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文檔簡介

溶血性鏈球菌檢驗革蘭氏陽性球菌檢樣處理增菌培養(yǎng)檢樣處理固體樣品:25g(電子天平)液體樣品:25mL(25mL吸量管)+

225mL生理鹽水(量筒),混勻。注意:液體樣品先用無菌NaOH或HCl調節(jié)PH至7.0。稀釋瓶或具塞廣口瓶增菌取上述混合液5mL(吸量管)

50mL葡萄糖肉浸液肉湯培養(yǎng)(于36℃±1℃培養(yǎng)24h)葡萄糖肉浸液肉湯培養(yǎng)

1.取已培養(yǎng)好的增菌液1環(huán)血平板劃線培養(yǎng)(于36℃±1℃培養(yǎng)24h)葡萄糖肉浸液肉湯(陽性)血平板平板劃線示意圖開始處開始處

2.取有典型菌落的陽性血平板(在放陽性物品處)灰白色,半透明或不透明,表面光滑,周圍有透明圈血平板劃線(分純)血平板涂布貼桿菌肽試紙(2~3片)革蘭氏染色典型菌落(同一菌落)于36℃±1℃培養(yǎng)18~24h于36℃±1℃培養(yǎng)18~24h在無菌室中固定,到微生物實訓室染色革蘭氏染色步驟:涂片——火焰固定——結晶紫初染——水洗——碘液媒染——乙醇脫色——水洗——吸干——番紅或沙黃復染——水洗——干燥——鏡檢涂片:在載玻片中央滴一滴生理鹽水,用無菌操作法挑取菌種于生理鹽水中,調勻并涂成薄膜。注意:生理鹽水不宜過多;涂片必須均勻?;鹧婀潭ǎ狠d玻片通過火焰1~2次固定,不可過熱,以載玻片不燙手背為宜。結晶紫初染:涂片置于水平位置。涂片薄膜上加結晶紫1滴,染色1min。水洗:用自來水沖洗至沖下的水無色為止。碘液媒染:加碘液媒染1min,然后用水沖洗至沖下的水呈無色為止。乙醇脫色:用吸水紙將載玻片上的水吸凈,用95%的乙醇滴于涂片薄膜上,滴洗至流出的乙醇不出現(xiàn)紫色為止,大約需要20~30s。立即用自來水沖洗乙醇約30s,用吸水紙吸干水分。番紅或沙黃復染:在涂片薄膜上滴加番紅1滴,染色1~2min。水洗:用水沖洗至沖下的水呈無色為止。干燥:于室溫下自然干燥。觀察:干燥后,于涂片薄膜上滴香柏油1滴,置油鏡下觀察。結果:

革蘭氏陽性菌——紫色;

革蘭氏陰性菌——紅色。桿菌肽敏感試驗結果:試紙周圍有抑菌帶出現(xiàn)為陽性血平板純化結果:

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