透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

細(xì)菌內(nèi)毒素限量檢查講義——透析用水、透析液講解董光宴1、試驗(yàn)條件必備2、標(biāo)準(zhǔn)要求3、供試品溶液的制備4、限量檢查

湛江博康海洋生物有限公司3/4/20231博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!一、試驗(yàn)條件必備1、經(jīng)過(guò)培訓(xùn)合格的實(shí)驗(yàn)人員；2、實(shí)驗(yàn)室條件；3、必備的實(shí)驗(yàn)材料。3/4/20232博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!3必備的實(shí)驗(yàn)材料3.1必備材料①鱟試劑盒：具有國(guó)家批準(zhǔn)文號(hào)，并依法檢驗(yàn)合格。如：湛江博康海洋生物有限公司，衛(wèi)藥準(zhǔn)字（88）SJ-04。3/4/20233博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!②

實(shí)驗(yàn)室要求潔凈，無(wú)塵埃流通，室內(nèi)溫度要求20—25℃為宜。必要時(shí)應(yīng)在超凈工作臺(tái)操作。3/4/20234博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!3.2取樣

取樣器具必須符合2010年版《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》310頁(yè)——細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法“3實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備”規(guī)定：無(wú)外源性內(nèi)毒素。必要時(shí)可以用真空采血管（無(wú)添加劑）取樣。3/4/20235博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!5復(fù)用設(shè)備及用水要求5.1.3水質(zhì)細(xì)菌學(xué)、內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)間：最初應(yīng)每周檢測(cè)1次，連續(xù)2次檢測(cè)結(jié)果符合要求后，細(xì)菌學(xué)檢測(cè)應(yīng)每月1次，內(nèi)毒素檢測(cè)應(yīng)每3個(gè)月至少1次。3/4/20236博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!四限量檢查

透析用水、透析液已有內(nèi)毒素檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，可直接進(jìn)行內(nèi)毒素檢查。3/4/20237博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!2、限值的確定內(nèi)毒素限值L=1.0EU/ml。3/4/20238博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!4、操作方法

編號(hào)名稱A樣品管B樣品陽(yáng)性對(duì)照C陽(yáng)性對(duì)照D陰性對(duì)照3/4/20239博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!4.2陽(yáng)性對(duì)照

檢驗(yàn)鱟試劑活性及試驗(yàn)有效性。4.3陰性對(duì)照檢驗(yàn)試驗(yàn)操作及環(huán)境是否對(duì)試驗(yàn)有污染。0.25EU/ml3/4/202310博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!注意：1、只能在安瓿的易折點(diǎn)上部開(kāi)啟內(nèi)毒素，不能沿易折點(diǎn)開(kāi)啟，防止振蕩過(guò)程中內(nèi)毒素粘在封口膜上。2、只能取1ml的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水復(fù)溶細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品。3/4/202311博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!4.4供試品陽(yáng)性對(duì)照

目的是為了驗(yàn)證透析用水中有內(nèi)毒素可以被檢測(cè)出來(lái)。

0.25EU/ml/8倍3/4/202312博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!6加樣

其中2支加入0.1ml的0.25EU/ml的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液作為陽(yáng)性對(duì)照;2支加入0.1ml的透析用水8倍稀釋液作為供試品管;

2支加入0.1ml的透析用水8倍稀釋液和0.1ml的0.25EU/ml的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液作為供試品陽(yáng)性對(duì)照;

2支加入0.2ml的檢查用水作為陰性對(duì)照。3/4/202313博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!7結(jié)果判斷

保溫60分鐘±2分鐘后觀察結(jié)果。若陰性對(duì)照溶液D的平行管均為陰性，供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液B的平行管均為陽(yáng)性，陽(yáng)性對(duì)照溶液C的平行管均為陽(yáng)性，試驗(yàn)有效。

3/4/202314博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!供試品供試品陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照--++++--結(jié)果是否有效有效結(jié)果判斷合格8結(jié)果記錄3/4/202315博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!試劑名稱用途1鱟試劑反應(yīng)主劑鱟試劑與2內(nèi)毒素工作品陽(yáng)性對(duì)照3檢查用水樣本溶解鱟試劑與樣本溶解4酸性調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)透析液的PH值【組成成份】每盒試劑組成每盒試劑配套試驗(yàn)耗材：無(wú)熱原試管5ml×6支；無(wú)熱原試管2ml×6支；無(wú)熱原吸嘴0.25ml×15支。3/4/202316博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁(yè)!③

恒溫箱。④

旋渦振蕩器。⑤

其它器具：消毒棉球，剪刀和封口膜等。3/4/202317博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁(yè)!二、復(fù)用設(shè)備及用水要求《血液透析器復(fù)用操作規(guī)范》5.1.2水質(zhì)要求：應(yīng)定期檢測(cè)復(fù)用用水細(xì)菌和內(nèi)毒素的污染程度。應(yīng)在血液透析器與復(fù)用系統(tǒng)連接處或盡可能接近此處進(jìn)行水質(zhì)檢測(cè)。內(nèi)毒素含量不得超過(guò)2EU/ml，干預(yù)限度為1EU/ml。當(dāng)達(dá)到干預(yù)限度時(shí)，繼續(xù)使用水處理系統(tǒng)是可以接受的，但應(yīng)采取措施，防止系統(tǒng)污染進(jìn)一步加重。3/4/202318博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁(yè)!三、供試品溶液的制備

透析用水需進(jìn)行稀釋。一般要求供試品溶液的PH值在6.0～8.0的范圍內(nèi)。對(duì)于透析液，需調(diào)節(jié)PH值，可使用酸性調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值。3/4/202319博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁(yè)!1、試劑和樣品鱟試劑盒（生產(chǎn)單位：湛江博康海洋生物有限公司，靈敏度：0.125EU/ml）細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（10EU）透析用水3/4/202320博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁(yè)!3、計(jì)算稀釋倍數(shù)MVD=L/λ=1.0EU/ml/0.125EU/ml=8倍3/4/202321博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁(yè)!透析用水8倍稀釋液0.2ml圖示4.1供試品溶液的制備1.4ml3/4/202322博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁(yè)!補(bǔ)充：內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品的正確開(kāi)啟方法

取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上部輕輕劃痕，用75%酒精棉球擦拭后啟開(kāi)，啟開(kāi)過(guò)程應(yīng)防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。正確（易折點(diǎn)）錯(cuò)誤3/4/202323博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁(yè)!0.25EU/ml0.2ml0.2ml1.8ml0.6ml圖示1EU/ml10EU/ml3/4/202324博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁(yè)!5鱟試劑的準(zhǔn)備

取規(guī)格為0.1ml/支的鱟試劑8支，放在試管架上，排成4列，每列2支。輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后啟開(kāi)備用，防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。每支加入0.1ml檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解。

3/4/202325博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁(yè)!

加樣結(jié)束后，將鱟試劑用醫(yī)用膠布封口，輕輕振動(dòng)混勻，連同試管架放入37℃水浴或適宜恒溫器中，試管架保持水平狀態(tài)，保溫60分鐘。3/4/202326博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁(yè)!

若溶液A的兩個(gè)平行管均為陰性，判供試品符合規(guī)定；若溶液A的兩個(gè)平行管均為陽(yáng)性，判供試品不符合規(guī)定。若溶液A的兩個(gè)平行管中的一管為陽(yáng)性，另一管為陰性，需進(jìn)行復(fù)試。復(fù)試時(shí)，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均為陰性，判供試品符合規(guī)定；否則判供試品不符合規(guī)定。3/4/202327博康透析液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查共28頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁(yè)!