農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)(課件)講解學(xué)習(xí)

農(nóng)藥殘留(cánliú)快速測(cè)定技術(shù)江陰市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)(jiǎncè)中心2013年5月第一頁，共20頁。

濫用(lànyòng)“神農(nóng)丹”種姜第二頁，共20頁。2012年2011年2010年第三頁，共20頁。農(nóng)殘快速(kuàisù)測(cè)定方法及儀器介紹一、農(nóng)藥殘留簡(jiǎn)述二、快速檢測(cè)方法及相關(guān)儀器(yíqì)三、農(nóng)殘速測(cè)儀介紹第四頁，共20頁。一、農(nóng)藥(nóngyào)殘留簡(jiǎn)述1、農(nóng)藥(nóngyào)殘留相關(guān)名詞農(nóng)藥(nóngyào)分類無機(jī)化合物（目前使用較多的品種(pǐnzhǒng)有硫懸浮劑、波爾多液等。）化學(xué)合成農(nóng)藥(nóngyào)生物源農(nóng)藥礦物源農(nóng)藥有機(jī)合成化合物動(dòng)物源農(nóng)藥（如動(dòng)物毒素、昆蟲性引誘劑等）植物源農(nóng)藥（如植物內(nèi)源激素、植物源昆蟲激素等）微生物源農(nóng)藥（井岡霉素、白僵菌、蘇云金桿菌等）有機(jī)氯類有機(jī)磷類擬除蟲菊酯類氨基甲酸酯類雜環(huán)類化合物其它（苯氧羧酸類、脲類化合物）第五頁，共20頁。農(nóng)藥殘留：農(nóng)藥使用后殘存在生物體、農(nóng)副產(chǎn)品和環(huán)境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。以mg/kg、ug/kg、ng/kg表示。農(nóng)藥殘留的危害：農(nóng)藥若大量殘留在農(nóng)副產(chǎn)品表面會(huì)引起人的神經(jīng)傳導(dǎo)阻礙、神經(jīng)麻痹甚至引起死亡。最大殘留限量：在農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的法定最高允許濃度，又稱最高殘留限量，以每千克(qiānkè)農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的毫克數(shù)（毫克/千克(qiānkè)）表示。我國違禁農(nóng)藥：666DDT、毒鼠強(qiáng)、甲胺磷、甲基對(duì)硫磷、對(duì)硫磷、久效磷、磷胺等高毒農(nóng)藥全面禁止使用第六頁，共20頁。2、國家(guójiā)農(nóng)藥殘留速測(cè)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T448-2001蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)(jiǎncè)方法GB/T5009.199-2003蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)(jiǎncè)第七頁，共20頁。二、快速檢測(cè)方法及相關(guān)(xiāngguān)儀器1、速測(cè)卡法（紙片法）膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸與靛酚（藍(lán)色），有機(jī)磷或氨基甲酸脂類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變(gǎibiàn)，由此可判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。第八頁，共20頁。2、酶抑制率法（分光(fēnɡuānɡ)光度法）在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在412nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間(shíjiān)的變化值，計(jì)算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。第九頁，共20頁。目前使用的快速(kuàisù)檢測(cè)儀器儀器(yíqì)原理：酶抑制率法（分光光度法）使用此方法的儀器(yíqì)有：深圳安鑫寶WT系列農(nóng)藥殘留速儀長(zhǎng)春吉大·小天鵝GDYN-110SB農(nóng)殘速測(cè)儀上海博納CL-BIII八通道殘留農(nóng)藥測(cè)定儀等特點(diǎn)：精確度高、穩(wěn)定性強(qiáng)易于操作第十頁，共20頁。三、農(nóng)殘速測(cè)儀介紹(jièshào)（一）原理農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶（檢測(cè)試劑）的活性有抑制作用，這樣就抑制了膽堿酯酶催化顯色劑水解發(fā)生顯色反應(yīng)，通過對(duì)顯色反應(yīng)的測(cè)定(cèdìng)來實(shí)現(xiàn)農(nóng)藥殘留量的測(cè)量。由此可判定果品蔬菜樣品中的殘留農(nóng)藥的含量。正常情況：底物+膽堿酯酶---水解→膽堿膽堿+顯色劑→→→黃色溶液第十一頁，共20頁。（二）抑制率計(jì)算方法通過測(cè)定(cèdìng)果蔬中的殘留農(nóng)藥使乙酰膽堿酯酶活性變化的程度來測(cè)定(cèdìng)樣品果蔬中的此類殘留農(nóng)藥毒性，儀器測(cè)定(cèdìng)的殘留農(nóng)藥大小用“抑制率”來表示。抑制率是農(nóng)藥對(duì)酶抑制程度的顯示指標(biāo)，其計(jì)算方式為:

