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文檔簡介
尿液干化學(xué)與沉渣第一頁,共二十八頁,2022年,8月28日一、尿液檢驗?zāi)康?/p>
尿液檢驗是臨床上最常用的重要檢測項目之一,主要用于泌尿生殖系統(tǒng)疾病、肝膽疾病、代謝性疾?。ㄈ缣悄虿〉龋┘捌渌到y(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷、治療監(jiān)測及健康普查。第二頁,共二十八頁,2022年,8月28日二、尿干化學(xué)分析儀
化學(xué)分析儀又稱尿液分析儀(urineanalyzer),是用干化學(xué)方法檢測尿中某些成分,有半自動和全自動兩大類。第三頁,共二十八頁,2022年,8月28日1.尿液分析儀的試劑帶
試劑帶采用多層膜結(jié)構(gòu),第一層尼龍膜起保護(hù)作用,防止大分子物質(zhì)對反應(yīng)的污染;第二層絨制層,包括碘酸鹽層和試劑層,碘酸鹽層可破壞維生素C等干擾物質(zhì),試劑層主要與尿液中所測定物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生顏色變化;第三層是吸水層,可使尿液均勻快速地浸入,并能抑制尿液流到相鄰反應(yīng)區(qū);最后一層選取尿液不浸潤的塑料片作為支持體。第四頁,共二十八頁,2022年,8月28日第五頁,共二十八頁,2022年,8月28日尿液分析儀工作原理分析儀采用專用的試紙帶,通過測定試帶顏色變化,求得尿液中各種成份的濃度。第六頁,共二十八頁,2022年,8月28日
尿液分析儀一般采用雙波長法測定試劑塊的顏色變化。測定波長:它是被測試劑塊的敏感特征波長;參比波長:是被測試劑塊不敏感的波長,用于消除背景光和其它雜散光的影響。各種試劑塊都有相應(yīng)的測定波長,其NIT、KET、BIL、URO原的測定波長為550nm,pH、GLU、PRO、VitC、BLD的測定波長為620nm。各試劑塊所選用的參考波長為720nm。第七頁,共二十八頁,2022年,8月28日2.儀器結(jié)構(gòu)與組成
尿液分析儀一般由機(jī)械系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、電路系統(tǒng)三部分組成。第八頁,共二十八頁,2022年,8月28日(二)檢測參數(shù):
目前常用的檢測參數(shù)包括酸堿度、蛋白質(zhì)、葡萄糖、酮體、膽紅素、尿膽原、紅細(xì)胞或血紅蛋白(或隱血)、亞硝酸鹽、白細(xì)胞、比重、維生素C等(下圖)第九頁,共二十八頁,2022年,8月28日第十頁,共二十八頁,2022年,8月28日方法學(xué)評價主要優(yōu)點:標(biāo)本用料少;速度快、項目多;重復(fù)性好、準(zhǔn)確性高;適于大批量標(biāo)本篩檢。第十一頁,共二十八頁,2022年,8月28日主要不足:
①不能替代病理性尿標(biāo)本檢查,對白細(xì)胞、管型、結(jié)晶的檢測屬于間接檢測。
不利判斷紅細(xì)胞的形態(tài)特征。第十二頁,共二十八頁,2022年,8月28日②蛋白質(zhì)在PH3.2條件下,四溴酚藍(lán)產(chǎn)生的陰離子與帶陽離子的蛋白質(zhì)結(jié)合使顏色發(fā)生改變,這種現(xiàn)象稱指示劑蛋白誤差法。
測尿蛋白以清蛋白為主,對球蛋白、血紅蛋白、本周蛋白和黏蛋白不夠靈敏,故“陰性”不能排除這些蛋白的存在。對于高緩沖的堿性尿可能得到假陽性結(jié)果。如果尿液被季銨鹽類化合物及某些防腐劑或清洗劑污染也會導(dǎo)致假陽性。第十三頁,共二十八頁,2022年,8月28日③葡萄糖是在過氧化物酶的作用下生產(chǎn)葡萄糖酸和過氧化氫,過氧化氫在過氧化物酶作用下釋放新生態(tài)氧[O],[O]氧化KI發(fā)生顏色改變。
第十四頁,共二十八頁,2022年,8月28日④酮體尿酮體包括乙酰乙酸、丙酮、β-羥丁酸三種。尿中乙酰乙酸在堿性條件下與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng),不與丙酮或β-羥丁酸反應(yīng)。第十五頁,共二十八頁,2022年,8月28日⑤白細(xì)胞白細(xì)胞試塊主要與粒細(xì)胞中的酯酶反應(yīng),而單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞中無酯酶,故需結(jié)合顯微鏡檢查。
