實(shí)際上是兩種方法之間的系統(tǒng)誤差；考慮到前兩種評(píng)價(jià)方法的可獲得性有所限制，因此在有些情況下，可采用第三種方法即回收試驗(yàn)，但要注意的是回收試驗(yàn)評(píng)價(jià)的不是真正的“偏倚”。原則上，有可用的參考物質(zhì)的話，優(yōu)先采用參考物質(zhì)進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)，這種方法也是操作起來最簡單、最便捷的方法。當(dāng)參考物質(zhì)不能獲得時(shí)，可采用比對(duì)試驗(yàn)。22：咨詢問題當(dāng)企業(yè)無法獲得大量人血清的情況下，可以用其他的血清做實(shí)驗(yàn)嗎？有推薦的可購買的血清嗎？專家答復(fù)比對(duì)試驗(yàn)應(yīng)盡可能使用臨床樣品。若樣品量缺少不夠用于重復(fù)測(cè)定或測(cè)量區(qū)間的某些樣品難以獲得時(shí)，可通過混合、添加、稀釋等辦法進(jìn)行處理。處理過程可能會(huì)引起樣品互換性問題，因此使用處理過的樣品應(yīng)進(jìn)行標(biāo)注和記錄，建議處理過的樣品不超過樣品總數(shù)的20％。23：咨詢問題不同的比對(duì)試驗(yàn)方案參考的法規(guī)或方法不同，結(jié)果不同，那我們做出選擇時(shí)，有哪些較好的判斷依據(jù)沒有?比如什么情況下選擇多少例樣本，如何判斷等?專家答復(fù)正如培訓(xùn)時(shí)老師講到，比對(duì)試驗(yàn)可參考的文件如下。在進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)，我們考慮的因素包括：怎樣選擇目標(biāo)檢測(cè)系統(tǒng)（參比方法）？選擇多少份標(biāo)本n＝？選擇標(biāo)本的濃度或濃度范圍是多少？每天檢測(cè)多少批？批間間隔時(shí)間？每批檢測(cè)標(biāo)本數(shù)及檢測(cè)順序？共需多少工作日？數(shù)據(jù)怎樣處理？偏倚的判斷標(biāo)準(zhǔn)怎樣設(shè)置？不接受的項(xiàng)目怎樣整改？不接受的項(xiàng)目整改后怎樣驗(yàn)證？由于參考的文件不同，以上考慮因素也有差異，因此評(píng)價(jià)結(jié)果或結(jié)論也有可能不同。我們一定要基于我們的評(píng)價(jià)目的（建立性能指標(biāo)？確認(rèn)？驗(yàn)證？），選擇合適的、最新的、法規(guī)認(rèn)可的方法。目前，行業(yè)內(nèi)參考較多的是CLSIEP09cMeasurementProcedureComparisonandBiasEstimationUsingPatientSamples（用患者樣品進(jìn)行測(cè)量方法比對(duì)及偏倚估計(jì)，2018年）。CLSIEP09c要求樣本數(shù)量不少于100例。24：咨詢問題OLR、WLS、Deming、Passing-Bablok四種回歸統(tǒng)計(jì)方式是否可提供經(jīng)典案例分析舉例，以便更好的理解和應(yīng)用?；蛘哂袥]有專門醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)與產(chǎn)品結(jié)合的分析應(yīng)用的學(xué)習(xí)平臺(tái)，求講解和推薦。專家答復(fù)CLSIEP09c的附錄給出了這4種模型的公式和案例，另外YY/T1789.2-2021《體外診斷檢驗(yàn)系統(tǒng)性能評(píng)價(jià)方法第2部分：正確度》的附錄也給出了這4種回歸模型的示例，建議大家仔細(xì)學(xué)習(xí)。25：咨詢問題待評(píng)方法和參比方法統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，Deming和passing-bablok兩種回歸方法的具體區(qū)別是什么？專家答復(fù)OLR對(duì)數(shù)據(jù)的分布、等方差性等有較為嚴(yán)格的要求，要求因變量與自變量關(guān)系為線性、誤差服從均數(shù)為0的正態(tài)分布且方差相等、各觀測(cè)獨(dú)立、x無誤差等。