液相層析分離法

液相層析分離法第一頁，共八十五頁，2022年，8月28日按流動相分類第二頁，共八十五頁，2022年，8月28日按原理分類紙色層：濾紙吸附的水作固定相，有機溶劑作流動相。薄層色譜：把吸附劑粉末舖成薄層作為固定相。本章僅討論紙色層、薄層色譜法。第三頁，共八十五頁，2022年，8月28日第一節(jié)、紙色層微量操作技術(shù)，簡、分離效率高、但分離速度慢１、基本原理紙色層－紙上萃取色譜，它和萃取一樣，它也是根據(jù)不同物質(zhì)在兩相間的分配比不同而進行分離的（相當于逆流萃取）。第四頁，共八十五頁，2022年，8月28日1.層析缸2.濾紙3.原點4.展開劑5.前沿6.7.斑點12345673第五頁，共八十五頁，2022年，8月28日xyRf的計算2.比移值Rf組份分離后,它們在濾紙上的位置用比移值Rf表示.[定義]:xy第六頁，共八十五頁，2022年，8月28日Rf的大小取決于溶質(zhì)在二相間的分配系數(shù)及濾紙的性質(zhì).不同的組分具有不同的分配系數(shù),因而也就有不同的Rf.這就是定性的依據(jù).3.影響Rf的因素(1).欲分離物的本性:物質(zhì)在兩相的分配系數(shù),決定了它的Rf大小;第七頁，共八十五頁，2022年，8月28日(2).層析溶劑:同一組分在不同溶劑中Rf不同。通常應(yīng)選這樣的層析劑，使溶質(zhì)的Rf在0.050.85之間,不同組分的Rf差值>0.05.(3).pH:影響它們的存在狀態(tài)(4).濾紙:質(zhì)地均一、厚薄適當、具有一定機械強度、不含雜質(zhì)第八頁，共八十五頁，2022年，8月28日(5).溫度:在層析缸中用紅外燈照射。溫度會影響溶質(zhì)的分配系數(shù)及流動相的擴散速度。層析操作應(yīng)在恒溫下進行，溫度不超過±0.5oC(6).展開方式:展開方式不同,Rf也不同。下行法的Rf最大，上行法的Rf較小，環(huán)行法的Rf也不大。第九頁，共八十五頁，2022年，8月28日操作技術(shù)(1).濾紙(擔體)Ａ．濾紙的選擇

a.要求濾紙質(zhì)地均勻、平整無折痕邊緣整齊

b.要求濾紙的纖維松緊適宜c.濾紙的雜質(zhì)含量少

第十頁，共八十五頁，2022年，8月28日層析濾紙的性能與規(guī)格型號標重g/m2厚度(mm)吸水性(30min內(nèi)水上升mm)灰分g/m2性能1900.17150~1200.08快速2900.16120~900.08中速3900.1590~600.08慢速41800,34151~1210.08快速51800.32120~900.08中速61800.3090~600.08慢速第十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日濾紙的處理以0.1~0.4mol/LHCl(或2mol/LHAc)浸泡數(shù)小時,除去無機雜質(zhì)后,取出用蒸餾水洗凈,再將濾紙放在丙酮-乙醇(1:1)中浸泡一周時間,除去有機雜質(zhì),再取出風干備用.第十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日固定相紙層析－以吸著在纖維素上的水作固定相。反相紙層析－用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇等作固定相。若分離芳香油等非極性物，以石蠟油、硅油作固定相。(2).試樣A.試樣的溶解盡量避免用水。一般用乙醇、丙酮、氯仿等，最好采用與展開劑極性相似的溶劑。液體樣，直接點樣。第十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日Ｂ．點樣方法a先用鉛筆在距紙條一端2~3cm處劃一條直線（起始線）并在線上隔一定距離劃一“x”號表示點樣位置；見下示意圖：第十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日b.點樣工具：微量注射器、毛細滴管（Φ＝0.5mm)；c.點樣方法：用點樣工具吸取試液輕輕與“x”號接觸，使點樣的斑點直徑為0.2~0.5cm,每次點樣2~20μl于濾紙上，以冷風吹干；d.干后，將紙的兩邊用線縫好，以圓筒形式置于層析缸中展開。第十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日C.展開展開劑展開劑的選擇：欲分離物在兩相中的溶解度；展開劑的極性展開劑與欲分離物間應(yīng)無化學反應(yīng)欲分離物在展開劑中的分配系數(shù)最好不受溫度的影響欲分離物在兩相間的分配平衡瞬間達到第十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日展開劑

