微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制技術(shù)

微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制技術(shù)第一頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量的重要性

培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。第二頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日主要內(nèi)容培養(yǎng)基制備、使用、貯存中的注意事項(xiàng)培養(yǎng)基質(zhì)量控制2010版藥典附錄實(shí)例（培養(yǎng)基質(zhì)量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響）CHP與USP的異同點(diǎn)同行的方法介紹新技術(shù)部分菌種在培養(yǎng)基上的典型特征

第三頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基制備過(guò)程中的注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基的水化培養(yǎng)基水化時(shí)不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長(zhǎng)；配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水,不能含有任何可能抑制或影響微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)；第四頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基制備過(guò)程中的注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基的溶解在培養(yǎng)基分裝滅菌前,各成分應(yīng)溶解均勻,使用電爐等設(shè)備煮沸培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)用小火加熱,并邊加熱邊攪拌,避免培養(yǎng)基焦化或爆沸溢出。第五頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基制備過(guò)程中的注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基的滅菌已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌濕熱滅菌必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間第六頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基制備過(guò)程中的注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基的pH微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長(zhǎng)繁殖或體現(xiàn)其生物特性。調(diào)整培養(yǎng)基的pH,應(yīng)用1mol/LNaOH或1mol/LHCl調(diào)整pH，一般滅菌前比最終pH高0.2～0.3。第七頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基制備過(guò)程中的注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基的保溫滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度,避免長(zhǎng)時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi),造成過(guò)度滅菌,影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分或選擇性效果。第八頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基使用過(guò)程中的注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基的接種平板在接種使用時(shí),表面必須無(wú)明顯潮濕水珠；對(duì)于保存的培養(yǎng)基,需待溫度回復(fù)至室溫后才可使用,并且使用前應(yīng)檢查；第九頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基貯存過(guò)程中的注意事項(xiàng)

干燥培養(yǎng)基應(yīng)遵循先入先出的原則；貯存于陰涼干燥處,避免強(qiáng)光直射；第十頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基貯存過(guò)程中的注意事項(xiàng)

已配制的培養(yǎng)基建議平板傾注后立即使用；在平板上標(biāo)上制備日期和/或有效期和名稱(chēng)；固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次；第十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)例三糖鐵培養(yǎng)基（TSI）未校正pH時(shí)，不同廠(chǎng)家的TSI培養(yǎng)基產(chǎn)硫化氫強(qiáng)度不一；校正pH7.5后，各培養(yǎng)基硫化氫反應(yīng)均有改善,不同廠(chǎng)家的TSI培養(yǎng)基產(chǎn)硫化氫強(qiáng)度仍不相同；第十二頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)例三糖鐵培養(yǎng)基（TSI）由于培養(yǎng)基pH太低,本身就是黃色,細(xì)菌生長(zhǎng)后下層仍為黃色,而斜面變?yōu)槌燃t色,易誤判斷為下層“變?yōu)辄S色”。由此定為發(fā)酵菌，造成誤判；第十三頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量控制（2010版藥典）

培養(yǎng)基適用性檢查計(jì)數(shù)培養(yǎng)基

控制菌檢查用培養(yǎng)基

第十四頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查對(duì)照培養(yǎng)基

系指按培養(yǎng)基處方特別制備、質(zhì)量?jī)?yōu)良的培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)基適用性檢查。由中國(guó)藥品生物制品檢定所研制及分發(fā)。第十五頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查

大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌

白色念珠菌黑曲霉

白色念珠菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基

酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

第十六頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查

結(jié)果判定

被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基≥70%第十七頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查

促生長(zhǎng)能力抑制能力指示能力

檢查項(xiàng)目第十八頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查增菌培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查：分別接種不大于100cfu的試驗(yàn)菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好。

第十九頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查固體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查：取試驗(yàn)菌各0.1ml（含菌數(shù)50～100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基生長(zhǎng)的菌落大小形態(tài)特征應(yīng)一致。第二十頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基抑制能力檢查：接種不少于100cfu的試驗(yàn)菌于被檢培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最長(zhǎng)時(shí)間下培養(yǎng)，試驗(yàn)菌應(yīng)不得生長(zhǎng)。

第二十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查固體培養(yǎng)基指示能力檢查：取試驗(yàn)菌各0.1ml（含菌數(shù)不大于100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及時(shí)間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的菌落形態(tài)、大小、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基一致。

第二十二頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查液體培養(yǎng)基指示能力檢查：分別接種不大于100cfu的試驗(yàn)菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌生長(zhǎng)情況、指示劑反應(yīng)等應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基一致。第二十三頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量控制（2010版藥典）

實(shí)驗(yàn)室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項(xiàng)目pH適用性檢查試驗(yàn)定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期

第二十四頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量控制（CHP與USP的異同點(diǎn)）計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查：

CHPUSP菌種的選擇大腸埃希菌銅綠假單胞菌結(jié)果判定比值大于70%1/2—2

培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基大豆消化酪素培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖培養(yǎng)基酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(YPD)

第二十五頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量控制（CHP與USP的異同點(diǎn)）控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查：CHP與USP方法基本一致，檢查用培養(yǎng)基不同。

第二十六頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

同行的方法介紹培養(yǎng)基質(zhì)量控制理化試驗(yàn)方法包括測(cè)定培養(yǎng)基的pH值和凝膠強(qiáng)度微生物學(xué)方法包括固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基第二十七頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

同行的方法介紹固體培養(yǎng)基定量質(zhì)控采用傾注平板法、涂布法、劃線(xiàn)法(半定量法)、改良的Miles－Misra

法等測(cè)定生長(zhǎng)情況；定性質(zhì)控評(píng)價(jià)目標(biāo)微生物非目標(biāo)微生物接種以后的生長(zhǎng)情況；第二十八頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日同行的方法介紹液體培養(yǎng)基采用定量稀釋法,用目標(biāo)菌和雜菌的混合菌株評(píng)價(jià)選擇性增菌培養(yǎng)基的選擇性；利用OD值評(píng)價(jià)液體培養(yǎng)基生長(zhǎng)率；第二十九頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日同行的方法介紹

分值計(jì)算質(zhì)量比較第三十頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日新技術(shù)介紹BioBall是一個(gè)很小的水溶性球狀物，包含了數(shù)量精確的微生物個(gè)體，它可以使微生物質(zhì)控中的定量控制達(dá)到非常高的精確度。第三十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日新技術(shù)介紹

BioBall目前可以提供超過(guò)25種菌株；可應(yīng)用于培養(yǎng)基質(zhì)控、方法驗(yàn)證等需要定量質(zhì)控的各個(gè)領(lǐng)域；第三十二頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日新技術(shù)介紹BioBallSingleShot提供1次精確接種量BioBallMultiShot-550提供10次精確接種量第三十三頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日新技術(shù)介紹BioBallSingleShot

每個(gè)BioBallSingleShot都含28至33cfu；標(biāo)準(zhǔn)誤差小于或等于3cfu；第三十四頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日新技術(shù)介紹BioBall與常規(guī)稀釋法相比的優(yōu)勢(shì)使用方便；精確的cfu數(shù)量；不同批次間cfu數(shù)量穩(wěn)定；減少了由于接種量的變化，造成的質(zhì)控失敗的風(fēng)險(xiǎn)；第三十五頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日BioBall第三十六頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日典型特征大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上典型特征第三十七頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日典型特征黑曲霉和白色念珠菌在玫瑰紅鈉瓊