在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和IVD實(shí)際工作中，常常需要比較兩種儀器、兩種方法或兩個(gè)不同實(shí)驗(yàn)室的測(cè)量結(jié)果是否相同，由于因變量（y）和自變量（x）都包含測(cè)量誤差（隨機(jī)變量），不符合最小二乘回歸的假設(shè)條件。因此Deming回歸和passing-bablok回歸雖然是兩種比較小眾的回歸方法，卻在我們這個(gè)領(lǐng)域用的比較多。比對(duì)試驗(yàn)，一般情況下，方法間差值混合變化時(shí)，可選擇Deming回歸或Passing-bablok回歸。Deming回歸在建立y對(duì)x的回歸方程中，同時(shí)考慮x的殘差最小和y的殘差最小。passing-bablok，相當(dāng)于把任意的兩個(gè)點(diǎn)，計(jì)算其斜率，如果有4個(gè)點(diǎn)，就能計(jì)算出6個(gè)點(diǎn)的斜率，Passing-bablok回歸線的斜率為所有這些斜率的中位數(shù)。比較而言，Deming方法有時(shí)不能消除一些差異變化較大數(shù)據(jù)點(diǎn)的影響，Passing-bablok為非參數(shù)方法，統(tǒng)計(jì)更寬松，不考慮隨機(jī)誤差有多大。強(qiáng)調(diào)的是EP09c要求須先通過散點(diǎn)圖、偏差圖、柱狀圖等方法從不同角度聯(lián)合評(píng)價(jià)，從而選擇最佳回歸模型進(jìn)行擬合分析。26：咨詢問題r是最小二乘法得到的還是最適合方程得到的呢？專家答復(fù)方法學(xué)比較，在進(jìn)行回歸統(tǒng)計(jì)的時(shí)候，往往先計(jì)算相關(guān)系數(shù)（r）。相關(guān)系數(shù)計(jì)算公示如下，r反映了組成這條最小二乘回歸直線上所有實(shí)驗(yàn)點(diǎn)對(duì)于線的緊密程度。r值越大，說明兩個(gè)方法檢測(cè)患者樣品檢測(cè)結(jié)果間關(guān)系密切（密切≠相等，r不是x和y方法結(jié)果一致的指標(biāo)），這時(shí)候可以進(jìn)行回歸統(tǒng)計(jì)了解兩個(gè)方法檢測(cè)數(shù)據(jù)間的數(shù)學(xué)關(guān)系了。27：咨詢問題方法比對(duì)中，分析質(zhì)量目標(biāo)、總誤差分析目標(biāo)、TEa等的設(shè)定依據(jù)有哪些？專家答復(fù)1999年斯德哥爾摩會(huì)議提出了分析質(zhì)量指標(biāo)設(shè)定的幾種原則和方法：（1）評(píng)估分析性能對(duì)臨床決定的影響；（2）檢驗(yàn)項(xiàng)目的生物學(xué)變異；（3）已發(fā)表的專業(yè)建議；（4）性能目標(biāo)由監(jiān)督機(jī)構(gòu)、或室間質(zhì)量評(píng)估計(jì)劃組織者設(shè)定；（5）現(xiàn)有技術(shù)水平能達(dá)到的性能水平。2014年米蘭會(huì)議重新修訂了分析性能指標(biāo)的“共識(shí)聲明（Consensusstatement）”，由原來的五個(gè)等級(jí)簡化為三個(gè)等級(jí)，并且增加了注釋。?國內(nèi)一些標(biāo)準(zhǔn)，例如WS/T403-2012《臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)》，還有醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（YY標(biāo)準(zhǔn)）中的一些產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)，都給出了常規(guī)項(xiàng)目的變異系數(shù)、偏倚、總誤差要求。28：咨詢問題方法學(xué)比對(duì)實(shí)驗(yàn)中，離群值剔除的標(biāo)準(zhǔn)是什么？專家答復(fù)離群值產(chǎn)生有兩種來源:一是技術(shù)錯(cuò)誤造成的，即樣品錯(cuò)誤、測(cè)試時(shí)的操作錯(cuò)誤、儀器故障、計(jì)算錯(cuò)誤、錄入測(cè)試結(jié)果時(shí)的簡單書寫錯(cuò)誤等造成的，這樣的離群值可以直接剔除，或剔除后再做實(shí)驗(yàn)補(bǔ)數(shù)據(jù)；第二種來源是不能用技術(shù)錯(cuò)誤解釋的，產(chǎn)生于試驗(yàn)條件、試驗(yàn)方法等因素的偶然偏離，這時(shí)就要進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理來決定離群值是保留還是剔除。