其它毒性第二軍醫(yī)大學(xué)新藥評價(jià)中心新藥評價(jià)課件

其它毒性試驗(yàn)皮膚給藥毒性試驗(yàn)皮膚給藥的急性毒性試驗(yàn)皮膚給藥的長期毒性試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn)皮膚過敏試驗(yàn)光敏試驗(yàn)其它毒性試驗(yàn)腔道用藥毒性試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)直腸、陰道用藥急性毒性試驗(yàn)直腸、陰道用藥刺激試驗(yàn)其它毒性試驗(yàn)藥物依賴性試驗(yàn)身體依賴性試驗(yàn)自然戒斷試驗(yàn)替代試驗(yàn)催促試驗(yàn)誘導(dǎo)試驗(yàn)精神依賴性試驗(yàn)

皮膚給藥急性毒性試驗(yàn)劑量：3個(gè)，組距0.65－0.85。家兔每組４只，豚鼠或大鼠每組10只并設(shè)賦形劑或空白對照組方法：將受試物均勻涂敷于脫毛區(qū)，破損皮膚則在脫毛區(qū)劃破皮膚后再涂敷受試物。24h后去除，每日觀察，連續(xù)7-14天。觀察動(dòng)物體重、皮膚、毛發(fā)、眼睛和粘膜的變化，呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等變化。若有死亡則進(jìn)行尸檢，當(dāng)有肉眼可見病變，則需進(jìn)行病檢判斷：試驗(yàn)結(jié)果與對照組比較判斷

皮膚給藥的長期毒性試驗(yàn)?zāi)康模河^察經(jīng)皮滲透產(chǎn)生的異常反應(yīng)和可逆程度，找到靶器官動(dòng)物：家兔(2kg,6只/組)，豚鼠(300g，10只/組)或大鼠(200g，10只/組)，♀♂各半。給藥前24h動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)脫毛，面積同急毒受試物：同急性毒性試驗(yàn)劑量：３個(gè)，要求同大鼠口服長毒試驗(yàn)，并設(shè)賦形劑或空白對照組，若用受試物劑量超過有效濃度20倍以上，仍未見動(dòng)物有不良反應(yīng)或死亡時(shí)，則只須設(shè)一個(gè)高劑量組皮膚給藥的長期毒性試驗(yàn)方法：受試物均勻涂敷,每次至少接觸６h，臨床用藥療程的３倍以上時(shí)間連續(xù)給藥。部分動(dòng)物應(yīng)于停藥后繼續(xù)觀察１-２周，檢測指標(biāo)：除每日觀察皮膚、臨床變化及皮膚病理學(xué)檢查外，其血液學(xué)、血液生化指標(biāo)和病理學(xué)檢查項(xiàng)目同大鼠長期毒性試驗(yàn)要求判斷：實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)寫明安全劑量、中毒劑量、中毒表現(xiàn)、中毒靶器官及中毒的可逆程度等皮膚刺激試驗(yàn)多次給藥則每日涂抹一次，連續(xù)一周，其余均與一次給受試物的方法和要求一致結(jié)果評價(jià)：每只動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行刺激反應(yīng)評分，計(jì)算出平均分值進(jìn)行刺激強(qiáng)度評價(jià)皮膚刺激反應(yīng)評分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

刺激反應(yīng)

分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━紅斑:

無紅斑

0

勉強(qiáng)可見

1

中度紅斑

2

嚴(yán)重紅斑

3

紫紅色紅斑并有焦痂形成

4水腫:

