(3.4.5)-微生物自動(dòng)化檢測(cè)

微生物檢驗(yàn)微生物自動(dòng)化檢測(cè)

傳統(tǒng)的微生物鑒定方法是：涂片革蘭染色鏡檢，常規(guī)生化試驗(yàn)，血清學(xué)鑒定等。70年代后隨著分子生物學(xué)的進(jìn)展，用于檢測(cè)M的儀器設(shè)備在不斷改進(jìn)，加之臨床對(duì)檢驗(yàn)人員的要求越來(lái)越高，故現(xiàn)代M檢驗(yàn)和鑒定技術(shù)逐步趨向于簡(jiǎn)單快速化、微量化、商品化（標(biāo)準(zhǔn)化）、系列化和自動(dòng)化。一、自動(dòng)化血培養(yǎng)檢測(cè)和分析系統(tǒng)二、微生物數(shù)碼分類鑒定系統(tǒng)三、微生物自動(dòng)鑒定和藥敏系統(tǒng)四、全自動(dòng)抗原抗體檢測(cè)系統(tǒng)一、自動(dòng)血培養(yǎng)檢測(cè)和分析系統(tǒng)正常人的血液是無(wú)菌的，當(dāng)細(xì)菌侵入血流時(shí)，可引起菌血癥或敗血癥。此時(shí)血培養(yǎng)檢查的快速

和準(zhǔn)確性對(duì)診斷和治療具有極其重要的意義。一、自動(dòng)血培養(yǎng)檢測(cè)和分析系統(tǒng)正常人的血液是無(wú)菌的，當(dāng)細(xì)菌侵入血流時(shí)，可引起菌血癥或敗血癥。此時(shí)血培養(yǎng)檢查的快速和準(zhǔn)確性對(duì)診斷和治療具有極其重要的意義。（二）儀器的基本結(jié)構(gòu)和性能半自動(dòng)血培養(yǎng)儀僅有檢測(cè)（CO2）系統(tǒng)，而全自動(dòng)除檢測(cè)系統(tǒng)外，還有恒溫孵育系統(tǒng)、電腦分析系統(tǒng)和打印系統(tǒng)等。（三）配套試劑和操作要點(diǎn)1.培養(yǎng)瓶：有需氧培養(yǎng)瓶、厭氧培養(yǎng)瓶、兒科專用瓶、結(jié)核菌培養(yǎng)瓶、高滲培養(yǎng)瓶、中和抗生素培養(yǎng)瓶等種類。根據(jù)分離細(xì)菌的需要靈活選用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分和抗菌藥物拮抗劑。2.真空采血系統(tǒng)：配有一系次性使用的無(wú)菌塑料管，兩端與兩個(gè)無(wú)菌針頭相連，操作時(shí)將一端的針頭進(jìn)行靜脈穿刺，另一針頭插入負(fù)壓的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，所采得的血液因負(fù)壓作用直接進(jìn)入培養(yǎng)瓶。3.取血量：采血量一般以肉湯培養(yǎng)基的1/為宜，成人一次性采血量為5-6ml，嬰幼兒為1-2ml。常用的培養(yǎng)基容量為50ml/瓶。取血量為5-6ml，注入培養(yǎng)瓶中。4.采血方法：一般情況下，應(yīng)在病人發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時(shí)采血。原則上應(yīng)在抗菌藥物應(yīng)用之前，對(duì)已用而不能中止的病人，也應(yīng)在下次用藥前采集，采血部位一般從肘靜脈采集，采血部位局部皮膚應(yīng)徹底消毒。

