微生物控制控程度分類

微生物控制控程度分類1第一頁，共六十頁，2022年，8月28日第一節(jié)實驗動物微生物控制分級按微生物學控制標準或微生物凈化程度，分為五類：普通動物(Conventionalanimal,CVA)清潔動物(Cleananimal,CLA)無特定病原體動物(Specificpathogenfreeanimal,SPFA）悉生動物(Gnotobioticanimal,GNA)無菌動物(Germfreeanimal,GFA)2第二頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—普通動物普通動物（Conventionalanimal，CVA）定義：未經(jīng)嚴格微生物和寄生蟲控制，飼養(yǎng)在開放系統(tǒng)中，體內(nèi)外不攜帶有質(zhì)量標準規(guī)定的人畜共患病病原體和動物烈性傳染病病原體的動物，是在微生物學控制上要求最低的動物。常見有豚鼠，地鼠，兔，犬，猴，不設(shè)普通級大鼠，小鼠。飼養(yǎng)條件：開放系統(tǒng)來源：經(jīng)微生物學檢查不帶有上述病原體的動物，最初來源于無菌動物，悉生動物，SPF動物或普通動物刨宮產(chǎn)。3第三頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—普通動物微生物學特點

要求不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原和動物烈性傳染病病原。飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)于開放系統(tǒng)。但仍然對溫度，濕度，飼料，墊料，飲水，衛(wèi)生等有一定控制。生理學特點外觀健康，飲食排泄正常，無異常分泌物，無臨床癥狀，臟器無眼觀病灶。

4第四頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物質(zhì)量控制第五頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—普通動物普通實驗動物的應(yīng)用僅可作為生物醫(yī)學中教學示教之用作為某些科學研究為探索方法而從事的預試驗之用不可供科研、生產(chǎn)和檢定之用。6第六頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—清潔動物清潔動物（Cleananimal，CLA）定義：飼養(yǎng)在半屏障系統(tǒng)中，除普通級動物應(yīng)排除的病原外，不攜帶對動物危害大和對科學研究干擾大的實驗動物，又稱二級動物。常見有小鼠，大鼠，豚鼠，地鼠和兔。不設(shè)清潔級犬，猴標準。飼養(yǎng)條件：半屏障系統(tǒng)內(nèi)來源：SPF動物或無菌動物或悉生動物或普通級動物刨宮產(chǎn)。7第七頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—清潔動物微生物特點：

1、清潔級動物比普通級動物要求排除的微生物和寄生蟲多，但比SPF動物少。

2、清潔級動物除肉眼觀察無病外，尸體解剖時，主要臟器、組織無論是肉眼觀看還是病理組織切片均應(yīng)無病變。8第八頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物質(zhì)量控制第九頁，共六十頁，2022年，8月28日飼養(yǎng)管理：

1、清潔級動物飼養(yǎng)于溫濕度恒定的半屏障系統(tǒng)中。2、其所用的飼料、墊料、飲用水、籠器具等都經(jīng)過消毒滅菌處理。3、工作人員需換滅菌工作服、鞋、帽、口罩等進入動物室進行操作。實驗動物微生物控制分級—清潔動物10第十頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—清潔動物應(yīng)用：

1、清潔級動物是根據(jù)我國國情而設(shè)立的等級動物，它較普通級動物健康，又較SPF級動物易達到質(zhì)量標準。2、在動物實驗中可免受動物疾病的干擾，其敏感性與重復性亦較好。是目前我國主要使用的質(zhì)量控制等級的動物，已被廣泛地應(yīng)用于生命科學研究、新藥研制和安全評價等領(lǐng)域的動物實驗之中。11第十一頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—SPFA無特定病原體動物（Specificpathogenfreeanimal，SPFA）定義：指在屏障系統(tǒng)或隔離系統(tǒng)飼育的、經(jīng)檢測體內(nèi)外無質(zhì)量標準規(guī)定的特定病原微生物和寄生蟲存在，但可攜帶非特定的(未知的)微生物和寄生蟲的動物。常見有小鼠，大鼠，豚鼠，地鼠，兔，犬，猴等。飼養(yǎng)條件：屏障系統(tǒng)內(nèi)大規(guī)模生產(chǎn)/隔離器內(nèi)保種來源：1、將無菌動物轉(zhuǎn)移到屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng)繁殖2、無菌動物剖宮取胎后在隔離屏障設(shè)施中由SPF親代