無水腫

0

勉強(qiáng)可見

1

皮膚隆起輪廓清楚

2

水腫隆起約1mm并范圍擴(kuò)大

4━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮膚刺激強(qiáng)度評價(jià)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━強(qiáng)度分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━無刺激性<0.5輕度刺激性<2.0中度刺激性<6.0強(qiáng)度刺激性>6.0━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮膚過敏試驗(yàn)方法：分受試物組，空白對照組，陽性對照組，每組10只（♀♂各半）1.致敏接觸：將受試物0.1-0.2ml(ｇ)涂在左側(cè)脫毛區(qū)，持續(xù)6h。第７天和第14天，同法各重復(fù)一次2.激發(fā)接觸：末次致敏后14天，將受試物0.1-0.2ml(ｇ)涂于右側(cè)脫毛區(qū)，陽性對照用0.1%2,4—二硝基氯代苯，６h后去除，即刻觀察，然后于24、48、72h再次觀察過敏反應(yīng)情況結(jié)果評價(jià)：結(jié)果按皮膚反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)評分，根據(jù)試驗(yàn)組與對照組豚鼠皮膚反應(yīng)的差別，判斷受試物對皮膚過敏反應(yīng)性質(zhì)可用致敏率(紅斑或水腫的動(dòng)物例數(shù)/受試動(dòng)物總數(shù))判斷致敏強(qiáng)度皮膚過敏反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)皮膚反應(yīng)分值紅斑形成：無紅斑０輕度紅斑１中度紅斑２重度紅斑３水腫性紅斑４水腫形成：無水腫０輕度水腫１中度水腫２重度水腫３致敏率分類━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━致敏率（%）反應(yīng)強(qiáng)度━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━０－10弱致敏性20－30輕度致敏性40－60中度致敏性70－80高度致敏性90－100極度致敏性━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮膚給藥毒性試驗(yàn)有關(guān)問題設(shè)立賦形劑對照組，賦形劑各種指標(biāo)、規(guī)格等均應(yīng)符合藥用規(guī)格受損皮膚的用藥，急毒、長毒等毒性試驗(yàn)也宜以模擬破損皮膚進(jìn)行高劑量符合制劑工藝要求，以劑型允許配制濃度和允許給藥容量給藥。不能將外用藥厚厚地涂在皮膚上眼刺激試驗(yàn)?zāi)康模河^察眼睛接觸受試物后產(chǎn)生的刺激反應(yīng)動(dòng)物：家兔≥４只，體重2－3kg受試物：液體或膏劑均可直接滴入或涂敷劑量：用原液或原膏劑，不必稀釋，每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g以內(nèi)方法：滴入或涂敷于動(dòng)物一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)作為空白（或賦形劑）對照。給藥后使眼睛被動(dòng)閉合5－10分。記錄給藥后6、24、48、72h至7天眼的局部反應(yīng)情況眼刺激試驗(yàn)臨床用藥超過一周的受試物要進(jìn)行多次給藥刺激試驗(yàn)，連續(xù)給藥一周以上結(jié)果評價(jià)：將每只動(dòng)物的眼角膜、虹膜和結(jié)膜的刺激反應(yīng)的分值相加，即是一只受試動(dòng)物眼刺激反應(yīng)的總積分。把每個(gè)受試動(dòng)物的刺激反應(yīng)積分的總和除以動(dòng)物數(shù)，就是該受試物對眼刺激性的最后分值，以此判定受試物刺激程度眼刺激試驗(yàn)--虹膜評分正常０皺褶明顯加深，充血，腫脹，角膜周圍輕度充血，瞳孔對光仍有反應(yīng)１出血，肉眼可見壞死，對光無反應(yīng)（或出現(xiàn)其中一種反應(yīng)）２眼刺激試驗(yàn)--結(jié)膜評分Ａ.充血（指瞼結(jié)膜、球結(jié)膜部位）血管正常０血管充血呈鮮紅色１血管充血呈深紅色，血管不易分辨２彌漫性充血呈紫紅色３Ｂ.水腫無水腫０輕微水腫（包括瞬膜）１明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻２水腫至眼瞼近半閉合３水腫至眼瞼超半閉合４Ｃ.分泌物無分泌物０少量分泌物１分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著２分泌物使整個(gè)眼區(qū)潮濕或粘著３眼刺激性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━刺激程度積分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━無刺激性０－３輕度刺激性４－８中度刺激性９－１２強(qiáng)度刺激性１３－１６━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗(yàn)方法：大鼠或豚鼠每組10只，家兔每組４只，♀♂各半。