（四）常用的血培養(yǎng)儀1.半自動(dòng)培養(yǎng)儀以BACTEC460為代表。將待測(cè)標(biāo)本接種在含14C-底物的專用培養(yǎng)瓶中，該系統(tǒng)只有檢測(cè)系統(tǒng)，且檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，放射性廢物的處理較為困難。2.全自動(dòng)血培養(yǎng)儀以BACTEC9000系列、BacT/Alert系統(tǒng)、VITAL。特點(diǎn)：培養(yǎng)基多種多樣；可恒溫震蕩培養(yǎng)；無(wú)放射性污染；能夠連續(xù)自動(dòng)監(jiān)測(cè)；可與細(xì)菌鑒定儀結(jié)合使用。BACTEC9000系列全自動(dòng)血培養(yǎng)儀二、微生物數(shù)碼分類鑒定系統(tǒng)微生物數(shù)碼分類鑒定技術(shù)集數(shù)學(xué)、電子、信息及自動(dòng)分析技術(shù)于一體，采用標(biāo)準(zhǔn)化、成品化和配套的生化反應(yīng)試劑條（板），可將細(xì)菌鑒定到屬、群、種和亞種或生物型，并可對(duì)不同來(lái)源的臨床標(biāo)本進(jìn)行針對(duì)性的鑒定。二、微生物數(shù)碼分類鑒定系統(tǒng)

微生物數(shù)碼分類鑒定技術(shù)集數(shù)學(xué)、電子、信息及自動(dòng)分析技術(shù)于一體，采用標(biāo)準(zhǔn)化、成品化和配套的生化反應(yīng)試劑條（板），可將細(xì)菌鑒定到屬、群、種和亞種或生物型，并可對(duì)不同來(lái)源的臨床標(biāo)本進(jìn)行針對(duì)性的鑒定。2、編碼將所得到細(xì)菌生化反應(yīng)模式轉(zhuǎn)化成數(shù)學(xué)模式，可把被測(cè)細(xì)菌的全部生化反應(yīng)結(jié)果快速轉(zhuǎn)錄成數(shù)字（編碼），經(jīng)查閱編碼檢索本或電腦分析系統(tǒng)又可將數(shù)字轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的細(xì)菌名稱。3、查碼在編碼檢索本內(nèi)尋找數(shù)碼譜。

4、解釋2、編碼將所得到細(xì)菌生化反應(yīng)模式轉(zhuǎn)化成數(shù)學(xué)模式，可把被測(cè)細(xì)菌的全部生化反應(yīng)結(jié)果快速轉(zhuǎn)錄成數(shù)字（編碼），經(jīng)查閱編碼檢索本或電腦分析系統(tǒng)又可將數(shù)字轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的細(xì)菌名稱。3、查碼在編碼檢索本內(nèi)尋找數(shù)碼譜。

4、解釋2、編碼將所得到細(xì)菌生化反應(yīng)模式轉(zhuǎn)化成數(shù)學(xué)模式，可把被測(cè)細(xì)菌的全部生化反應(yīng)結(jié)果快速轉(zhuǎn)錄成數(shù)字（編碼），經(jīng)查閱編碼檢索本或電腦分析系統(tǒng)又可將數(shù)字轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的細(xì)菌名稱。3、查碼在編碼檢索本內(nèi)尋找數(shù)碼譜。

4、解釋2.操作要點(diǎn)（1）準(zhǔn)備1）標(biāo)本經(jīng)分離培養(yǎng)得到的純菌落。2）借助涂片、染色鏡檢、氧化酶等試驗(yàn)對(duì)被測(cè)菌進(jìn)行初步鑒定，以選擇合適的試劑條。3）挑選被測(cè)菌的純菌落接種試劑條。（2）接種首先制備細(xì)菌懸液，然后調(diào)整濃度至1.5億/ml或>1.5億/ml，最后進(jìn)行接種。（3）觀察及記錄結(jié)果接種后的API試條一般經(jīng)35℃~37℃孵育18~24h可觀察結(jié)果。（4）結(jié)果的解釋解釋的依據(jù)是鑒定百分率表、編碼本和電腦軟件，可將反應(yīng)結(jié)果直接與百分率表核對(duì)而得出結(jié)果，或?qū)⑸磻?yīng)的＋、－結(jié)果按3個(gè)一組（1，2，4）得出一組7位數(shù)的數(shù)碼，查閱編碼本上與之對(duì)應(yīng)的細(xì)菌條目即可得出解釋。使用電腦分析軟件時(shí)可手工輸入肉眼觀察得出的＋或－結(jié)果用配套的讀數(shù)儀與電腦聯(lián)機(jī)，半自動(dòng)地得到鑒定結(jié)果。一株擬態(tài)弧菌的編碼鑒定計(jì)數(shù)及菌名檢索(示例)