第十六頁,共二十八頁,2022年,8月28日⑥VitC該項目并非用于人體內(nèi)VitC的定量,而是用于判斷試帶法其它檢測項目的結(jié)果是否可靠,高濃度的VitC對葡萄糖、膽紅素、血、亞硝酸鹽會產(chǎn)生嚴(yán)重的負(fù)干擾。第十七頁,共二十八頁,2022年,8月28日三、尿液有形成分分析儀檢查
傳統(tǒng)的尿有形成分檢查是在顯微鏡下檢查離心沉淀后的尿有形成分,費時費力、誤差大、重復(fù)性差、不能定量、受人為因素影響、無統(tǒng)一質(zhì)控物、難以進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。1988年,美國國際遙控影響系統(tǒng)有限公司研制生產(chǎn)了世界上第一臺高速攝影機(jī)式尿有形成分自動分析儀。隨著現(xiàn)代科技的進(jìn)步,目前,有形成分分析儀主要有2大類:①尿有形成分直接鏡檢影像分析儀②流式細(xì)胞術(shù)和電阻抗檢測相結(jié)合的全自動尿有形成分分析儀。
第十八頁,共二十八頁,2022年,8月28日(一)影像式尿有形成分分析儀:其原理與人工顯微鏡鏡檢原理基本相似,都是直觀地觀察有形成分的形態(tài),在相差顯微鏡下數(shù)碼攝影系統(tǒng)對每個層流經(jīng)過的標(biāo)本攝像,計算機(jī)進(jìn)行圖像分析,提取有形成分的大小、對比度、質(zhì)地、形狀特征,運用形態(tài)識別軟件自動識別和分類尿液有形成分。與普通顯微鏡法相比,具有無污染、定量、簡便等優(yōu)點。但對雜質(zhì)多的標(biāo)本可導(dǎo)致圖像模糊難以準(zhǔn)確辨認(rèn),假陽性率高;有些結(jié)晶和真菌易被誤認(rèn)為紅細(xì)胞,往往需要依靠傳統(tǒng)顯微鏡檢查。第十九頁,共二十八頁,2022年,8月28日(二)全自動尿有形成分分析儀
其設(shè)計思路與顯微鏡檢測原理不同,應(yīng)用了流式細(xì)胞術(shù)和電阻抗分析原理。下面以Sysmex
UF系列
為例作簡要介紹:第二十頁,共二十八頁,2022年,8月28日第二十一頁,共二十八頁,2022年,8月28日1.儀器組成:主要包括光學(xué)檢測系統(tǒng)、液壓系統(tǒng)、電阻抗檢測系統(tǒng)等第二十二頁,共二十八頁,2022年,8月28日2.尿液有形成分染色:其染料成分主要有9-氮雜菲:主要染色白細(xì)胞的核酸成分,在480nm光激發(fā)時產(chǎn)生610nm橙黃色光波,用于區(qū)別有核與無核細(xì)胞(白、紅細(xì)胞,病理管型與透明管型等).羧花氰:其穿透能力強(qiáng),主要與細(xì)胞膜(紅細(xì)胞膜、核膜線粒體等)的脂質(zhì)成分發(fā)生非特異性結(jié)合,用于區(qū)別WBC體積大小(如上皮細(xì)胞與白細(xì)胞的區(qū)別)。第二十三頁,共二十八頁,2022年,8月28日
3.尿液有形成分檢測:
定量稀釋的尿標(biāo)本經(jīng)稀釋、加溫、染色后進(jìn)入鞘液流動池,單個縱列的有形成分經(jīng)氬激光光束照射,產(chǎn)生不同程度的熒光強(qiáng)度(熒光強(qiáng)度與有形成分和染料的結(jié)合程度成正比),結(jié)合前向散射光和側(cè)向散射光的信號分析尿中有形成分。綜合分析做出紅細(xì)胞、白細(xì)胞、細(xì)菌、管型等的散點圖及定量報告,最后得到每份尿標(biāo)本的直方圖和散點圖。第二十四頁,共二十八頁,2022年,8月28日第二十五頁,共二十八頁,2022年,8月28日4.方法學(xué)評價:
全自動尿有形成分分析儀較顯微鏡檢查有明顯優(yōu)勢:①不需離心,可自動進(jìn)樣。②標(biāo)本用量少,快速、高效。③方法程序統(tǒng)一,易于標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制。第二十六頁,共二十八頁,2022年,8月28日Sysmex
UF系列
尿沉渣分析儀
目前在中國的儀器保有數(shù)量大約有800臺左右,并且隨著尿常規(guī)定量檢查的不斷的普及,數(shù)量仍呈一個上升的趨勢。UF項目具有檢測速度快、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好、自動進(jìn)樣、自動混均、自動化程度高等優(yōu)點,但是該項目的檢測成本較高,原裝試劑的每人份的檢測成本大約平均在8元錢,儀器的平均購置成本大約在50萬左右。按照五年的使用周期,一年的折舊費是十萬元,若以一年4
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