白芨組織培養(yǎng)實(shí)施方案

白及組織培養(yǎng)實(shí)施方案一、白及簡(jiǎn)介貴州、四川、湖南、湖北、安徽、河南、浙江、陜西等地。其味苦、甘、澀,性涼,歸肺、胃、肝經(jīng)。以塊莖供藥用，能收斂止血，消腫生肌；治肺結(jié)核咳血，一種，花開(kāi)明媚，被作為庭院、居室及園林景觀綠化苗木大量應(yīng)用。白及一般生于海拔110——3200m喜溫和、稍陰濕的環(huán)境，耐陰性強(qiáng)，忌強(qiáng)光直射，需排水良好、富含腐殖質(zhì)的砂質(zhì)土壤，稍耐寒，冬季可在地下越冬。白及能產(chǎn)生大量的種子(每個(gè)蒴果10～30萬(wàn)粒)，但這些種子沒(méi)有胚乳，自然萌發(fā)率極低，生殖困難，但白及胚的薄壁細(xì)對(duì)種源消耗大，不宜推廣且難以滿足市場(chǎng)需求。萬(wàn)別。二、白及組織培育技術(shù)路線4種途徑獲得白及再生4種方式及原球莖帶有大量共生菌，組培過(guò)程中簡(jiǎn)潔消滅污染。完整的技術(shù)路線如下：經(jīng)過(guò)試驗(yàn)優(yōu)化后的技術(shù)路線為：白及→種子〔采集優(yōu)質(zhì)種源蒴果〕→外表消〔分株、擴(kuò)繁〕→壯苗生根〔煉苗〕→完整小植株→20-25天→移栽→白及三、試驗(yàn)預(yù)備：種子：白及的蒴果中有大量的種子，并且蒴果的消毒較便利，污染率低。另〔Bletillastr(aun)Reich采89822周。器材：高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、電子分析天平〔精度為千分之一〕、電磁爐、接種消毒器、高效能培育架、醫(yī)用小推車、日光燈、加濕器、紫外燈、晾瓶架、酸度計(jì)〔或PH試紙〕、試管、容量瓶、膠頭滴管、、燒杯、試管架、量筒、玻璃漏斗、移液管、三角瓶、廣口培育瓶、稱量紙、毛刷、洗耳球、塑料筐、無(wú)菌脫脂棉、無(wú)菌濾紙、酒精燈、噴壺、橡膠手套、醫(yī)用白大褂、紫外燈、鑷子、接種針、剪刀、解剖刀、器械架、接種托盤(pán)等。通用器械100mL250mL、500mL、1000mL。②烘箱：用來(lái)烘干器械。③恒溫水?。河脕?lái)溶解瓊脂等物質(zhì)。④玻璃攪拌棒：用來(lái)配制培育基。⑤洗耳球：用來(lái)關(guān)心吸取、轉(zhuǎn)移少量液體。⑥冰箱：用來(lái)貯存化學(xué)藥劑、植物材料等。⑦牛角勺：用來(lái)轉(zhuǎn)移化學(xué)藥劑。⑧玻璃漏斗：用來(lái)過(guò)濾溶液。⑨剪刀：用來(lái)修剪外植體或剪切嫩莖。⑩器械架：在無(wú)菌操作期間用來(lái)放置滅菌的器械。各種盛具①搪瓷淺盤(pán)：用來(lái)承載各種器械容器。②塑料盆：用于清洗培育容器。③鐵絲筐：用來(lái)盛放滅菌容器等物品。10L、20L。⑤塑料桶：用來(lái)存放洗滌溶液、廢棄溶液。⑥各種規(guī)格的磨砂玻璃瓶：用來(lái)盛放培育母液，以及各種植物生長(zhǎng)物質(zhì)。計(jì)量器械25mL、50mL、100mL、500mL、1000mL。50mL、100mL、500mL、1000mL。1mL、5mL、10mL。1mL5mL、10mL(或可用移液器替換)。⑤移液管架：用來(lái)放置、固定移液管。pH。⑦藥物天平：用來(lái)稱取配制培育基的藥品。