撫養(yǎng)。12第十二頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—SPFA微生物特點：SPF動物除普通級、清潔級動物應(yīng)排除的病原體外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對研究實驗干擾大的病原。飼養(yǎng)管理：SPF動物必須飼養(yǎng)在溫度濕度恒定的空氣凈化的屏障系統(tǒng)中，實行嚴格的微生物控制。13第十三頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物質(zhì)量控制第十四頁，共六十頁，2022年，8月28日1、國際上公認SPF動物適用于所有科研實驗，是國際標準級別的實驗動物，實驗結(jié)果可靠。（1）避免病原體的隱性感染或潛伏感染對實驗結(jié)果的干擾。（2）避免某些條件性致病菌對實驗結(jié)果的干擾。2、各種疫苗生產(chǎn)所采用的動物應(yīng)為SPF動物。實驗動物微生物控制分級—SPFASPF動物的應(yīng)用銅綠假單胞桿菌15第十五頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—無菌動物無菌動物（Germfreeanimal，GFA）：指在隔離系統(tǒng)飼育的，經(jīng)檢測體內(nèi)外無可檢出的任何微生物和寄生蟲的實驗動物。常見有小鼠，大鼠，豚鼠，地鼠和兔。飼養(yǎng)條件：無菌隔離器內(nèi)來源：第一代通過無菌剖腹產(chǎn)術(shù)，人工哺乳獲得；以后通過無菌動物雌雄交配繁殖或無菌剖腹產(chǎn)術(shù)，保姆鼠代奶擴群。16第十六頁，共六十頁，2022年，8月28日無菌隔離器內(nèi)隔離室潔凈度達到100級17第十七頁，共六十頁，2022年，8月28日18第十八頁，共六十頁，2022年，8月28日人工培育理論基礎(chǔ)——胎盤對微生物具有屏障作用獲取方式：無菌條件下取仔，一切操作在無菌隔離器中進行無菌剖宮產(chǎn)，人工哺乳或無菌母鼠代乳實驗動物微生物控制分級—無菌動物19第十九頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—無菌動物無菌動物的特點微生物特點：1、在動物體內(nèi)外任何部位均檢不出任何活的微生物和寄生蟲。此微生物指病毒、立克次體、細菌（包括螺旋體、支原體）、真菌和原蟲。2、“無菌”是個相對的概念，只是根據(jù)現(xiàn)有的科學知識和檢驗方法在一定時期內(nèi)不能檢出病原體而已。隨著科學技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在認為是無菌的動物或許將來可以檢出病原體而不是無菌動物。20第二十頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—無菌動物無菌動物的特點體重增長速度較慢，性成熟稍晚，產(chǎn)仔少，成活率高，壽命延長等。項目兩種動物比較項目兩種動物比較壽命GF>CV性成熟期晚GF>CV早期增長GF<CV產(chǎn)仔數(shù)GF<CV攝食和飲水量GF≧CV仔畜成活率GF>CV21第二十一頁，共六十頁，2022年，8月28日無菌動物的應(yīng)用微生物學中的研究：微生物間的拮抗作用免疫學研究中的應(yīng)用：

無菌動物體內(nèi)既無抗原也無特異性抗體，處于一種“原始狀態(tài)”，很適合用于各種免疫功能的研究。腫瘤學研究，如：蘇鐵素老年病學研究：無菌動物壽命比普通動物長，說明微生物和機體老化有關(guān)22第二十二頁，共六十頁，2022年，8月28日無菌動物的應(yīng)用營養(yǎng)學的研究：無菌動物是研究營養(yǎng)的良好模型，很多營養(yǎng)成分是靠細菌產(chǎn)生的。如VB和VK是靠腸道細菌合成的，無菌動物體內(nèi)不能合成VB和VK，所以可以用來研究哪些細菌合成了哪些維生素。毒理學研究研究發(fā)現(xiàn)青霉素過敏是因為腸道菌代謝引起，而非青霉素本身。23第二十三頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—悉生動物悉生動物（Gnotobioticanimal，GNA）定義：又稱已知菌動物，在隔離系統(tǒng)飼育的，經(jīng)檢測其體內(nèi)外僅有經(jīng)人工有計劃接種已知微生物或寄生蟲的動物。飼養(yǎng)條件：無菌隔離器內(nèi)來源：人為將已知的微生物投給無菌動物，使其體內(nèi)帶有已知菌單菌動物雙菌動物多菌動物24第二十四頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物控制分級—悉生動物悉生動物的特點1、攜帶有已知菌2、與普通動物相比：無微生物刺激，淋巴系統(tǒng)發(fā)育不全，體液和細胞防御系統(tǒng)不如普通動物，易感染疾病3、與無菌動物相比：

