大腸菌群測(cè)定

GB4789.3-2010大腸菌群測(cè)定GB4789.3-2010大腸菌群測(cè)定定義：大腸菌群：一群在36℃培養(yǎng)48h可發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏染色陰性無(wú)芽孢桿菌。該菌主要來(lái)源自人畜糞便，作為糞便污染指標(biāo)評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生狀況，推斷食品中腸道致病菌污染的可能。2大腸菌群的食品衛(wèi)生學(xué)意義作為糞便污染食品的指標(biāo)菌，MPN值愈低則說(shuō)明食品受糞便污染程度及對(duì)人體健康危害程度愈低作為腸道致病菌污染食品的指針，大腸菌群數(shù)量越多則腸道致病菌存在的可能性就越高，但兩者之間并不總是呈平行關(guān)系要求食品中大腸菌群完全不存在是不可能的，重要的是其污染程度，即菌量3產(chǎn)氣克雷白氏菌ETEC

EIEC

陰溝腸桿菌EHEC

大腸菌群耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）大腸桿菌產(chǎn)氣克雷白氏菌大腸埃希氏菌檸檬酸桿菌O157：H7大腸桿菌是人和溫血?jiǎng)游锬c道內(nèi)普遍存在的細(xì)菌，是糞便中的主要菌種。一般生活在人大腸中并不致病，但它侵入人體一些部位時(shí)，可引起感染。大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命名，而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語(yǔ)，它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。一般認(rèn)為可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。

總大腸菌群系指一群在37℃培養(yǎng)24小時(shí)能發(fā)酵乳酸、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。耐熱大腸菌群即糞大腸菌群，作為一種衛(wèi)生指標(biāo)菌，耐熱大腸菌群中很可能含有糞源微生物，因此耐熱大腸菌群的存在表明可能受到了糞便污染，可能存在大腸桿菌。但是，耐熱大腸菌群的存在并不代表對(duì)人有什么直接的危害。致病性大腸桿菌能引起食物中毒。致病性菌株能侵入腸粘膜上皮細(xì)胞，具有痢疾桿菌樣致病力。腸致病性大腸桿菌（EPEC）、腸毒素性大腸桿菌（ETEC）和腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）等。O157:H7（EHEC)腸出血性大腸桿菌，感染性腹瀉是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的危害嚴(yán)重的腸道傳染病，已逐漸成為威脅人群健康的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題。大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌的從屬關(guān)系4第一法大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法初發(fā)酵：月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯（LST）替代了乳糖膽鹽發(fā)酵培基確證實(shí)驗(yàn)：煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）替代了乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基，取消了革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)時(shí)間：由24h延長(zhǎng)至48h單位：由MPN/100g變?yōu)?/p>

MPN/g5第一法大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法未接種的LST肉湯未接種的乳糖膽鹽肉湯6第一法大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法LST肉湯乳糖膽鹽肉湯7大腸菌群計(jì)數(shù)檢驗(yàn)流程0將產(chǎn)氣的試管內(nèi)樣品接種到BGLB肉湯LST不產(chǎn)氣（-）小導(dǎo)管里無(wú)氣泡LST產(chǎn)氣（+）8如何報(bào)告結(jié)果？根據(jù)經(jīng)確證后的對(duì)應(yīng)濃度陽(yáng)性管數(shù)查MPN表MPN：最可能數(shù)，基于泊松分布的一種間接計(jì)數(shù)方法陽(yáng)性管數(shù)MPN95%可信限0.100.010.001下限上限000<3.0-9.50013.00.159.61003.60.1718333>1100420-9如何報(bào)告結(jié)果？現(xiàn)國(guó)標(biāo)的MPN表與原國(guó)標(biāo)的MPN表的不同點(diǎn)：1現(xiàn)表里的數(shù)字是有小數(shù)點(diǎn)的，而原標(biāo)準(zhǔn)對(duì)小數(shù)點(diǎn)進(jìn)行了四舍五入的處理。2現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的MPN表比原標(biāo)準(zhǔn)的MPN表要簡(jiǎn)化一些。原標(biāo)準(zhǔn)MPN表有64個(gè)組合，而現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)MPN表只有40個(gè)組合。3報(bào)告單位不同?，F(xiàn)報(bào)告單位為g/ml，而原報(bào)告單位是100g/ml。10關(guān)于新國(guó)標(biāo)大腸菌群MPN表的理解問(wèn)題新國(guó)標(biāo)的MPN表的基準(zhǔn)問(wèn)題。