⑧分析天平：用來(lái)稱取少量有化學(xué)試劑，進(jìn)展化學(xué)分析。滅菌器械①磨砂口玻璃瓶：用來(lái)對(duì)植物材料進(jìn)展外表滅菌。②酒精燈：用來(lái)進(jìn)展接種器材的外表滅菌。③細(xì)菌過(guò)濾器：用來(lái)過(guò)濾不能進(jìn)展高溫滅菌的試劑溶液。④無(wú)菌濾紙：用來(lái)吸取器材、植物材料外表的水分。⑤無(wú)菌脫脂棉：用來(lái)進(jìn)展器械、植物材料外表的滅菌處理。⑥高壓滅菌鍋：對(duì)培育基、接種器材進(jìn)展滅菌處理。接種器械①超凈工作臺(tái)：用來(lái)過(guò)濾通過(guò)接種工作臺(tái)面的空氣，以便進(jìn)展無(wú)菌操作。②小型噴霧器：裝載滅菌藥液，來(lái)給超凈工作臺(tái)等處噴霧滅菌。③鈍頭鑷子：在接種操作、繼代培育時(shí)移取植物材料。④尖頭鑷子：用來(lái)分別植物材料。⑤解剖刀：用來(lái)切割植物材料。⑥接種針：用來(lái)轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)、愈傷組織。培育器械2cm×15cm3cm×15cm。9cm、12cm。③錐形瓶：即三角燒瓶，主要作為培育器材，常用的規(guī)格有50mL、100mL。④鋁箔：用于培育容器封口。⑤橡皮筋：用來(lái)束緊培育容器的封口材料。⑥空調(diào)：用來(lái)調(diào)整操作間、培育室的溫度。藥劑：硝酸銨〔NH4NO3〕、硝酸鉀〔KNO3〕、氯化鈣〔CaCl2〕、硫酸硫酸錳〔MnSO4?5H2O〕、硫酸鋅〔ZnSO4?7H2O〕、鉬酸鈉〔Na2MoO4〕、硫酸銅〔CuSO4?5H2O〕、氯化鈷〔CoCl2?6H2O〕、乙二胺四乙酸二鈉〔Na2EDTA?2H2O〕、硫酸亞鐵〔FeSO4?7H2O〕、甘氨酸〔C2H5NO2〕、肌、煙酸〔VB5〕、鹽酸吡哆醇〔VB6〕、鹽酸硫胺素〔VB1〕、6-芐基腺嘌呤〔6-BA〕、萘乙酸〔NAA〕、腺嘌呤〔AD〕、赤霉酸〔CA3〕、蔗糖、瓊脂外植體滅菌誘導(dǎo)培育、無(wú)菌材料生殖、繼代擴(kuò)繁、單株生根、出瓶煉苗、移栽等包括：1緩沖間放置拖鞋、工作服、工作帽等。溫度、濕度、光照的各種設(shè)備。四、試驗(yàn)流程預(yù)備階段所需的消毒劑和各類母液，確定不同培育階段培育基配方。MS培育基與其它培育基的根本成分相比，硝酸鹽、鉀和銨的含量高，有較利。MS固體培育基可用來(lái)誘導(dǎo)愈傷組織，或用于胚、莖段、莖尖及花藥培育，MS可分為以下幾步：制備母液5種主要成分：10倍的用量，分別稱出并進(jìn)展溶解，以后按挨次混在一起，1L，此即大量元素母液。1001000倍的1001000倍，逐次溶解并混在一起，制成微量元素母液。和乙二胺四乙酸二1L1L5mL。需的濃度(0.1～1.0mg/mL)，用時(shí)按培育基配方中要求的量分別參加。1001000倍配制母液，配制時(shí)要單個(gè)稱量，分別貯藏。配制植物生長(zhǎng)素時(shí)，應(yīng)先按要求濃度稱好藥品，置于小燒杯或容量瓶中，用1mol/L氫氧化鈉溶解，再加蒸餾水稀釋至所需濃度。配制細(xì)胞分裂素時(shí)，1mol/L的鹽酸溶解，然后加蒸餾水至所需量。以上各種混合液(母液)或單獨(dú)配制藥品，均應(yīng)放入冰箱中保存，以免變質(zhì)、長(zhǎng)霉。