微生物檢驗培養(yǎng)基質(zhì)量控制技術(shù)

微生物檢驗培養(yǎng)基質(zhì)量控制技術(shù)第一頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量的重要性

培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。第二頁，共四十三頁，2022年，8月28日主要內(nèi)容培養(yǎng)基制備、使用、貯存中的注意事項培養(yǎng)基質(zhì)量控制2010版藥典附錄實例（培養(yǎng)基質(zhì)量對實驗結(jié)果的影響）CHP與USP的異同點同行的方法介紹新技術(shù)部分菌種在培養(yǎng)基上的典型特征

第三頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基制備過程中的注意事項

培養(yǎng)基的水化培養(yǎng)基水化時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長；配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水,不能含有任何可能抑制或影響微生物生長的物質(zhì)；第四頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基制備過程中的注意事項

培養(yǎng)基的溶解在培養(yǎng)基分裝滅菌前,各成分應(yīng)溶解均勻,使用電爐等設(shè)備煮沸培養(yǎng)基時,應(yīng)用小火加熱,并邊加熱邊攪拌,避免培養(yǎng)基焦化或爆沸溢出。第五頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基制備過程中的注意事項

培養(yǎng)基的滅菌已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌濕熱滅菌必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時間第六頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基制備過程中的注意事項

培養(yǎng)基的pH微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。調(diào)整培養(yǎng)基的pH,應(yīng)用1mol/LNaOH或1mol/LHCl調(diào)整pH，一般滅菌前比最終pH高0.2～0.3。第七頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基制備過程中的注意事項

培養(yǎng)基的保溫滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內(nèi),造成過度滅菌,影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。第八頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基使用過程中的注意事項

培養(yǎng)基的接種平板在接種使用時,表面必須無明顯潮濕水珠；對于保存的培養(yǎng)基,需待溫度回復(fù)至室溫后才可使用,并且使用前應(yīng)檢查；第九頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基貯存過程中的注意事項

干燥培養(yǎng)基應(yīng)遵循先入先出的原則；貯存于陰涼干燥處,避免強光直射；第十頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基貯存過程中的注意事項

已配制的培養(yǎng)基建議平板傾注后立即使用；在平板上標(biāo)上制備日期和/或有效期和名稱；固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次；第十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日實例三糖鐵培養(yǎng)基（TSI）未校正pH時，不同廠家的TSI培養(yǎng)基產(chǎn)硫化氫強度不一；校正pH7.5后，各培養(yǎng)基硫化氫反應(yīng)均有改善,不同廠家的TSI培養(yǎng)基產(chǎn)硫化氫強度仍不相同；第十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日實例三糖鐵培養(yǎng)基（TSI）由于培養(yǎng)基pH太低,本身就是黃色,細(xì)菌生長后下層仍為黃色,而斜面變?yōu)槌燃t色,易誤判斷為下層“變?yōu)辄S色”。由此定為發(fā)酵菌，造成誤判；第十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量控制（2010版藥典）

培養(yǎng)基適用性檢查計數(shù)培養(yǎng)基

控制菌檢查用培養(yǎng)基

第十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日

計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查對照培養(yǎng)基

系指按培養(yǎng)基處方特別制備、質(zhì)量優(yōu)良的培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)基適用性檢查。由中國藥品生物制品檢定所研制及分發(fā)。第十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日

計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查

大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌

白色念珠菌黑曲霉

白色念珠菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基

酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

第十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日

計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查

結(jié)果判定

被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致

計數(shù)培養(yǎng)基≥70%第十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日

控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查

促生長能力抑制能力指示能力

檢查項目第十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查增菌培養(yǎng)基促生長能力檢查：分別接種不大于100cfu的試驗菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好。

第十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查固體培養(yǎng)基促生長能力檢查：取試驗菌各0.1ml（含菌數(shù)50～100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基生長的菌落大小形態(tài)特征應(yīng)一致。第二十頁，共四十三頁，2022年，8月28日控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基抑制能力檢查：接種不少于100cfu的試驗菌于被檢培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最長時間下培養(yǎng)，試驗菌應(yīng)不得生長。

第二十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查固體培養(yǎng)基指示能力檢查：取試驗菌各0.1ml（含菌數(shù)不大于100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及時間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基中試驗菌生長的菌落形態(tài)、大小、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。

第二十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查液體培養(yǎng)基指示能力檢查：分別接種不大于100cfu的試驗菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗菌生長情況、指示劑反應(yīng)等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。第二十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量控制（2010版藥典）

實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目pH適用性檢查試驗定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期

第二十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量控制（CHP與USP的異同點）計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查：

CHPUSP菌種的選擇大腸埃希菌銅綠假單胞菌結(jié)果判定比值大于70%1/2—2

培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基大豆消化酪素培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖培養(yǎng)基酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(YPD)

第二十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量控制（CHP與USP的異同點）控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查：CHP與USP方法基本一致，檢查用培養(yǎng)基不同。

第二十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日

同行的方法介紹培養(yǎng)基質(zhì)量控制理化試驗方法包括測定培養(yǎng)基的pH值和凝膠強度微生物學(xué)方法包括固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基第二十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日

同行的方法介紹固體培養(yǎng)基定量質(zhì)控采用傾注平板法、涂布法、劃線法(半定量法)、改良的Miles－Misra

法等測定生長情況；定性質(zhì)控評價目標(biāo)微生物非目標(biāo)微生物接種以后的生長情況；第二十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日同行的方法介紹液體培養(yǎng)基采用定量稀釋法,用目標(biāo)菌和雜菌的混合菌株評價選擇性增菌培養(yǎng)基的選擇性；利用OD值評價液體培養(yǎng)基生長率；第二十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日同行的方法介紹

分值計算質(zhì)量比較第三十頁，共四十三頁，2022年，8月28日新技術(shù)介紹BioBall是一個很小的水溶性球狀物，包含了數(shù)量精確的微生物個體，它可以使微生物質(zhì)控中的定量控制達(dá)到非常高的精確度。第三十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日新技術(shù)介紹

BioBall目前可以提供超過25種菌株；可應(yīng)用于培養(yǎng)基質(zhì)控、方法驗證等需要定量質(zhì)控的各個領(lǐng)域；第三十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日新技術(shù)介紹BioBallSingleShot提供1次精確接種量BioBallMultiShot-550提供10次精確接種量第三十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日新技術(shù)介紹BioBallSingleShot

每個BioBallSingleShot都含28至33cfu；標(biāo)準(zhǔn)誤差小于或等于3cfu；第三十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日新技術(shù)介紹BioBall與常規(guī)稀釋法相比的優(yōu)勢使用方便；精確的cfu數(shù)量；不同批次間cfu數(shù)量穩(wěn)定；減少了由于接種量的變化，造成的質(zhì)控失敗的風(fēng)險；第三十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日BioBall第三十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日典型特征大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上典型特征第三十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日典型特征黑曲霉和白色念珠菌在玫瑰紅鈉瓊