離群值的取舍對(duì)分析結(jié)果會(huì)產(chǎn)生很大影響，必須謹(jǐn)慎對(duì)待，在離群值產(chǎn)生的原因不明之前，不應(yīng)簡單決定其取舍。在做離群值檢驗(yàn)時(shí)，要預(yù)先規(guī)定檢出離群值個(gè)數(shù)的上限，若檢出的離群值個(gè)數(shù)超過了這個(gè)上限時(shí)，對(duì)這一組測(cè)量應(yīng)做慎重的研究或處理。EP09c推薦用廣義極端學(xué)生化偏差(ExtremeStudentizeddeviate,ESD)方法檢驗(yàn)離群值，離群值的數(shù)量不應(yīng)超過5%。29：咨詢問題利用格拉布斯法(Grubbs)檢驗(yàn)法檢驗(yàn)離群值時(shí)，選用EXCEL編輯的公式和MedCalc軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析（選取同樣的α值），結(jié)果不一致，一般是EXCEL顯示有離群值，MedCalc軟件顯示無離群值，請(qǐng)問這個(gè)是什么原因?qū)е碌?軟件選擇界面如下：專家答復(fù)格拉布斯法計(jì)算公式應(yīng)該是一樣的，可能用軟件的時(shí)候是選擇了右側(cè)檢驗(yàn)而excel可能是雙側(cè)檢驗(yàn)的原因，建議軟件也使用雙側(cè)檢驗(yàn)試一下。30：咨詢問題關(guān)于數(shù)據(jù)正態(tài)分布的統(tǒng)計(jì)判斷，S-W和K-S分別參考時(shí)機(jī)？如果是基于樣本量來判斷的話，那么在不同樣本量分別優(yōu)先考慮哪種判斷方法？專家答復(fù)通常W檢驗(yàn)是小樣本量，醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)中樣本量為8-50時(shí)使用W（S-W）檢驗(yàn)，樣本量大于50時(shí)使用D（K-S）檢驗(yàn)。不同的統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)于W、D檢驗(yàn)樣本量的使用要求不同，如SAS應(yīng)該是2000，SPSS可能是5000。本節(jié)主要針對(duì)參考物質(zhì)相關(guān)問題。31咨詢問題國家參考品和國家標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)于產(chǎn)品需要執(zhí)行的強(qiáng)度是不是可以理解為推薦性標(biāo)準(zhǔn)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)？專家答復(fù)：個(gè)人理解國家標(biāo)準(zhǔn)品和國家參考品，只要適用，注冊(cè)檢驗(yàn)時(shí)都應(yīng)使用。32咨詢問題定性體外診斷試劑產(chǎn)品，已經(jīng)買到國家標(biāo)準(zhǔn)品，國家標(biāo)準(zhǔn)品附帶的說明書中描述不能用于溯源，原因是什么呢？專家答復(fù)：國家標(biāo)準(zhǔn)品和國家參考品，主要用途是用于體外診斷試劑質(zhì)量評(píng)價(jià)，在原材料選擇、制備方法、標(biāo)定方法、標(biāo)定結(jié)果、定值準(zhǔn)確性、量值溯源、穩(wěn)定性及分裝與包裝條件等方面都對(duì)其有相應(yīng)的要求。定性試劑國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，通常由陽性參考品、陰性參考品、檢測(cè)限參考品及精密性參考品等組成，分別用于對(duì)IVD試劑敏感性、特異性、檢出限、精密度等性能的評(píng)價(jià)。計(jì)量溯源性目前主要針對(duì)定量測(cè)定，定性測(cè)定目前還無法做到溯源，國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品主要用途還是評(píng)價(jià)結(jié)果的一致性。