醫(yī)學(xué)院2003分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)試卷

20031、你想采用PCR技術(shù)擴(kuò)增pEGFP-N1中綠熒光蛋白（GFP）的序列，通過A中的BamH1位點(diǎn)將GFP序列插入A的編碼序列中，全長融合蛋白的表達(dá)。請根GFP的引物。GFPStartGFPStartGFPStartGFPStopAlaSerGlyIluArgIluGGATCC為BamH12DNA5055bp、1:50稀釋后測OD260＝0.2；插入DNA片段大小為675bp1:40稀釋后測OD260＝0.1請按載體DNADNA1:3DNA0.15x10-12mole計算，完成下列工作表（330：10xInsertT42120提示：pIRES-EGFPcontainstheinternalribosomeentrysiteIRESoftheencephalomyocarditis(ECMV)betweentheMCSandtheEGFP(enhancedgreenfluorescentprotein)codingregion.Thispermitsboththegeneofinterest(clonedintotheMCS)andtheEGFPgenetobetranslatedfromasinglebicistronicmRNA.

5、SARS全組和相關(guān)蛋白的鑒定已完成。你想利用pETBlue-2載體表SARS棘蛋白（surfaceeglycoprotein）作進(jìn)一步研究你已有SARSRNA、原核表達(dá)載體pETBlue-2、其他相關(guān)試劑和實(shí)驗(yàn)設(shè)備；并①SARS棘蛋白的編碼序（下列為SARS組部分序列棘蛋白序列從21492到2525921421gtaggcttatcattagagaaaacaacagagttgtggtttcaagtgatattcttgttaaca21481actaaacgaacatgtttattttcttattatttcttactctcactagtggtagtgaccttg21541accggtgcaccacttttgatgatgttcaagctcctaattacactcaacatacttcatcta21601tgaggggggtttactatcctgatgaaatttttagatcagacactctttatttaactcagg21661atttatttcttccattttattctaatgttacagggtttcatactattaatc 21721gcaaccctgtc cttttaaggatggtatttattttgctgccacagagaaatcaaatg21781ttgtccgtggttgggtttttggttctaccatgaacaacaagtcacagtcggtgattatta21841ttaacaattctactaatgttgtt gagcatgtaactttgaattgtgtgacaaccctt21901tctttgctgtttctaaacccatgggtacacagacac tatgatattcgataatgcat21961ttaattgcactttcgagtacatatctgatgccttttcgcttgatgtttcagaaaagtcag22021gtaattttaaacacttacgagagtttgtgtttaaaaataaagatgggtttctctatgttt22081ataagggctatcaacctatagatgtagttcgtgatctaccttctggttttaacactttga22141aacctatttttaagttgcctcttggtattaacattacaaattttagagccattcttacag22201ccttttcacctgctcaagacatttggggcacgtcagctgcagcctattttgttggctatt22261taaagccaactacatttatgctcaagtatgatgaaaatggtacaatcacagatgctgttg22321attgttctcaaaatccacttgctgaactcaaatgctctgttaagagctttgagattgaca22381aaggaatttaccagacctctaatttcagggttgttccctcaggagatgttgtgagattcc22441ctaatattacaaacttgtgtccttttggagaggtttttaatgctactaaattcccttctg22501tctatgcatgggagagaaaaaaaatttctaattgtgttgctgattactctgtgctctaca22561actcaacatttttttcaacctttaagtgctatggcgtttctgccactaagttgaatgatc22621tttgcttctccaatgtctatgcagattcttttgtagtcaagggagatgatgtaagacaaa22681tagcgccaggacaaactggtgttattgctgattataattataaattgccagatgatttca22741tgggttgtgtccttgcttgga