I=((A0-At)/A0)×100％I———抑制率A0———對(duì)照的吸光度值

At———樣品溶液的吸光度值第十二頁，共20頁。（三）GB/T5009.199-2003方法(fāngfǎ)介紹1、配試劑緩沖液、酶試劑、顯色劑、底物均按照儀器自帶的使用說明書的要求配制而成（所用水為蒸餾水或純凈水(jìnɡshuǐ)）。除緩沖溶液可常溫放置，其他試劑配置后必須0-4℃避光保存，使用前冷卻至室溫，保存期不宜過長(zhǎng)，一般現(xiàn)配先用。第十三頁，共20頁。

2、實(shí)驗(yàn)(shíyàn)操作空白樣操作步驟及要求(yāoqiú)：①取2.5ml緩沖溶液加入試管中（記錄）。②分別加入0.1ml酶液（記錄），0.1ml顯色劑（記錄）至試管中。③搖勻后于37℃放置15min（計(jì)時(shí)）。④加入0.1ml底物（記錄）至試管中搖勻，此時(shí)檢液起顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中檢測(cè)。⑤注意比色皿光面毛面的放置方向。按對(duì)照檢測(cè)鍵，3min后記錄空白樣的△AC值。第十四頁，共20頁。樣品(yàngpǐn)樣的操作步驟及要求：取樣步驟及要求：①稱取菜樣1g〔要求一種菜樣要從不同植株取樣，從葉片部位?。ü麑?shí)蔬菜用刀順皮削下），剪成1cm左右見方(jiànfāng)碎片，混勻后用鑷子稱取1g（記錄），放入燒杯或提取瓶中（編號(hào)）〕。②取5ml緩沖溶液加入編好號(hào)的樣品瓶中（記錄）。③用手或借助儀器振蕩1-2min（計(jì)時(shí)）。④振蕩完成后靜置3-5min（計(jì)時(shí)）。第十五頁，共20頁。⑤試管中加入2.5ml樣品提取液。⑥再分別(fēnbié)加入0.1ml（100ul）酶液，0.1ml顯色劑至各樣品樣的試管中。⑦搖勻后于37℃放置15min（計(jì)時(shí)）。⑧各樣品樣中加入0.1ml底物搖勻。⑨最后將每個(gè)試管中的樣品液倒入比色皿中，迅速放入儀器中，按樣品檢測(cè)鍵，3min后記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。第十六頁，共20頁。3、結(jié)果(jiēguǒ)的判定結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當(dāng)蔬菜樣品(yàngpǐn)提取液對(duì)酶的抑制率≥50%時(shí)，樣品(yàngpǐn)為陽性結(jié)果農(nóng)藥殘留超標(biāo)。抑制率在50%左右為可疑樣品(yàngpǐn)，超標(biāo)樣品(yàngpǐn)、可疑樣品(yàngpǐn)需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。第十七頁，共20頁。4、注意事項(xiàng)1、儀器開機(jī)之后最好預(yù)熱10分鐘以上。開機(jī)、關(guān)機(jī)之間間隔1分鐘以上。2、配試劑需按照說明進(jìn)行操作。3、實(shí)驗(yàn)要求的蒸餾水可以用純凈水代替，但是不能用礦泉水，天然飲用水。4、酶液、顯色劑與底物切忌長(zhǎng)時(shí)間室溫下放置，用后應(yīng)立即放入冷藏室內(nèi)（0-4℃）。5、提取液可以放置常溫下保存。（從冰箱中拿出的酶液要等他恢復(fù)(huīfù)到室溫才能使用，不然會(huì)導(dǎo)致酶的活性不夠，酶的活性最適溫度37攝氏度）。第十八頁，共20頁。5、韭菜、生姜、蔥、蒜、辣椒等刺激性氣味蔬菜中，含有對(duì)酶活性有影響的物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時(shí)，可采取整株蔬菜浸泡。6、避免交叉污染(wūrǎn)，每次取不同的樣品，清洗采樣器具。7、先做對(duì)照檢測(cè)，再做樣品檢測(cè)。對(duì)照樣品吸光度值△AC應(yīng)該在如下區(qū)間：實(shí)驗(yàn)室溫度在25°C以上