第1位數(shù)第2位數(shù)第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)鑒

定

結(jié)

果

Ｏ

Ｎ

Ｐ

Ｇ精

氨

酸賴

氨

酸鳥(niǎo)

氨

酸檸

檬

酸硫

化

氫尿

酶Ｉ

Ｐ

Ａ吲

哚Ｖ

│

Ｐ明

膠葡

萄

糖甘

梨

醇肌

醇山

梨

醇鼠

李

糖蔗

糖蜜

二

糖苦

杏

仁

甙阿

拉

伯

糖氧

化

酶

１２４１２４１２４１２４１２４１２４１２４反應(yīng)結(jié)果＋＋＋－＋－＋－－＋－＋＋－＋－＋－－－－梅

氏

弧

菌應(yīng)得數(shù)值１２４０２０1００10４１０４０２００００組合編碼７２15５２０

三、微生物自動(dòng)鑒定和藥敏系統(tǒng)

以VITEK—AMS為例（一）工作原理采用數(shù)碼鑒定原理，每個(gè)用于鑒定的試卡內(nèi)有30項(xiàng)反應(yīng)，每3個(gè)反應(yīng)為一組，將各組反應(yīng)結(jié)果相加，30項(xiàng)反應(yīng)可得一組10位數(shù)的數(shù)碼。儀器自動(dòng)定時(shí)測(cè)定試卡每一項(xiàng)反應(yīng)孔的透光度，當(dāng)生長(zhǎng)對(duì)照透光度到終點(diǎn)閾值時(shí)，指示該卡已完成反應(yīng)，系統(tǒng)以此時(shí)各孔的反應(yīng)值作為判斷依據(jù)，組成數(shù)碼并與數(shù)據(jù)庫(kù)中已知分類單位相比較，獲得相似系統(tǒng)鑒定值，自動(dòng)打印出實(shí)驗(yàn)室報(bào)告和病人報(bào)告單。（二）基本結(jié)構(gòu)和性能（1）充填機(jī)/封口機(jī)：標(biāo)本注入試驗(yàn)卡中及封口。（2）讀取器/恒溫箱：讀取卡片內(nèi)樣本在培養(yǎng)介質(zhì)內(nèi)生長(zhǎng)變化值，溫度恒定為35℃左右。（3）電腦主機(jī)：分析資料的儲(chǔ)存。（4）終端機(jī)：輸入操作指令，顯示試驗(yàn)結(jié)果。（5）打印機(jī)：自動(dòng)打印出試驗(yàn)結(jié)果。（三）配套試劑和操作要點(diǎn)1.配套試劑與機(jī)器配套的有各種鑒定和藥敏測(cè)試卡。2.操作要點(diǎn)（1）安裝計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)庫(kù)全部軟件。（2）修訂系統(tǒng)工作框架，設(shè)定本單位工作參數(shù)，決定報(bào)告方式等。（3）標(biāo)本準(zhǔn)備在測(cè)試卡上書(shū)寫(xiě)鑒定號(hào)，標(biāo)記外加試驗(yàn)結(jié)果；配置菌懸液，不同的測(cè)試卡有不同的要求；用彎形塑料管連接測(cè)試卡和菌懸液并置試管架上，放入充液倉(cāng)充液接種并封口。（4）將接種菌液后的測(cè)試卡放入讀取器/恒溫箱。（5）開(kāi)始自動(dòng)孵育、測(cè)試過(guò)程，中途可隨時(shí)觀察反應(yīng)的情況，反應(yīng)一旦結(jié)束立即自動(dòng)打印出報(bào)告。（3）標(biāo)本準(zhǔn)備在測(cè)試卡上書(shū)寫(xiě)鑒定號(hào)，標(biāo)記外加試驗(yàn)結(jié)果；配置菌懸液，不同的測(cè)試卡有不同的要求；用彎形塑料管連接測(cè)試卡和菌懸液并置試管架上，放入充液倉(cāng)充液接種并封口。