taggaacattgatgctacttcaactggtaattata22801attataaatataggtatcttagacatggcaagcttaggccctttgagagagacatatcta22861atgtgcctttctcccctgatggcaaaccttgcaccccacctgctcttaattgttattggc22921cattaaatgattatggtttttacaccactactggcattggctaccaaccttacagagttg22981tagtactttcttttgaacttttaaatgcaccggccacggtttgtggaccaaaattatcca23041ctgaccttattaagaaccagtgtgtcaattttaattttaatggactcactggtactggtg23101tgttaactccttcttcaaagagatttcaaccatttcaacaatttggccgtgatgtttctg23161atttcactgattccgttcgagatcctaaaacatctgaaatattagacatttcaccttgct23221cttttgggggtgtaagtgtaattacacctggaacaaatgcttcatctgaagttgctgttc23281tatatcaagatgttaactgcactgatgtttctacagcaattcatgcagatcaactcacac23341cagcttggcgcatatattctactggaaacaatgtattccagactcaagcaggctgtctta23401taggagctgagcatgtcgacacttcttatgagtgcgacattcctattggagctggcattt23461gtgctagttacc agtttctttattacgtagtactagccaaaaatctattgtggctt tatgtctttaggtgctgatagttcaattgcttactctaataacaccattgct23581ctactaacttttcaattagcattactacagaagtaatgcctgtttctatggctaaaacct23641ccgtagattgtaatatgtacatctgcggagattctactgaatgtgctaat23701aatatggtagcttttgcacacaactaaatcgtgcactctcaggtattgctgctgaacagg23761atcgcaacacacgtgaagtgttcgctcaagtcaaacaaatgtacaaaaccccaactttga23821aatattttggtggttttaatttttcacaaatattacctgaccctctaaagccaactaaga23881ggtcttttattgaggacttgctctttaataaggtgacactcgctgatgctggcttcatga23941agcaatatggcgaatgcctaggtgatattaatgctagagatctcatttgtgcgcagaagt24001tcaatggacttacagtgttgccacctctgctcactgatgatatgattgctgcctacactg24061ctgctctagttagtggtactgccactgctggatggacatttggtgctggcgctgctcttc24121aa cttttgctatgcaaatggcatataggttcaatggcattggagttacccaaaatg24181ttctctatgagaaccaaaaacaaatcgccaaccaatttaacaaggcgattagtcaaattc24241aagaatcacttacaacaacatcaactgcattgggcaagctgcaagacgttgttaaccaga24301atgctcaagcattaaacacacttgttaaacaacttagctctaattttggtgcaatttcaa24361gtgtgctaaatgatatcctttcgcgacttgataaagtcgaggcggaggtacaaattgaca24421ggttaattacaggcagacttcaaagccttcaaacctatgtaacacaacaactaatcaggg24481ctgctgaaatcagggcttctgctaatcttgctgctactaaaatgtctgagtgtgttcttg24541gacaatcaaaaagagttgacttttgtggaaagggctaccaccttatgtccttcccacaag24601cagccccgcatggtgttgtcttcctacatgtcacgtatgtgccatcccaggagaggaact24661tcaccacagcgccagcaatttgtcatgaaggcaaagcatacttccctcgtgaaggtgttt24721ttgtgtttaatggcacttcttggtttattacacagaggaacttcttttctccacaaataa24781ttactacagaca atttgtctcaggaaattgtgatgtcgttattggcatcattaaca24841acacagtttatgatcctctgcaacctgagctcgactcattcaaagaagagctggacaagt24901acttcaaaaatc atcaccagatgttgatcttggcgacatttcaggcattaacgctt24961ctgtcgtcaacattcaaaaagaaattgaccgcctcaatgaggtcgctaaaaatttaaatg25021aatcactcattgaccttcaagaattgggaaaatatgagcaatatattaaatggccttggt25081atgtttggctcggcttcattgctggactaattgccatcgtcatggttacaatcttgcttt25141gttgcatgactagttgttgcagttgcctcaagggtgcatgctcttgtggttcttgctgca25201agtttgatgaggatgactctgagccagttctcaagggtgtcaaattacattacacataaa25261cgaacttatggatttgtttatgagattttttactcttggatcaattactgcacagccagt②pETBlue-2載體圖譜和MCS區(qū)的序列細(xì)節(jié)（提示：這是一個克隆和表達(dá)型載體，插入的表達(dá)靠T7啟動子驅(qū)動，與用于重組子篩選的E.coli啟動子方向相反。因而，插入多克隆位點(diǎn)的編碼序列的N端T7啟動子下游）③已知該21421-25320bp之間不存在BamHI、