悉生動物腸道內(nèi)存在細菌可以合成維生素，不會像無菌動物一樣發(fā)生維生素缺乏癥。抵抗力、生活力較強，易于飼養(yǎng)管理。4、飼養(yǎng)管理：必須飼養(yǎng)在溫濕度恒定的空氣凈化的隔離系統(tǒng)中，實行嚴格的微生物控制。25第二十五頁，共六十頁，2022年，8月28日人工培育借助哺乳動物胎盤的屏障作用，臨產(chǎn)前進行剖宮進化，消除各種寄生蟲和生命體，將幼崽飼育在無菌屏障系統(tǒng)中，經(jīng)人工哺乳或代乳培育出無菌動物，再向無菌動物有計劃接種一種或幾種已知菌。實驗動物微生物控制分級—悉生動物26第二十六頁，共六十頁，2022年，8月28日悉生動物的應(yīng)用悉生態(tài)或微生態(tài)學研究免疫學研究無菌動物抵抗力弱，而悉生動物抵抗力強抗體制備研究普通動物難制備較純抗體無菌動物免疫系統(tǒng)處于休眠期27第二十七頁，共六十頁，2022年，8月28日悉生動物的應(yīng)用克山病病因?qū)W研究缺乏硒引起or鐮刀狀黃曲霉菌引起？驗證：植入黃曲霉菌動物結(jié)果：動物癥狀與克山病病人癥狀相似硒不足加重病情其他方面研究人和動物骨髓移植，腫瘤治療及其病毒學，營養(yǎng)代謝，生理學，外科病人感染控制等28第二十八頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物微生物質(zhì)量控制第二十九頁，共六十頁，2022年，8月28日

不同微生物學等級的實驗動物比較項目GFSPFCV傳染病無無有或可能有寄生蟲無很少有或可能有實驗結(jié)果準確較準確有疑問應(yīng)用動物數(shù)少量少量多或大量長期實驗效果可能好可能好困難死亡率很低低高長期實驗存活率約100％約90％40％左右實驗準確設(shè)計可能可能不可能實驗結(jié)果的價值很高高有疑問30第三十頁，共六十頁，2022年，8月28日第二節(jié)實驗動物常見感染性疾病實驗動物感染性疾病概念：實驗動物常見感染性疾病包括——人獸共患病、動物烈性傳染病、一般性疾病、寄生蟲疾病。人畜共患病——指人類也可感染發(fā)病的一類動物疾病。31第三十一頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-人畜共患病導致人獸共患病的主要病原體：病毒：流行性出血熱病毒、狂犬病病毒、猴皰疹病毒等。細菌：沙門氏菌、布氏桿菌、志賀氏菌、結(jié)核分枝桿菌等。真菌：皮膚病原真菌等。寄生蟲：弓形體、鉤端螺旋體病等寄生蟲32第三十二頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-烈性傳染病病毒：鼠痘病毒（小鼠脫腳病病毒）、兔出血癥（兔瘟）病毒、犬細小病毒（急性出血性腸炎）、犬瘟熱病毒等。一般疾病病原體：

病毒：小鼠肝炎病毒、仙臺病毒、猴D型反轉(zhuǎn)錄病毒等。細菌：多殺巴氏桿菌、泰澤氏菌、鼠棒狀桿菌、肺支原體等。寄生蟲：多種體內(nèi)外寄生蟲。33第三十三頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎（人畜共患?。﹤魅驹?淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒。帶病毒野小鼠或?qū)?/p>

