食品中微生物的快速檢驗(yàn)

食品中微生物的快速檢驗(yàn)摘要隨著食品工業(yè)的發(fā)展，食品安全越來越受到人們的關(guān)注，其中微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中最突出的問題。因此，食品微生物的檢測(cè)顯得尤為重要。本文就有關(guān)于食品微生物的快速檢測(cè)作一簡(jiǎn)單的介紹。關(guān)鍵詞食品微生物檢測(cè)快速食品微生物的常規(guī)檢測(cè)方法，大多數(shù)是以培養(yǎng)活的細(xì)胞生長(zhǎng)為手段來達(dá)到監(jiān)測(cè)的目的。這些方法往往需要在實(shí)驗(yàn)室的無菌條件下進(jìn)行，選擇特定的培養(yǎng)基培養(yǎng)，將細(xì)菌培養(yǎng)成肉眼可見的菌落才可確認(rèn)，并且需要一定的培養(yǎng)時(shí)間（少則2-3天，多則數(shù)周），既費(fèi)時(shí)費(fèi)力又麻煩。而現(xiàn)行有效的一些快速檢測(cè)方法應(yīng)用起來快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，不僅可以大大縮短檢測(cè)時(shí)間，提高檢出率，并可用于微生物計(jì)數(shù)、早期診斷。鑒定等方面。這些快速方法通過綜合引用微生物學(xué)、化學(xué)、生物化學(xué)、生物物理學(xué)、免疫學(xué)以及血清學(xué)試驗(yàn)技術(shù)對(duì)微生物進(jìn)行分離、檢測(cè)、鑒定和計(jì)數(shù)，與傳統(tǒng)方法比較，更快、更方便、更靈敏。?1?細(xì)菌總數(shù)的快速測(cè)定技術(shù)1.1..紙片快速測(cè)定法紙片快速測(cè)定法是運(yùn)用在一層雙膜系統(tǒng)內(nèi)含有適合細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基和冷水可溶的膠體物質(zhì)，以每系統(tǒng)1mL的加樣量將樣品（稀釋或未經(jīng)稀釋的樣品）直接加到基礎(chǔ)膜中間，蓋上含有凝膠劑和TTC的覆蓋膜，培養(yǎng)后細(xì)菌在雙層膜之間生長(zhǎng)并顯色即可直接計(jì)數(shù)。1.2.ATP生物發(fā)光法ATP即三磷酸腺苷，普遍存在于包括微生物在內(nèi)的一切活細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)熒光素酶系統(tǒng)和ATP接觸時(shí)就會(huì)發(fā)光。螢火蟲熒光素酶是一種高效生物催化劑，當(dāng)有鎂離子存在時(shí)，它能以熒光素、ATP和氧氣為底物，催化D-熒光素氧化脫羧，將化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽?，最大發(fā)生波長(zhǎng)為562nm,但酶結(jié)構(gòu)不同則發(fā)射光略有不同。光強(qiáng)度與食品中微生物的ATP含量成正比。細(xì)菌ATP含量因不同種、生長(zhǎng)條件、菌齡、抑制劑或有害化學(xué)物質(zhì)存在有很大的變化。如果樣品中污染了微生物，用ATP提取試劑與樣品混合，使細(xì)胞壁和細(xì)胞膜開孔，提取出ATP，然后再與熒光素和熒光素酶生物發(fā)光試劑作用，用熒光儀進(jìn)行測(cè)定，再通過配套的軟件，可將發(fā)光量換算成微生物數(shù)。1.3.阻抗法電阻抗法是20世紀(jì)70年代初期法陣起來的的一項(xiàng)新生物學(xué)技術(shù)，是用電阻抗作為媒介，監(jiān)測(cè)微生物代謝活性為基礎(chǔ)的一種快速方法。已經(jīng)開始應(yīng)用于食品微生物的檢驗(yàn)。電阻抗之交流電路中導(dǎo)電物質(zhì)對(duì)電流所起的阻礙和抵抗作用。其原理是細(xì)菌在培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)繁殖的過程中，將會(huì)使培養(yǎng)基中的大分子電惰性物質(zhì)如碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂類等，代謝為具有電活性的小分子物質(zhì)，如乳酸鹽、醋酸鹽等，這些離子態(tài)物質(zhì)能增加培養(yǎng)基的導(dǎo)電性，使培養(yǎng)基的阻抗發(fā)生變化，通過檢測(cè)培養(yǎng)基的電阻抗變化情況，判定細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)繁殖特性，即可檢測(cè)出相應(yīng)的細(xì)菌。操作時(shí)將接種了的培養(yǎng)基置于一個(gè)裝有不銹鋼點(diǎn)擊的容器內(nèi)測(cè)定微生物生長(zhǎng)而產(chǎn)生的阻抗（及其組分）改變。