水飽和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、氯仿、苯、丁酮、丙酮、有機酸、有機堿，有時也加入一定比例的無機酸、無機堿、甲醇、乙醇等b.展層方法：展層前，層析缸與已點樣濾紙必須予先經(jīng)水蒸汽、溶劑蒸氣飽和。方法：將溶劑和水置于分液漏斗中充分振蕩，分層后，將水層放入小燒杯內(nèi)，置于層析缸中平衡一段時間，使濾紙吸飽蒸汽，然后移去小燒杯，將溶劑倒入溶劑槽中，立即將點好樣的濾紙的一端浸入溶劑槽內(nèi)展層。第十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日上行法

將點有試樣的濾紙條的下端浸入溶劑（但不能浸沒點樣處）上端固定在層析缸的上部，保持垂直，將缸密閉，使溶劑沿下端上升而展層。待溶液上升到距離紙上端3~4cm時，將濾紙取出，用鉛筆在溶劑前沿處畫線作記號（見右圖）第十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日對于Rf

十分接近的物質(zhì)可采取連續(xù)揮發(fā)的色譜法紙條的上端暴露在層析缸外，以便令上升的溶劑揮發(fā)；b.只要保持紙條下端與溶劑面接觸，溶劑便能不斷地上升而揮發(fā)，展層過程就自動連續(xù)地進行；第十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日c.若溶劑沸點＞100oC，則可在紙條暴露部分用紅外燈烘烤，促使溶劑揮發(fā)；d.該法不能測量前沿，但可達分離的目的。b.下行法溶劑自紙的上端向下降（借助于重力的作用），具有分離速度快及連續(xù)揮發(fā)色譜的優(yōu)點。第二十頁，共八十五頁，2022年，8月28日

玻片玻璃棒原點玻皿剪成鋸齒狀，便于溶劑滴下第二十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日c.環(huán)行法又叫徑向色譜法。這是一種既快又方便的方法。取一張圓形濾紙在直徑的兩邊各畫兩根平行線，用剪刀沿這兩根線剪至圓心處，在紙的中央滴上試液，干后，將濾紙夾在兩個大小相同培養(yǎng)皿之間，使剪開的紙條的尾端浸入流動相。第二十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日d.雙向展開法有時用一種溶劑不能將樣品中組份分開時，可以試用雙向展開法。該法是用正方形或長方形濾紙，在紙的一角上點樣，先用一種展開劑朝一個方向展開，展開完畢，待溶劑揮發(fā)后，再用另一種展開劑朝與原來垂直的方向進行第二次展層。

若前后二次展開劑選擇適當，可使各種組份完全分離。例如，氨基酸的分離可用此法。雙向展開法也可以二次使用同一種展開劑展層。第二十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日D.顯色展層后，將濾紙從層析缸中取出，用鉛筆在溶劑前沿作記號a.有色物：直接觀察各個色斑無色物：物理法顯色：用紫外燈照，觀察有無吸收或發(fā)出各種不同顏色的熒光斑點，并用鉛筆畫下斑點的位置及大小。第二十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日Ｅ.分析定性：各物質(zhì)有各物質(zhì)的Rf。為了查明未知物的組成，最好是在同樣條件下與已知的純物質(zhì)做對照實驗化學法顯色：利用各種物質(zhì)的特性反應(yīng)，噴灑適當?shù)娘@色劑，若被分離的物質(zhì)含有羧酸，可噴酸堿指示劑溴甲酚綠，當斑點呈黃色，說明羧酸確實存在；若被分離的物質(zhì)含有氨基酸，則可噴茚三酮，多數(shù)氨基酸呈紫色，個別氨基酸呈黃色。其它化合物所用顯色劑可從手冊里查閱。第二十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日xyRf