滴入或吸入藥后，至少接觸４小時(shí)，給藥后即刻觀察及7-14天觀察動(dòng)物全身狀況、體重、呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等變化，若出現(xiàn)死亡則病檢結(jié)果判斷：試驗(yàn)結(jié)果與對照組比較。如能測出LD50值則按急性毒性試驗(yàn)要求計(jì)算滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)?zāi)康模河^察滴入或吸入后產(chǎn)生的刺激反應(yīng)動(dòng)物：同上述急性毒性試驗(yàn)受試物：液體或粉末劑分組：給藥組、賦形劑組及空白對照組，每組家兔３只，或大鼠或豚鼠５只方法：將藥滴入或噴霧于動(dòng)物。和粘膜接觸至少４h。于24h處死動(dòng)物，觀察有無充血、紅腫等現(xiàn)象。若有變化則需進(jìn)行病檢多次給藥則每天滴入或吸入一次,連續(xù)７天，于末次給藥24h后處死動(dòng)物結(jié)果判斷：試驗(yàn)結(jié)果與對照組比較進(jìn)行判斷直腸、陰道用藥刺激試驗(yàn)多次給受試物則一般每日一次，連續(xù)７天，于末次給藥后24h處死動(dòng)物并觀察結(jié)果判斷：試驗(yàn)結(jié)果與對照組比較判斷腔道用藥毒性試驗(yàn)要特別注意既要符合劑型要求，又要考慮腔道可給容量身體依賴性試驗(yàn)--自然戒斷試驗(yàn)連續(xù)給藥后突然停藥，觀察戒斷癥狀，與同類的代表藥作對比，判斷受試藥的依賴性潛力動(dòng)物：小、大鼠和猴。小鼠體重20-24g，每組≥20只，大鼠體重180-220g，每組≥10只,猴體重3-5kg，每組3～5只，♂♀各半劑量：2～3，須設(shè)賦形劑對照和陽性藥對照(嗎啡，苯巴比妥或巴比妥)。低劑量用ACD；高劑量組依賴性潛力低的藥物應(yīng)選用接近毒性反應(yīng)的劑量，毒性低的藥物選用MTD。藥物可采用恒量或劑量遞增的方式給予身體依賴性試驗(yàn)--自然戒斷試驗(yàn)給藥途徑：1～2種給藥途徑，必須有一種與臨床用藥途徑相同給藥期限：鎮(zhèn)痛藥在小、大鼠需給藥30天，猴需給藥90天；鎮(zhèn)靜催眠藥在小、大鼠需給藥60～90天，猴需給藥180天。每天上下午各一次身體依賴性試驗(yàn)--自然戒斷試驗(yàn)觀察指標(biāo)：鎮(zhèn)痛藥在停藥前24h及停藥后48h內(nèi)每隔4h觀察記錄外觀體征和行為活動(dòng)、植物神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能變化，并稱重。鎮(zhèn)靜催眠藥在停藥前一天及停藥后的1至2周內(nèi)每天觀察動(dòng)物的外觀體征和行為活動(dòng)及自發(fā)驚厥發(fā)生率外觀體征和行為活動(dòng)包括：應(yīng)激性、神情過敏(猴)、飲食、睡眠、自發(fā)運(yùn)動(dòng)活動(dòng)、攻擊性、警覺程度、神經(jīng)反射、豎尾、震顫、驚厥、呼吸、體溫、體重植物神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能變化：腹瀉、流涎、流淚、惡心、嘔吐、瞳孔大小身體依賴性試驗(yàn)--自然戒斷試驗(yàn)資料記錄及整理：①動(dòng)物應(yīng)寫明種屬、性別、生產(chǎn)合格證號(hào)、記錄體重、實(shí)驗(yàn)室溫度及濕度②受試物應(yīng)寫明生產(chǎn)批號(hào)、配制方法③戒斷癥狀用記分法統(tǒng)計(jì)，對檢測指標(biāo)和體重、驚厥發(fā)生率等應(yīng)設(shè)計(jì)合理的圖表顯示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理身體依賴性試驗(yàn)--替代試驗(yàn)給予動(dòng)物代表藥(如嗎啡、巴比妥或苯巴比妥)產(chǎn)生身體依賴性后，停止給藥，替之以受試藥，觀察記錄動(dòng)物是否發(fā)生戒斷癥狀及發(fā)作程度動(dòng)物：參照“自然戒斷試驗(yàn)”劑量：參照“自然戒斷試驗(yàn)”給藥途徑：腹腔注射、灌胃或“藥摻食”(drugadmixedfood,DAF)法給予代表藥使產(chǎn)生身體依賴性，然后停止給代表藥，以同樣給藥方式給予不同劑量的受試藥,觀察及記錄替代期間動(dòng)物的戒斷行為和體重變化身體依賴性試驗(yàn)--替代試驗(yàn)鎮(zhèn)痛藥的觀察期為停止嗎啡前24h和停藥后48h內(nèi)，每4h觀察一次；鎮(zhèn)靜催眠藥的觀察為停止代表藥前一天和停藥后的1～2周內(nèi)，每天觀察一次采用1～2種給藥途徑，必須有一種與臨床用藥途徑相同觀察指標(biāo)：參照“自然戒斷試驗(yàn)”資料記錄與整理：參照“自然戒斷試驗(yàn)”身體依賴性試驗(yàn)--催促試驗(yàn)短時(shí)期內(nèi)給予動(dòng)物大劑量受試藥，然后注射受體對抗劑，觀察和記錄是否出現(xiàn)戒斷癥狀及其程度。此法只適用于有竟?fàn)幮允荏w對抗劑的阿片類藥物動(dòng)物：參照“自然戒斷試驗(yàn)”劑量：除低劑量組一般采用臨床劑量的1至2倍外，余同“自然戒斷試驗(yàn)”給藥途徑：猴的實(shí)驗(yàn)應(yīng)采用與臨床給藥途徑相同；大、小鼠的實(shí)