該法目前已經(jīng)用于細(xì)菌總數(shù)、霉菌、酵母菌、大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等的檢測(cè)。旋轉(zhuǎn)平板法把液態(tài)樣品螺旋式并不斷稀釋地接種到一個(gè)旋轉(zhuǎn)的平皿中。這一系統(tǒng)在美國(guó)已被廣泛采用。旋轉(zhuǎn)平板法是根據(jù)檢樣懸液被螺旋平板注入器連續(xù)不斷地注入到螺旋著的瓊脂平板的表面，在平板表面形成阿基米德螺旋形軌跡。當(dāng)用于分液的空心針從平板中心移向邊緣時(shí)，菌液體積減少，注入的體積和瓊脂半徑間存在著指數(shù)關(guān)系。培養(yǎng)時(shí)菌落沿注液線生長(zhǎng)。用一計(jì)數(shù)的方格來校準(zhǔn)與瓊脂表面不同區(qū)域有關(guān)的樣品量，計(jì)數(shù)每個(gè)區(qū)域的已知菌落數(shù)，再計(jì)算細(xì)菌濃度⑷。這種方法可廣泛用于細(xì)菌、酵母、霉菌及乳類樣品中。樣品倒入平板后菌落數(shù)可以用激光菌落計(jì)數(shù)器來計(jì)數(shù)，即將光檢測(cè)儀放置在儀器的底部，激光儀從上面自動(dòng)掃描平板，當(dāng)激光束通過菌落時(shí)，可以降低光的強(qiáng)度，從而檢測(cè)出菌落的存在。這樣菌落數(shù)可以通過電子計(jì)數(shù)，從而不是傳統(tǒng)的視覺計(jì)數(shù)。電子計(jì)數(shù)快而準(zhǔn)確，與傳統(tǒng)計(jì)數(shù)法得到的結(jié)果相近。疏水性柵格濾膜法（HGMF）或等格法用疏水性柵格濾膜（HGMF）過濾樣品液，先經(jīng)5微米網(wǎng)眼的初濾膜過濾除去食品顆粒（每個(gè)樣品個(gè)需要一套），再通過孔徑為0.45微米的濾膜。然后將濾膜置于相應(yīng)的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，最后計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。疏水性的柵格作為柵欄以防止菌落的擴(kuò)散，保證了所有的菌落都是正方形的，便于人工或機(jī)械計(jì)數(shù)。這種方法既可以用于菌落總數(shù)的測(cè)定，也可用于大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的計(jì)數(shù)，還可以用于霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)。只要選擇不同的培養(yǎng)基。此外還可以根據(jù)菌落在培養(yǎng)基上產(chǎn)生的不同顏色來分類計(jì)數(shù)。直接外熒光濾過技術(shù)（DEFT）直接外熒光濾過技術(shù)是測(cè)定乳、肉、禽、魚、水果、蔬菜、啤酒等食品及水中微生物的一種快速方法。它主要是是利用紫外光顯微鏡來進(jìn)行。首先用一種特殊濾膜過濾樣品，經(jīng)吖啶橙染色后，用紫外光顯微鏡觀察，活細(xì)胞呈橙色熒光，死細(xì)胞呈綠色熒光。同時(shí)，我們也可用直接外熒光濾過技術(shù)與平板計(jì)數(shù)法聯(lián)合使用來檢測(cè)輻照食品，平板計(jì)數(shù)法的結(jié)果提供了產(chǎn)品輻照后存活的微生物量，直接外熒光濾過技術(shù)計(jì)數(shù)顯示了樣品中包括未存活細(xì)胞在內(nèi)的微生物總數(shù)。通過比較輻照前后直接外熒光濾過技術(shù)計(jì)數(shù)和平板計(jì)數(shù)的差異，可判別食品是否經(jīng)過輻照處理。“即用膠”系統(tǒng)（SimPlate）“即用膠”系統(tǒng)檢驗(yàn)食品中細(xì)菌總數(shù)是運(yùn)用一種專用培養(yǎng)基。這種專用培養(yǎng)基內(nèi)含有與多種細(xì)菌酶所對(duì)應(yīng)的底物，檢樣中含有細(xì)菌時(shí)，只要具有一種酶的活性即能與底物作用生成4-甲基傘形酮，培養(yǎng)一定時(shí)間后，在波長(zhǎng)365nm的紫外光下發(fā)出藍(lán)色熒光⑷。把1ml樣品傾入一盛有無菌液體培養(yǎng)基的試管中，混勻后再將混合物倒入一個(gè)裝有膠質(zhì)的特殊培養(yǎng)皿中?；旌衔锱c膠質(zhì)接觸后便形成與瓊脂相似的復(fù)合物，經(jīng)培養(yǎng)后可根據(jù)顏色指示或在紫外光下產(chǎn)生熒光計(jì)數(shù)菌數(shù)。與等格法相類似的，根據(jù)選擇不同的培養(yǎng)基，可用于大腸桿菌、霉菌和酵母菌以及彎曲桿菌的計(jì)數(shù)。2?小結(jié)隨著分子生物學(xué)與其他學(xué)科的發(fā)展，微生物檢驗(yàn)技術(shù)也在不斷地更新和提高，逐步像分子學(xué)水平邁進(jìn)。并