至于蔗糖、瓊脂等，可按配方中要求，隨稱隨用。配制培育基的具體操作同一燒杯中，并用粗天平稱取蔗糖、瓊脂放在一邊備用。解呈透亮狀，再停頓加熱。L，攪拌均勻，配成培育基。后攪拌均勻，并用PH試紙〔或酸度計(jì)〕測(cè)其PH值，直到將培育基的PH值調(diào)5.8-6.0。20-25mL。內(nèi)容挨次，按項(xiàng)按量稱取，就不會(huì)消滅過(guò)失。培育基的滅菌與保存12215—20min。期間需排出滅菌鍋內(nèi)的冷空氣，具體操作方法為：通電后，待壓力上升到0.05MPa時(shí)，翻開(kāi)放氣閥，放出冷空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。滅菌后的組培瓶取出后整齊擺放在室內(nèi)，2h后即可冷卻凝固成白色半透亮菌后兩周內(nèi)用完。外植體選擇與消毒種子。試驗(yàn)選取白及種植基地的白及蒴果備用,89月上旬。10min再用清水沖刷洗凈，70%30s0.1%10-15min，用無(wú)菌3-4次，在濾紙上吸干水分，從果實(shí)中部撥開(kāi)，快速接種到培育基上。無(wú)MS+6-BA0.05mg/L+NAA0.1-0.5mg/L3%、、PH5.820-2518-20℃，暗培育7d覺(jué)察染菌需準(zhǔn)時(shí)清理。4℃左右可長(zhǎng)期保存。叢生芽誘導(dǎo)MS+6-BA0.1mg/L3%、0.7%、PH5.8。生根壯苗培育不加，提高生長(zhǎng)素濃度，促進(jìn)小苗生根，提高其強(qiáng)健度。2cm20-300.7%PH5.8〔MS+NAA0.—0.5mg/20.7%PH5.8，在本試驗(yàn)中不承受?！?〕煉苗移栽3-5cm高時(shí),即可出瓶。一般來(lái)說(shuō)，春季氣,有利試管苗適應(yīng)自然環(huán)境,最宜移栽。為使試管苗移栽后適應(yīng)自然環(huán)3-7d，以提高小苗的抗性和適2個(gè)月，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)1000倍生根劑溶液蘸根，植入土壤基質(zhì)中。深度不宜過(guò)深，以入土3-5cm深為宜，使根部自然伸展，輕輕壓實(shí)，株行距5*5cm。栽好后，澆足定根水，置于陰涼處。留意(80%-90%)20-25℃。當(dāng)移栽小苗葉開(kāi)放、苗根伸長(zhǎng)后,每月用MS大量元素1000倍稀釋液或花寶一1000倍稀釋液噴施追肥，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育。待小苗成活后，再移栽到大田。馴3-5個(gè)月后等外界氣溫漸漸上升,有利組培苗適應(yīng)自然環(huán)境，最宜移栽。因白及喜潮濕，怕積水，積水會(huì)使根莖腐爛，葉片脫落而死。因此,移栽過(guò)10%+20%等90%以上。另外,苔蘚〔水苔〕的保濕性和透氣性良好,可作為移栽基質(zhì)，將其平鋪于白及幼苗根部保濕。關(guān)鍵點(diǎn)：1、溫度10℃以上，30℃以下，都能正常生長(zhǎng)，20℃左右最為抱負(fù)。2、濕度35天可以噴霧一次，每次噴水不要過(guò)多。3、照顧強(qiáng)度3000-4000lux，而外界環(huán)境一般在50000lux以上，中午時(shí)甚至接