33咨詢問題關(guān)于正確度，有國家標(biāo)準(zhǔn)品，但是是人工重組的，和企業(yè)的檢測(cè)系統(tǒng)不匹配，該怎么處理？專家答復(fù)：國家標(biāo)準(zhǔn)品說明書的“用途”一欄注明了標(biāo)準(zhǔn)品的來源和適用范圍。如確實(shí)不適用，建議企業(yè)可向注冊(cè)審評(píng)審批部門提交說明，充分詳述不適用的理由。34咨詢問題定量檢測(cè)試劑沒有標(biāo)準(zhǔn)品，可以用重組抗原或天然抗原做企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品嗎？需要溯源到哪里？專家答復(fù)：這種情況下，可參考ISO17511：2020版模式6“被測(cè)量由制造商內(nèi)部自定義的參考物質(zhì)定義，沒有一級(jí)參考物質(zhì)和有證參考物質(zhì)，也沒有參考測(cè)量程序和一致化方案，不能溯源到SI單位”。簡單地說，企業(yè)要自行建立標(biāo)準(zhǔn)。模式6溯源的終點(diǎn)在于企業(yè)自定義的參考物質(zhì)（m3），被測(cè)量由這個(gè)參考物質(zhì)定義。m3通常是一些純品，例如針對(duì)抗原檢測(cè)，m3往往是純化的重組抗原，采用重量法或免疫分析方法（p4，制造商選定的測(cè)量程序）得到制造商工作校準(zhǔn)物。35咨詢問題定量體外診斷試劑產(chǎn)品，沒有標(biāo)準(zhǔn)品，采用外購化學(xué)合成的標(biāo)準(zhǔn)品，需要提供哪些材料，才可以做溯源用呢？專家答復(fù)：量值溯源如何做，以及需要提供哪些文件，在ISO17511：2020版有詳細(xì)要求。36咨詢問題產(chǎn)品研制過程中，無國家標(biāo)準(zhǔn)品，采用臨床樣本制備參考品的注意事項(xiàng)有哪些？具體參考文獻(xiàn)有哪些？專家答復(fù)：企業(yè)參考品的用途是全面評(píng)價(jià)和確認(rèn)產(chǎn)品的各項(xiàng)性能，發(fā)揮“標(biāo)尺”、“砝碼”作用，是IVD研發(fā)、生產(chǎn)及應(yīng)用全過程中進(jìn)行產(chǎn)品安全有效性評(píng)價(jià)的必備核心耗材，因此企業(yè)參考品設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)客觀合理，應(yīng)能充分評(píng)價(jià)產(chǎn)品的質(zhì)量，幫助發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品在設(shè)計(jì)或者生產(chǎn)中的一些缺陷和問題。采用臨床樣本制備參考品的注意事項(xiàng)：1）陽性參考品主要評(píng)估產(chǎn)品的敏感性，應(yīng)具有代表性、滿足臨床樣本的分布類型、遺傳標(biāo)記代表性，應(yīng)包括強(qiáng)陽性參考品、中等陽性參考品、弱陽性參考品，其中應(yīng)以中等陽性參考品為主。如被測(cè)物包括不同的型別及亞型，一般情況下應(yīng)覆蓋；2）陰性參考品主要評(píng)估產(chǎn)品的特異性，陰性參考品除了有不含被測(cè)物的正常患者樣本外，還應(yīng)設(shè)置一定數(shù)量的含有可能會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)物質(zhì)的樣本，包括分析物的結(jié)構(gòu)類似物、具有同源性序列的核酸片段、易引起相同或相似的臨床癥狀的其他病原體、采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他微生物等。建議還應(yīng)設(shè)置干擾評(píng)價(jià)的參考品，如常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)、常用藥物及其代謝物、樣本添加劑等；3）在企業(yè)參考品的基質(zhì)選擇上，企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)可能與臨床被檢樣本相同或接近（例如血清、血漿、組織切片）。例如，檢測(cè)血漿中基因突變的試劑評(píng)價(jià)參考品的設(shè)置應(yīng)根據(jù)血漿樣本中突變類型分布、片段長度、濃度等進(jìn)行模擬；4）企業(yè)要建立自己的參考品，并固定化下來。