驗小鼠為傳染源。傳播途徑:帶病毒小鼠的分泌物、排泄物污染，吸血昆蟲傳

播，胎盤垂直傳播。易感者:人，小鼠、猴、豚鼠、大鼠、地鼠、兔、狗、雞等。癥狀:實驗動物多呈隱性感染，人感染后表現(xiàn)類似流感樣癥狀第三十四頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎（人畜共患?。┰\斷：小鼠為隱形感染，不表現(xiàn)出癥狀。可進行患病動物血清，腦脊液或病變組織接種在SPF級小鼠內(nèi)，4~5天死亡。也可進行組織學的檢測。預防：防止野小鼠或感染小鼠進入實驗動物室與實驗室。加強血清學檢測，消滅帶病小鼠。35第三十五頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒外形：呈圓形，或橢圓形，形似沙粒。結(jié)構(gòu)：由包膜和單鏈RNA組成。特性：易被熱(56℃)、紫外線、酸、堿、脂溶劑等滅活。36第三十六頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病流行性出血熱（EHF）

/腎綜合征出血熱（人畜共患病）：傳染源：流行性出血熱病毒（漢坦病毒）。帶病毒黑線姬鼠和褐家鼠為主要傳染源，實驗大鼠也偶爾傳播。傳播途徑:污染塵埃飛揚形成氣溶膠吸入感染。帶病毒的血、尿污染人皮膚破損處，也使人患病。吸血昆蟲傳播。易感者:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔。癥狀:動物感染不發(fā)病。人感染后出現(xiàn)高熱、出血、休克、腎功能受損和循環(huán)衰竭，嚴重者死亡。37第三十七頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病病毒示意圖人感染流行性出血熱人感染癥狀三痛：頭痛，眼眶痛，腰痛三紅：臉，脖子，胸部紅腫低血壓，少尿期，閉尿期，多尿期38第三十八頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病流行性出血熱（EHF）（人畜共患?。涸\斷：血清特異性抗體檢測或是在感染大鼠的肺部組織中檢查到特異性病毒抗原。常用方法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）或免疫熒光抗體實驗預防：消滅野鼠，定期做血清學檢查。39第三十九頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病EHF已構(gòu)成的危害1999年博士后張某進入某大學博士后流動站從事“九五”國家攻關(guān)課題——補腎法治療老年性癡呆的實驗時與實驗用大鼠接觸，三個月后感染鼠源性流行性出血熱，至2003年被診斷為腎功能衰竭，2006年進行腎移植手術(shù)。40第四十頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病EHF已構(gòu)成的危害2001年6月，正當我國“申奧”的關(guān)鍵時刻，北京發(fā)生了因使用質(zhì)量不合格實驗動物和動物實驗不規(guī)范致使鼠源性人獸共患病流行性出血熱感染一名院士死亡和700多師生緊急預防接種的重大事件。消滅了所有普通級的實驗大小鼠。提高標準，修訂實驗動物管理法規(guī)。41第四十一頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病鼠痘（小鼠傳染性脫腳病）（烈性傳染?。﹤魅驹矗菏蠖徊《荆―NA病毒）。患病或帶病毒小鼠是傳染源。傳播途徑：接觸病鼠的滲出物、分泌物及其污染的物品。易感者：小鼠，幼鼠和衰老小鼠敏感，呈致死性。癥狀：小鼠肢體和尾巴嚴重水腫，潰瘍，最后壞死脫落。診斷：癥狀，病毒分離鑒定，血清學檢查預防：定期做血清學檢查，防止帶病鼠進入實驗動物房，接

種牛痘疫苗可防止此病.42第四十二頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病狂犬?。炙Y）（人畜共患?。﹤魅驹矗嚎袢〔《?，狂犬，攜帶病原的貓，豬及牛，馬等。無癥狀動物可通過唾液排毒，成為主要傳染源。傳播途徑：主要通過咬傷傳播。唾液通過傷口等入侵。易感者：人和各種畜類對本病都有易感性，尤其犬科和貓科

