動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課用

動(dòng)物細(xì)胞工程生活聯(lián)系：

燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對(duì)于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，所以需要用培養(yǎng)的人細(xì)胞構(gòu)建人造皮膚最基礎(chǔ)的是

——?jiǎng)游锛?xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體等1、什么叫動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)？2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是什么？從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它們分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。細(xì)胞增殖（有絲分裂）一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念及原理過程是如何進(jìn)行的?放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程示意圖

結(jié)合問題，閱讀書本，六人一組，討論動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程圖。（5min)學(xué)習(xí)活動(dòng)：結(jié)合問題思考流程1、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞呢？2、胰蛋白酶的作用是什么？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分？3、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面為何要光滑、無毒？分散成單個(gè)細(xì)胞易培養(yǎng)，營(yíng)養(yǎng)容易供應(yīng)，代謝廢物容易排出；也可使細(xì)胞水平的相關(guān)技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)。水解細(xì)胞間的物質(zhì)，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。易于細(xì)胞貼附放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快貼附在瓶壁上。接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)概念原代培養(yǎng)：通常將直接從動(dòng)物體內(nèi)取出的動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)接觸抑制后，貼滿瓶壁的細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞增殖。這樣即為傳代培養(yǎng)。二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)概念細(xì)胞株：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，部分可以傳到40-50代，其遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生變化。這部分細(xì)胞成為細(xì)胞株。細(xì)胞系：傳到40-50代后有部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，帶有癌變的特點(diǎn)，可能在培養(yǎng)條件下無限制的傳代下去。這部分細(xì)胞稱為細(xì)胞系。二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)概念動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程總結(jié)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞株無限傳代細(xì)胞系單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變1、選用組織時(shí)，一般用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做培養(yǎng)材料，而不用老齡動(dòng)物的因?yàn)橛g組織或器官上的細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，有絲分裂旺盛，容易培養(yǎng)。老齡動(dòng)物的細(xì)胞則相反。特別提醒：2、胰蛋白酶處理組織時(shí)要注意時(shí)間，

不能夠用胃蛋白酶代替嗎

控制好消化時(shí)間，太長(zhǎng)會(huì)消化細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近.特別提醒：3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)最終不能培養(yǎng)成新個(gè)體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體特別提醒：無菌、無毒全部的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)適宜的溫度和PH值必要的氣體條件3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等。）3、溫度和PH

36.5左右,7.2-7.44、氣體環(huán)境：

O2

和

CO2（95%空氣和5%CO2）補(bǔ)充合成培養(yǎng)基缺乏的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)維持培養(yǎng)液中的PH值細(xì)胞代謝必需①生物制品的生產(chǎn)②用于基因工程③用于檢測(cè)有毒物質(zhì)④細(xì)胞的生理、病理、藥理研究4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用1．動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)B.動(dòng)物細(xì)胞融合C.單克隆抗體D.胚胎核移植

練一練~~~Let'stry!2．貼壁細(xì)胞的分裂方式具體是A.無絲分裂B.有絲分裂C.減數(shù)分裂D.增殖獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞群體3．關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是

A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散開來B.通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)C.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培育的細(xì)胞全部衰老死亡D.用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織

練一練~~~Let'stry!

根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞核仍具有全能性的特點(diǎn),怎樣將動(dòng)物細(xì)胞的全能性表達(dá)?

再想一想利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)理論基礎(chǔ)：動(dòng)物的細(xì)胞核具有全能性二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)

1、概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。

用核移植的方法得到的動(dòng)物稱克隆動(dòng)物二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)2、核移植的種類胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（易）（難）學(xué)習(xí)活動(dòng)三：思考探究1997年，美國(guó)威斯康星州的一個(gè)奶牛場(chǎng)有一頭名叫盧辛達(dá)的奶牛，年產(chǎn)奶量為30.8t，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量的最高記錄。目前世界各國(guó)高產(chǎn)牛奶場(chǎng)的奶牛，平均每年產(chǎn)量為十幾噸，而我國(guó)平均水平僅有3－4噸。

你能想辦法繁殖盧辛達(dá)的后代，使年產(chǎn)奶量為30.8t嗎？供體細(xì)胞培養(yǎng)（MⅡ卵母細(xì)胞）減數(shù)第二次分裂中期去核的卵母細(xì)胞供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞激活受體細(xì)胞，完成分裂、發(fā)育胚胎移植代孕牛子宮克隆牛3、過程：供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核無核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵細(xì)胞作受體細(xì)胞的原因是:它是最大的細(xì)胞,易操作,它發(fā)育可直接表達(dá)性狀3.嚴(yán)格來說新個(gè)體有卵巢母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)所以有兩個(gè)親本的性狀核移植過程①加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育②保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量③克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白④可以作為異種移植的供體4、應(yīng)用前景：⑤可以用于組織器官的移植5、存在問題：①成功率低②克隆動(dòng)物存在健康問題③克隆動(dòng)物食品的安全性問題存有爭(zhēng)議從母羊甲的體細(xì)胞中取出細(xì)胞核，注入到母羊乙的去核卵母細(xì)胞中，融合后的細(xì)胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再將胚胎移到另一只母羊丙的子宮內(nèi)，出生的小羊大多數(shù)性狀

A.難以預(yù)測(cè) B.像甲C.像乙D.像丙

練一練~~~Let'stry!2.下列有關(guān)克隆的敘述，不正確的是

A.生物體通過體細(xì)胞進(jìn)行的無性繁殖B.將某種瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)繁殖成大量細(xì)胞C.扦插和嫁接實(shí)質(zhì)上也是克隆

D.將雞的某個(gè)DNA片段整合到小鼠的DNA中練一練~~~Let'stry!1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：

幼齡動(dòng)物取動(dòng)物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液細(xì)胞懸液10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無限傳代遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：?jiǎn)栴}1、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？２、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？３、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？４、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？沒有是成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)細(xì)胞間的成份是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)思考題６、細(xì)胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？８、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問題呢？９、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？10、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)取材時(shí)，一般是取胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官，請(qǐng)解釋原因？蛋白質(zhì)和磷脂能注意時(shí)間的控制不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官分裂、增殖旺盛11、貼附性細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？13、如果此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求，應(yīng)該怎樣辦？細(xì)胞株和細(xì)胞系通常是培養(yǎng)多少代的細(xì)胞?易于培養(yǎng)細(xì)胞貼壁，進(jìn)行生長(zhǎng)增殖

當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞分裂就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫接觸抑制。

將貼滿瓶壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。這樣的過程叫做傳代培養(yǎng)思考題14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直傳代下去嗎？16、有些為何能一直傳下去嗎？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是為了得到這些細(xì)胞嗎？17、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？用于植皮的細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)該不多于多少代？

上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就