的計算:Rf=x/y第二十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日x1x2yRf的計算:Rf1=x1/yRf2=x2/y這樣每一個斑點用兩個Rf來描述第二十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日定量剪洗法：將斑點剪下，用適當?shù)娜軇┫疵?，然后用各種儀器方法（如紅外、紫外、原子吸收、發(fā)射光譜），也可將斑點剪下灰化，再用適當?shù)娜軇┤芙?，測之。比較法：經(jīng)紙色譜將各種組份分開后，可在相同條件下，制得標準系列圖譜，與待測斑點顏色、面積進行比較，確定其可能的含量。反射散射光譜法：

第二十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日

物質(zhì)受光照射時，通常發(fā)生兩種不同的反射現(xiàn)象（即鏡面反射與散射）。鏡面反射同鏡子反射一樣，光線不被物質(zhì)吸收，反射角等于入射角；散射則必須滿足Kubelka-Munk方程式：

其中，R=IR/I0，I0、IR分別為入射光與散射光強度，S為反射系數(shù)，K‘’為線性吸收系數(shù)，

為被測物的摩爾吸光系數(shù)，C為被測物的物質(zhì)的量濃度，K‘=/S。儀器上顯示的反射散射吸收值為AR=lgI0/IR=lg1/R。由上可建立方程組：

第二十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日

（2）式代入（1）式，得：（3）式即為反射散射吸收光譜測量值F與C的定量關(guān)系；若以F為縱坐標、C為橫坐標，則可得一截踞為2的直線，斜率為K。第三十頁，共八十五頁，2022年，8月28日圖1.反射散射附件的光路示意圖M:反射鏡;S:樣品:PC:光電管