（4）將接種菌液后的測(cè)試卡放入讀取器/恒溫箱。（5）開(kāi)始自動(dòng)孵育、測(cè)試過(guò)程，中途可隨時(shí)觀察反應(yīng)的情況，反應(yīng)一旦結(jié)束立即自動(dòng)打印出報(bào)告。VITEK32/60/120細(xì)菌鑒定和藥敏系統(tǒng)四、全自動(dòng)抗原抗體檢測(cè)系統(tǒng)以VIDAS系統(tǒng)為例。VIDAS是一種全自動(dòng)抗原抗體檢測(cè)系統(tǒng)，可直接從感染性疾病患者標(biāo)本中檢測(cè)病原體。（一）工作原理采用酶聯(lián)免疫（夾心法）原理，并在底物中摻入熒光物質(zhì)，最終產(chǎn)生熒光產(chǎn)物4-甲基-7羥刀豆素，熒光強(qiáng)弱與標(biāo)本中被測(cè)物濃度相關(guān)，經(jīng)掃描標(biāo)本讀數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)比較計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)值，并根據(jù)陰性和陽(yáng)性臨界值判定結(jié)果。（二）基本結(jié)構(gòu)和性能1.主機(jī)：包括A、B、C、D、E五個(gè)獨(dú)立的工作倉(cāng)，工作倉(cāng)分為上下2層，上層是垂直的圓形插孔，放置椎形的固相（包被抗原或抗體）載體，下層為平行的槽溝，放置相應(yīng)試劑條。每一個(gè)獨(dú)立工作倉(cāng)上層可放置6個(gè)固相接受器，下層可放與固相載體相對(duì)應(yīng)的6條試劑條。每一工作倉(cāng)內(nèi)有一光掃描儀和微處理控制器，用于控制讀數(shù)并與中心電腦保持聯(lián)系。工作時(shí)椎形的固相載體下降，刺入與之對(duì)應(yīng)的試劑條并與其中的患者血清、洗滌液、酶標(biāo)抗體及底物順序反應(yīng)，最終讀取結(jié)果。（二）基本結(jié)構(gòu)和性能1.主機(jī)：包括A、B、C、D、E五個(gè)獨(dú)立的工作倉(cāng)，工作倉(cāng)分為上下2層，上層是垂直的圓形插孔，放置椎形的固相（包被抗原或抗體）載體，下層為平行的槽溝，放置相應(yīng)試劑條。每一個(gè)獨(dú)立工作倉(cāng)上層可放置6個(gè)固相接受器，下層可放與固相載體相對(duì)應(yīng)的6條試劑條。每一工作倉(cāng)內(nèi)有一光掃描儀和微處理控制器，用于控制讀數(shù)并與中心電腦保持聯(lián)系。工作時(shí)椎形的固相載體下降，刺入與之對(duì)應(yīng)的試劑條并與其中的患者血清、洗滌液、酶標(biāo)抗體及底物順序反應(yīng)，最終讀取結(jié)果。（三）配套試劑和操作要點(diǎn)1.配套試劑（1）SPR固相接受器：是一個(gè)由聚丙烯為原料制成的漏斗樣圓錐形吸管，根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的不同，內(nèi)壁吸附不同微生物抗原或抗體。（2）試劑條：由聚丙烯制成，每一試劑條有10個(gè)小池，由薄膜覆蓋封閉。2.操作要點(diǎn)（1）標(biāo)本前處理：根據(jù)不同測(cè)試項(xiàng)目將標(biāo)本作不同處理，并將處理后樣本加入試劑條中的樣品孔；（2）開(kāi)機(jī)、預(yù)溫和系統(tǒng)自檢；（3）將SPR及試劑條放入相應(yīng)位置，輸入病人資料，反應(yīng)