標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 40183-2021 DNA甲基化的測定 焦磷酸測序法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在為使用焦磷酸測序技術(shù)檢測DNA甲基化狀態(tài)提供規(guī)范性指導(dǎo)。該標(biāo)準(zhǔn)適用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域內(nèi)對特定基因區(qū)域或全基因組范圍內(nèi)CpG位點(diǎn)的甲基化水平進(jìn)行定量分析。

標(biāo)準(zhǔn)中詳細(xì)規(guī)定了從樣本準(zhǔn)備到數(shù)據(jù)解讀的整個(gè)流程，包括但不限于：

  • 樣品采集與處理：描述了如何正確收集生物樣品（如血液、組織等），以及如何通過提取DNA來獲得適合后續(xù)步驟使用的高質(zhì)量核酸。
  • DNA片段化與純化：介紹了將長鏈DNA打斷成適合焦磷酸測序所需長度的方法，并強(qiáng)調(diào)了去除RNA和蛋白質(zhì)雜質(zhì)的重要性。
  • 亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化：這是整個(gè)過程中非常關(guān)鍵的一環(huán)，利用化學(xué)方法將未被甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則保持不變，從而在后續(xù)測序時(shí)能夠區(qū)分兩者。
  • PCR擴(kuò)增及文庫構(gòu)建：說明了如何選擇合適的引物對目標(biāo)序列進(jìn)行擴(kuò)增，并介紹了一種有效的文庫制備策略以確保高通量測序的成功率。
  • 焦磷酸測序操作指南：提供了關(guān)于儀器設(shè)置、試劑配比等方面的建議，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與重復(fù)性。
  • 數(shù)據(jù)分析與報(bào)告撰寫：指出了在完成測序后，應(yīng)采用哪些軟件工具來進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并給出了編寫正式研究報(bào)告時(shí)需包含的信息類型。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2021-05-21 頒布
  • 2021-12-01 實(shí)施
?正版授權(quán)
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文檔簡介

ICS07080

A21.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T40183—2021

DNA甲基化的測定焦磷酸測序法

DeterminationofDNAmethylation—Pyrosequencing

2021-05-21發(fā)布2021-12-01實(shí)施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T40183—2021

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位河北醫(yī)科大學(xué)中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院河北省食品檢驗(yàn)研究院中國科學(xué)院遺傳與發(fā)

:、、、

育生物學(xué)研究所農(nóng)業(yè)資源研究中心河北師范大學(xué)

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人呂品馬愛進(jìn)張巖林浩李永鵬李東明黃蕓楊宏超

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T40183—2021

DNA甲基化的測定焦磷酸測序法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用焦磷酸測序法測定甲基化的方法

DNA。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于動植物組織或體外培養(yǎng)細(xì)胞甲基化測定

DNA。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3術(shù)語和定義縮略語

、

31術(shù)語和定義

.

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

311

..

DNA甲基化DNAmethylation

在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下以腺苷甲硫氨酸為甲基供體將甲基轉(zhuǎn)移至堿基特定結(jié)構(gòu)上的

DNA,S-,

過程

。

32縮略語

.

下列縮略語適用于本文件

。

脫氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(polymerasechainreaction)

4原理

經(jīng)重硫酸鹽硫化處理后雙鏈中未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶通過將尿嘧啶

DNA,DNA,PCR

轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶根據(jù)產(chǎn)物中相應(yīng)甲基化位點(diǎn)的胞嘧啶和胸腺嘧啶的比例進(jìn)行定量

,PCR。

5試劑或材料

除非另有規(guī)定僅使用分析純試劑

,。

51水二級水

.:GB/T6682,。

52動物基因組提取試劑盒

.DNA。

53植物基因組提取試劑盒

.DNA。

54焦磷酸

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