1234sMPCM1－長頸漏斗，2－濾紙，3－墊板，4－抽濾瓶第三十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日F.應(yīng)用例１．氨基酸的分離（固定相為水）流動相分離情況正丁醇：2mol/LHAc=1:1酪氨酸、二碘酪氨酸用水飽和的芐醇亮氨酸、異亮氨酸叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水＝16:16:0.1:3.9亮氨酸、異亮氨酸第三十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動相分離情況２－丁醇：醋酸：水＝32:2:22甲狀腺素、二碘酪氨酸流動相１：丁醇：HAc:H2O=4:1:5流動相２：M－甲酚－酚：pH=9.33硼酸緩沖液=1:1亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、門冬氨酸、谷氨酰酸、門冬酰氨、精氨酸、組氨酸、賴氨酸、胱氨酸等第三十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日例2.糖的分離(固定相為水)流動相分離情況醋酸乙脂:吡啶:水=2:1:1木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖丁醇:吡啶:水=45:25:40乳糖、半乳糖、葡萄糖丁醇:乙醇:水:NH3=40:10:49:1尿中葡萄糖丁醇:乙醇:水=10:1:2蜜二糖、果糖、葡萄糖、第三十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動相分離情況流動相１：酚流動相２：丁醇:醋酸:水=1:1:1鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖醛酸丁醇:乙醇:水=4:1:5低聚糖75%2－丙醇：醋酸＝9:1直鏈淀粉丁醇:吡啶:水：苯=50:30:3:45棉子糖第三十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日例３．脂肪酸的分離（固定相為水）流動相分離情況95%乙醇：濃氨水＝100:1同系的直鏈脂肪酸正己醇：1.5mol/L氨水＝1:1烷氧基酸流動相1:乙醇：濃氨水:H2O=80:5:15流動相2：乙二醇乙醚：桉樹腦：88%甲酸=5:5:2草酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、羥基醋酸、順丁烯二酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、烏頭酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸第三十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動相分離情況丁醇：醋酸：水＝4:1:5甲胺、乙胺、丙胺、丁胺、戊胺、苯芐胺甲醇：戊醇：苯：水＝4:2:2:2－萘胺、間苯二胺、對苯二胺、苯胺丁醇：1.5mol/L氨水＝1:1C7以下的脂肪酸例4.胺類的分離（固定相為水）第三十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日例5.醇、酚的分離（固定相為水）流動相分離情況丁醇：5%NaHCO3＝1:1甲醇、乙醇、異丙醇、異丁醇、異戊醇、辛醇己烷飽和甲醇乙醇、異丙醇、丙醇、異丁醇、正丁醇丁醇：乙醇：水＝4:1.1:1.9乙二醇、丙三醇、甘露糖醇、山梨醇、肌醇第三十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動相分離情況丁醇：醋酸：水＝4:1:5苯甲酸、兒茶酚、肉桂酸、鄰香豆酸、沒食子酸、間羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸、5-甲基苯二酚、間苯三酚、2,4,6－三羥基苯甲酸、2,4－二羥基苯甲酸、1,2,3－苯三酚、對苯二酚、間苯二酚、β－羥基苯甲酸、鄰羥基苯甲酸、香草酸第三十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日例６核酸降解物（核苷酸、嘌呤、嘧啶堿基）的分離（固定相為水）流動相分離情況飽和(NH4)2SO4：水：2－丙醇＝79:10:2鳥嘌呤、腺嘌呤、胞苷正丁醇：水：乙二醇：醋酸＝5:1:5:2AMP、ADP、ATP正丁醇：二苷酸：0.1mol/LHCl＝4:1:1黃嘌呤、鳥嘌呤正丁醇：二苷酸：水＝4:1:1腺嘌呤、次黃嘌呤第四十頁，共八十五頁，2022年，8月28日例７.其它類的分離（固定相為水）流動相分離情況正丁醇：濃氨水：水＝4:1:5磺胺嘧啶、磺胺噻睉、Sulfamerzine、p,p’-sulfonyldianiline正丁醇：醋酸：水＝4:1:5對胺基苯甲酸、維生素C、N－甲基－菸酰胺、菸堿酰胺、菸酸、潘妥寧、泛酸、VB6、VB1VB甲苯：石油醚：乙醇：水＝200:100:30:70雌酮、雌二酮、雌三酮、馬烯雌酮、脫氫皮質(zhì)甾酮酸、孕甾酮、順式睪丸甾酮第四十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動相分離情況丁醇：濃鹽酸＝98:2阿托品、莨菪胺、后馬托品、莨菪堿、、d－古苛堿、d－假古苛堿、托把柯卡因、金雀花堿、高金雀花堿、嗎啡、可待因、蒂巴因、海洛因、那可叮、可它寧、北美黃蓮堿、馬錢子堿、二甲馬錢子堿、奎嚀、辛可寧、辛可寧啶、毛果堿、異毛果堿、毛果心堿、菸堿、吡啶、膽堿、乙酰膽堿、波爾啶堿、檳榔堿第四十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日例8．無機應(yīng)用（固定相為水）流動相分離情況12mol/LHCl：甲醇：丁醇：甲基異丁酮＝55:35:5:5K+、Rb+