舉例來講，對(duì)于定性試劑盒而言，檢出限這個(gè)指標(biāo)非常關(guān)鍵，因此檢出限參考品的合理設(shè)置也就顯得尤為重要，但在實(shí)際工作中，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)有的企業(yè)設(shè)置該參考品時(shí)不太科學(xué)，往往隨意選擇一個(gè)臨床的強(qiáng)陽性樣本，然后進(jìn)行倍比稀釋，對(duì)系列稀釋的參考品進(jìn)行檢測(cè)，直至檢測(cè)到結(jié)果為陰性，并將上一個(gè)稀釋度參考品設(shè)置為檢出限參考品，這樣并不能清楚的確定參考品中的被測(cè)物的具體濃度（或滴度、效價(jià)等），從而也無法保持參考品批次間的一致性?？蓞⒖嫉奈墨I(xiàn)包括相應(yīng)審評(píng)指導(dǎo)原則的要求、國家標(biāo)準(zhǔn)品和參考品的研制相關(guān)論文等。37咨詢問題體外診斷試劑盒的不同的基因位點(diǎn)的參考品必須都是相同的嗎？比如全部都得是來自陽性細(xì)胞系或者全部都是陽性病人血樣？專家答復(fù)：要視情況而定。參考品的原材料應(yīng)盡可能與臨床樣本相一致或接近，主要來源于臨床樣本，但也可來源于永生化細(xì)胞系、基因編輯細(xì)胞系，甚至也可來自基因工程構(gòu)建產(chǎn)品、重組質(zhì)粒等。一般情況下建議陽性參考品中常見基因突變位點(diǎn)采用臨床樣本提取的DNA儲(chǔ)備液或細(xì)胞系作為原料，其他突變位點(diǎn)可采用DNA儲(chǔ)備液、細(xì)胞系或突變擴(kuò)增產(chǎn)物模擬樣本作為原料。38咨詢問題要檢測(cè)病人中的基因突變位點(diǎn)，盡量用臨床樣本來進(jìn)行性能分析，如果臨床樣本比較難獲得可否用帶有突變位點(diǎn)的細(xì)胞系來作為參考品？專家答復(fù)：可以。39咨詢問題基因突變位點(diǎn)檢測(cè)中設(shè)置的強(qiáng)陽性參考品中關(guān)于強(qiáng)陽應(yīng)如何定義，濃度如何界定？專家答復(fù)：強(qiáng)陽性在突變位點(diǎn)的檢測(cè)中一般是指突變頻率比較高的陽性樣本，與臨床中患者檢測(cè)出的群體突變頻率相關(guān)，沒有準(zhǔn)確的定義，可以根據(jù)不同疾病查閱文獻(xiàn)來設(shè)定。一般情況是直接選擇臨床樣本，不進(jìn)行人為稀釋。40咨詢問題關(guān)于流產(chǎn)物組織染色體拷貝數(shù)變異檢測(cè)試劑盒企業(yè)參考品建立中，關(guān)于微缺失微重復(fù)參考品，只要不影響相關(guān)疾病診斷，微缺失微重復(fù)的DNA區(qū)段和大小不用和國家參考品panel的相應(yīng)疾病的微缺失微重復(fù)的區(qū)段完全一致？專家答復(fù)：一般情況下，需要和國家參考品保持一致。這個(gè)項(xiàng)目，還應(yīng)充分考慮判斷依據(jù)和臨床是否常見的等綜合因素，建議咨詢相關(guān)老師。41咨詢問題體外診斷定性試劑產(chǎn)品，臨床存在了不同耐藥類型，有一種藥物耐藥，也有兩種和多種耐藥類型，參考品需要包含所有臨床耐藥類型還是只包含耐藥基因突變類型就可以？專家答復(fù)：一個(gè)基因位點(diǎn)發(fā)生不同的堿基突變，臨床指征相同的耐藥，參考品不能只選擇1種突變型來代表，還是需要盡可能多的選擇。42咨詢問題對(duì)于罕見的型別可以使用細(xì)胞株（人類基因檢測(cè)），怎么定義這個(gè)罕見？有可量化的指標(biāo)來定義“罕見”嗎？專家答復(fù)：要視項(xiàng)目具體情況而定。參考品的原材料應(yīng)盡可能與臨床樣本相一致或接近，主要來源于臨床樣本，但也可來源于永生化細(xì)胞系、基因編輯細(xì)胞系，甚至也可來自基因工程構(gòu)建產(chǎn)品、重組質(zhì)粒等。本節(jié)主要針對(duì)檢出限相關(guān)問題。43咨詢問題LOB建立過程中，測(cè)試了60個(gè)數(shù)據(jù)，那這60個(gè)數(shù)據(jù)的數(shù)值中會(huì)有可能出現(xiàn)大于最后建立的LOB嗎？專家答復(fù)完全有可能。空白樣本單側(cè)95%分布的上限為Lo