動物。癥狀：動物感染表現(xiàn)出狂暴型或麻痹型。人感染后恐水，怕風，恐懼不安等43第四十三頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病狂犬病（恐水癥）（人畜共患?。┰\斷：尸檢動物腦組織內(nèi)基氏小體預防：人被犬和貓咬傷后，必須24h小時內(nèi)注射狂犬疫苗。觀察可疑動物，病死動物應(yīng)焚埋。捕殺野犬，管理和免疫家犬及家畜。44第四十四頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-病毒性疾病狂犬病病毒彈狀病毒，遺傳物質(zhì)為單鏈RNA，表面有質(zhì)膜蛋白對過氧化氫，高錳酸甲等敏感，100℃加熱2min或紫外線照射滅活耐低溫45第四十五頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物細菌感染歸納起來包括三個方面：人獸共患病原菌和動物致病菌

這類細菌中代表性的是沙門氏菌、志賀氏菌、布氏桿菌、結(jié)核分枝桿菌等，不僅可以引起實驗動物的嚴重疾病，而且也是人類的重要致病菌，應(yīng)予以排除，確保人與動物的安全。條件性致病菌當動物在某些誘因的作用下，機體抵抗力下降，導致疾病發(fā)生，甚至流行。條件性致病菌對動物的影響相對比較嚴重。正常菌群的細菌（菌群失調(diào)）各種細菌即使是正常菌群，在動物體內(nèi)的存在都會影響其生理參數(shù)和實驗的重復性。這些變化又可將對動物結(jié)果產(chǎn)生不同程度的干擾和影響。實驗動物常見感染性疾病-細菌性疾病46第四十六頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-細菌性疾病沙門氏菌?。ㄈ诵蠊不疾。﹤魅驹矗荷抽T氏菌。攜帶該菌的野鼠、蒼蠅、動物糞便，病鼠是傳染源。傳播途徑：糞便污染墊料、飼料、飲用水后，經(jīng)消化道感染。易感者：大鼠、小鼠、豚鼠、兔。癥狀：食少和腹瀉，急性暴發(fā)型可導致動物迅速死亡。診斷：癥狀，細菌培養(yǎng)。預防：嚴防野鼠，防止蒼蠅，糞

便污染，隔離淘汰病鼠、

病兔。47第四十七頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-支原體疾病支原體疾病傳染源：支原體（肺支原體、溶神經(jīng)支原體和關(guān)節(jié)炎支原體），

患病或攜帶病原體的小鼠、大鼠。傳播途徑：帶菌母鼠舔仔鼠，氣溶膠傳播，經(jīng)污染籠具間接接觸。易感動物：大鼠、小鼠。癥狀：肺支原體（呼吸系統(tǒng)疾?。罕茄?、肺炎，并發(fā)中耳炎-“歪頭病”。母鼠死胎或不育）溶神經(jīng)支原體（小鼠旋轉(zhuǎn)病）關(guān)節(jié)炎支原體（大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎）48第四十八頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-支原體疾病支原體革蘭氏陰性，形態(tài)多樣，大小不一無細胞壁，細胞質(zhì)表面有3層細胞膜在瓊脂培養(yǎng)基上能形成0.5mm直徑的荷包蛋形菌落。49第四十九頁，共六十頁，2022年，8月28日50實驗動物常見感染性疾病-巴斯德桿菌病巴斯德桿菌病傳染源：巴斯德桿菌（多殺巴斯德桿菌，嗜肺巴斯德桿菌）

病兔和帶菌嚙齒類如豚鼠，大鼠，小鼠等。傳播途徑：直接接觸患病動物，間接接觸患病動物分泌物，糞便污染

物，或垂直傳播給子代。易感動物：兔，最為敏感，其次為豚鼠，小鼠、大鼠。癥狀：多殺巴斯德桿菌（出血性敗血癥）嗜肺巴斯德桿菌（大小鼠肺炎、中耳炎、結(jié)膜炎、皮下潰

爛、引起尿道，生殖道疾?。?/p>

第五十頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-巴斯德桿菌病巴斯德桿菌革蘭陰性短桿菌，無莢膜發(fā)病機制：從傷口侵入，快速繁殖，引起強烈的炎性反應(yīng)，導致傷口出現(xiàn)紅腫，當宿主抵抗力降低時，可引起出血性敗血癥。

第五十一頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-寄生蟲疾病寄生蟲疾?。后w外寄生蟲螨，跳蚤，虱子體內(nèi)寄生蟲弓形蟲，蠕蟲，原蟲52第五十二頁，共六十頁，2022年，8月28日實驗動物常見感染性疾病-寄生蟲疾病弓形體病(人畜共患