、Cs+乙醇：水＝80:20Li+

、Na+

、K+10%HCl的水飽和丁醇Zn2+－Ga3+－In3+

－Al3+苯酚：甲醇：HCl＝5:3:2Al3+

－Ga3+

－In3+

－Tl3+第四十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動相分離情況丁醇：HAc：乙酸乙脂：水＝10:2:1:7從Fe、Al、Ti中分離出Ga乙酸乙脂：水：HNO3＝85:10:5從稀土、Zr、Ti、Th中分離出Sc乙醚：濃HNO3＝87.5:12.5Hf－Zr4mol/LHCl飽和丁醇UO2－Th第四十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日例9．生物學應(yīng)用FeCuCoNiNiNiNiTiMo黑毛紅毛黃毛白毛兔毛的色譜圖毛發(fā)是這樣,皮膚是否是這樣??取不同顏色兔毛(300~500mg),干法灰化,溶于稀HCl中,用丙酮:丁醇:HCl=10:4:2,展開后,顯色第四十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日用紙色譜法分離A、B兩種物質(zhì)，在某條件下兩物質(zhì)的比移值Rf分別為0.36、0.40。設(shè)A、B兩物質(zhì)斑點的直徑分別為0.2cm,0.4cm,當展開劑的前沿達到10cm時，A、B能否完全分離?設(shè)A、B兩物質(zhì)色譜斑點的中心距原點分別為x1,x2cm,則x1/10=0.36x2/10=0.40x2-x1=(0.40-0.36)10=0.4(cm)欲分離兩物質(zhì)，兩斑點中心距離至少為(0.20+0.40)/2=0.30cm,而實際兩斑點中心距離為0.4cm,故在此條件下AB兩物質(zhì)可得到完全分離。第四十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日用紙色譜分離混合物中物質(zhì)A和B，已知兩者的比移值分別為0.50和0.60，問欲使層析后斑點顯著分開，斑點間至少間隔1cm，(斑點直徑都是1cm)問濾紙應(yīng)截取多長？解：設(shè)前沿為l，原點到A、B斑點中心距離分別為a、b，兩斑點間至少間隔1cm，那么兩斑點中心相距為2.0cm，則可列出：原點應(yīng)距濾紙下端4cm，前沿應(yīng)距濾紙上端2-3cm，應(yīng)截取濾紙長20+4+2=26cm,濾紙條應(yīng)截取26-27cm長。第四十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日用紙色譜法分離A、B兩種物質(zhì)，在一定條件下A、B兩物質(zhì)的比移值分別為0.35,0.45，設(shè)A、B兩物質(zhì)色譜斑點的直徑分別為0.50cm和0.80cm,要求展開劑前沿至少達到多少厘米時，A和B才能完全分離?設(shè)x1,x2分別為A﹑B兩物質(zhì)斑點距原點的距離：則x1/y=0.35x2/y=0.45

x2-x1=0.40+0.25=0.65又x2-x1=(0.45-0.35)y=0.65∴y=6.5(cm)第四十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日紙色譜法分離混合離子,若混合離子極性大小順序為A>B>C,用弱極性有機溶劑展開后其Rf值大小順序為______________________。C,B,A第四十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日第二節(jié)、薄層色譜法原理和特點[原理]:當展開劑從薄板上固定相的空隙中通過時,由于各組分的K的不同和足夠多次的分配.[特點]:裝置簡、操作方便展開時間短樣品負荷量大、斑點擴散少第五十頁，共八十五頁，2022年，8月28日[缺點］：Rf值的重復性差[克服辦法］：標樣和試樣在同一塊板上展開●同一張色譜圖可用不同的試劑顯斑，也可用濃硫酸等強氧化劑或在400~500ｏＣ加熱碳化檢出。●適用面廣，可用不同吸附劑或展開劑。第五十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日吸附劑（固定相）決定吸附性能的因素：吸附劑的化學組成、活性、表面積［要求］：合適的吸附力與展開劑、被吸附物質(zhì)均不起化學反應(yīng)粒度細小而且均勻（范氏方程，減少渦流擴散項）第五十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日●對不同的組分有不同的吸附量,因而能較好的把試樣中各組分分離?！裨谒械娜軇┖拖疵搫┲胁蝗芙?。（１）氧化鋁層析用的商品氧化鋁根據(jù)制備的酸度不同可分為如下三種類型：a酸性氧化鋁：pH=3.5～4.5,適用于分離酸性化合物，如某些酸性色素、二羧酸氨基酸、酸性多肽以及對酸性穩(wěn)定的中性物質(zhì)。b中性氧化鋁：pH=6.9～7.1,應(yīng)用較廣泛，適用分離生物堿、揮發(fā)油、萜類、甾體、蒽醌以及在酸堿中不穩(wěn)定的酯、內(nèi)酯等化合物?？捎糜诜蛛x酸性或堿性氧化鋁分離的物質(zhì)．第五十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日C堿性氧化鋁:pH=9～10，酸性較強的化合物在堿性氧化鋁上吸附的很牢（所以，酸性物質(zhì)分離不好），故通常用于分離碳氫化合物、生物堿類和對堿性物質(zhì)比較穩(wěn)定的中性物質(zhì)、堿性物質(zhì)。一般薄板要求把氧化鋁活化成Ⅱ~Ⅲ級使用．

氧化鋁的活性與含水量密切相關(guān)（含一定量的水份時，吸附劑表面的吸附中心會被水分子占據(jù)）第五十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日活性ⅠⅡⅢⅣⅤ含水量（％）０３６１０１５故加熱驅(qū)除水－活化；加入一定量的水－失活Δ100~150oC,除去Al2O3中與羥基結(jié)合的部分水份，使Al2O3有一定的活性Δ150~300oC，Al2O3活性達Ⅱ～Ⅲ級Δ300~400oC，Al2O3活性達Ⅰ～Ⅱ級Δ>600oC，Al2O3進一步脫水并開始燒結(jié)第五十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日

由于脫水過程受到許多因素的影響，因此，每批生產(chǎn)的Al2O3，其表面積和表面孔穴結(jié)構(gòu)并不一致，活性也不相同。

Al2O3活性的測定：取20μL染料溶液（偶氮苯30mg、對－甲氧基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅、和對氨基偶氮苯各20mg，溶解于50mLCCl4中），加到薄板上，用CCl4展層，根據(jù)下表確定活性。第五十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日活性ⅡⅢⅣⅤRf,偶氮苯0.590.740.850.95Rf,對-甲氧基偶氮苯0.160.490.690.89Rf,蘇丹黃0.010.250.570.78Rf,蘇丹紅0.000.100.330.56Rf,偶氮苯0.000.030.080.19第五十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日市售的供薄層色譜用的Al2O3有:Al2O3－H氧化鋁中無粘合劑Al2O3－G氧化鋁中含煅石膏（一般5％煅石膏）［煅石膏CaSO4，作為粘合劑］Al2O3－HF254

氧化鋁中不含煅石膏，僅含熒光指示劑（在254nm下呈黃綠色熒光）Al2O3－GF254

氧化鋁中既含煅石膏又含熒光指示劑（在254nm下呈黃綠色熒光）上述商品可以直接調(diào)料涂敷（1份料，2份水調(diào)合）第五十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日（２）．硅膠（吸附性較Al2O3弱）

硅膠是微酸性吸附劑，且適用于酸性、中性物質(zhì)的分離（如有機酸、氨基酸、萜類、甾體）堿性物質(zhì)則能與硅膠作用（當用中性溶劑展層，堿性物質(zhì)有時停留在原點不動，或者得到拖尾的斑點，而不能很好的分離）活性ⅠⅡⅢⅣⅤ含水量（％）

05152535注:硅膠薄層的活化溫度不能高于200oC硅膠的吸附能力也跟其含水量有關(guān)，其吸附能力也分為五級．第五十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日硅膠的結(jié)構(gòu)為:第六十頁，共八十五頁，2022年，8月28日

硅膠活性的測定：稱取二甲黃、蘇丹紅、靛酚藍各40mg溶于100mL苯中，將此混合液滴加于薄層上，用石油醚展開10cm，混合物應(yīng)不動；如用苯展開，則應(yīng)分成三個斑點，其Rf值分別為：二甲黃0.58，蘇丹紅0.19，靛酚藍0.08（展層時間30~45min），則認為此硅膠合格。經(jīng)本法測定的活性與Al2O3活性Ⅱ~Ⅲ級相當。第六十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日

薄層用商品硅膠有：硅膠H（不含粘結(jié)劑）、硅膠G（含粘結(jié)劑煅石膏）、硅膠HF254（含熒光物質(zhì)的硅膠）硅膠GF254（含有煅石膏和熒光劑）

此外，硅藻土、硅酸鹽、雜多酸鹽、聚酰胺、纖維素也可用作吸附劑。第六十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日(3).選擇吸附劑的規(guī)律：極性物質(zhì)被極性表面的吸附劑吸附；親水性的吸附劑適用于在非水溶液中吸附物質(zhì)；疏水性的吸附劑適用于在水溶液中吸附物質(zhì)．第六十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日３．展開劑（流動相）

展開劑的洗脫作用實質(zhì)是展開劑分子與欲分離組分竟爭占據(jù)表面吸附中心的過程。強極性展開劑分子占據(jù)吸附中心的能力強，所以，有強的洗脫作用，非極性展開劑分子占據(jù)吸附中心的能力弱，所以，有弱的洗脫作用。（1）常用展開劑的極性：石油醚<環(huán)己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烯<苯<甲苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<吡啶<酸第六十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日（2）欲分離組分的極性：飽和碳氫化合物系非極性化合物，不被吸附或吸附不牢。在其結(jié)構(gòu)中引進某些功能團則極性增加。取代基團極性越強，整個分子極性越強。常見功能團按其極性增加的順序是：烷烴<烯烴<醚類<硝基化合物<二甲胺<酯類<酮類<醛類<硫醇<胺類<酰胺<醇類<酚類<羧酸類第六十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日當有機分子的基本母核相同時，極性基團越多，整個分子的極性越大分子的雙鍵越多，吸附能力越強；共軛雙鍵越多，吸附能力越強分子中取代基團的空間排列對吸附性也有影響，如同一母核中羥基處于能形成內(nèi)氫鍵位置時，其吸附能力弱于不能形成內(nèi)氫鍵的化合物第六十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日（3）展開劑選擇的基本原則①吸附薄層第六十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日②分配薄層展開劑的選擇原則是根據(jù)物質(zhì)在展開劑的溶解度，或根據(jù)物質(zhì)在固定相和流動相中的分配系數(shù)不同而進行的．一般在選擇展開劑時可將試樣中各組分溶解度相差最大的溶劑組成展開劑．③離子交換薄層展開劑是根據(jù)被分離物質(zhì)是酸還是堿，是陰離子還是陽離子．④凝膠薄層常用于分離不同分子量的非離子化分子的混合物．常用的展開劑是水或鹽的水溶液、緩沖液等．第六十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日4.操作技術(shù)（1）制板玻璃板

a.平整、去油、去污（可用濃H2SO4-K2CrO7洗液浸洗，或丙酮擦洗，自來水洗凈后，烘干）b.玻璃板的尺寸根據(jù)自己的需要自由選擇，小的可用2.57.5cm的載玻片,大的可用2020cm的玻片。第六十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日涂布液取一定量的吸附劑放入研缽中，加入需要的水或適當?shù)娜軇心r間以調(diào)成稀糊狀為度，當濃度均一后，即成膠狀物，色澤潔白為最佳，立即傾入玻璃板上，用下述方法涂布。涂布方法:玻棒涂布第七十頁，共八十五頁，2022年，8月28日玻片刮涂傾斜涂布（利用流平性）-簡，但均勻性差涂布器活化薄板首先風干，否則濕板一下加熱到高溫，烘出的薄板很酥松，使用效果不好。氧化鋁G板在150~160oC,烘4小時(Ⅱ級左右)硅膠G板在110oC烘1小時薄板經(jīng)活化后，一定要儲藏在密閉的干燥器或烘箱中備用。第七十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日(2)點樣適當?shù)狞c樣量，集中的斑點是得到一個好的色譜的必要條件。如何才適當？不同的分離要求、不同的薄板（有厚有?。?、不同的吸附劑（性能不一），需要不同的點樣量。從下圖可見：點樣量少了，不易檢出；點樣量多了，易拖尾或擴散，影響分離效果。第七十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日0.12503000.50.30.1Rfg第七十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日

純物質(zhì)的鑒定，若又有高靈敏度的顯色劑，點樣量只需g或ng；若進行天然物或中間產(chǎn)物的分離時，點樣量需50g~幾百微克；若進行制備色譜，進樣量可達1mg。點樣時可用內(nèi)徑約1mm，管口平整的毛細管或微量吸管吸取試液后，輕輕接觸板面，分數(shù)次滴加樣品。第七十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日注意點：a.溶解試樣的溶劑最好是揮發(fā)性的b.點樣宜分幾次點加,即點一次后,用吹風機的冷風吹干,再點,再吹干,.......,反復,直到點完所要求的量c.點樣量的體積盡可能小些(2~10L左右)d.點樣最好是在密閉的室中或比較干燥的環(huán)境下完成,避免薄板吸水降低活性.第七十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日15cm2.5cm1.5cm溶劑前沿第七十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日（３）展層薄層的展開需在密閉的器皿中進行，密閉容器應(yīng)用展開溶劑予先飽和。展開方式和紙層析相同。但不加粘合劑的薄板只能作近水平式（與平面成20~10oC角）的上行或下行的展層而不能垂直展層。第七十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日把點好樣品的薄板浸入0.5cm深的適宜展開劑中，當展開劑移動至離起點約10~20cm處(約30min)，將薄板取出放平，用鉛筆