1、新國(guó)標(biāo)的MPN表采用了3個(gè)稀釋度，分別是十倍－百倍－千倍，加樣量是3管，每管1毫升，意味著加入樣品的量為0.333克。

2、在樣品加入量為0.333克的情況下，使用新國(guó)標(biāo)MPN表，得到MPN/克的數(shù)值。11關(guān)于新國(guó)標(biāo)大腸菌群MPN表的理解問(wèn)題改變加樣量的問(wèn)題。在實(shí)際操作中，因?yàn)橐恍┰蛐枰淖兗訕恿?，一般?0倍增加或者降低，同樣使用本表，得到的數(shù)值需要做10倍調(diào)整。

比如：

加樣量為3.33克（這樣的情況一般是十倍稀釋液用3管，每管10毫升，需要用雙料管。十倍百倍稀釋液，各用三管，每管1毫升）。

12關(guān)于新國(guó)標(biāo)大腸菌群MPN表的理解問(wèn)題改變加樣量的問(wèn)題。這樣查表得到的數(shù)值，應(yīng)該降低10倍。

加樣量為3.33克，陽(yáng)性管為2－1－0，查表為15，這樣的話，結(jié)果應(yīng)該為MPN1.5/克，或者M(jìn)PN15/10克，或者M(jìn)PN150/100克。

13關(guān)于新國(guó)標(biāo)大腸菌群MPN表的理解問(wèn)題改變加樣量的問(wèn)題。再比如：

加樣量為0.0333克（這樣的情況是，不使用十倍稀釋液，而使用百倍－千倍－萬(wàn)倍稀釋液，各用三管，每管1毫升）。

這樣查表得到的數(shù)值，應(yīng)該增高10倍。

加樣量為0.0333克，陽(yáng)性管為2－1－0，查表為15，這樣的話，結(jié)果應(yīng)該為MPN150/克，或者M(jìn)PN1500/10克，或者M(jìn)PN15000/100克。14關(guān)于新國(guó)標(biāo)大腸菌群MPN表的理解問(wèn)題關(guān)于和產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)的問(wèn)題。

大家應(yīng)該注意到，這個(gè)問(wèn)題其實(shí)是一個(gè)稀釋度的選擇問(wèn)題。另外，這個(gè)問(wèn)題也可以回答是否可以直接換算的問(wèn)題。

比如：某產(chǎn)品要求MPN<30/100克。

在這種情況下，我們?nèi)绻褂眉訕恿?.333，如果全部是陰性0-0-0，得到的結(jié)果為<3/克，或者是<30/10克，或者是<300/100克。很明顯，在這種加樣量情況下是不能做出是否符合結(jié)果的判定的。15關(guān)于新國(guó)標(biāo)大腸菌群MPN表的理解問(wèn)題關(guān)于和產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)的問(wèn)題。

這樣的話，就需要增加加樣量，變成加樣量為3.33克，如果全部是陰性0-0-0，得到結(jié)果為<0.3/克，或者是<3/10克，或者是<30/100克。這樣的結(jié)果才能符合要求。

如果更精確的操作，應(yīng)該是加樣量為33.3克。這樣如果全部是陰性0-0-0，得到<3/100克，結(jié)果為2-1-0，得到MPN15/100克，也是合格產(chǎn)品。16關(guān)于新國(guó)標(biāo)大腸菌群MPN表的理解問(wèn)題關(guān)于和產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)的問(wèn)題。

從這個(gè)意義上講，稀釋度的選擇是根據(jù)產(chǎn)品要求進(jìn)行的，理論上：

如果要求得到每克產(chǎn)品菌群含量，加樣量應(yīng)該是0.333克比較合適。

如果要求得到每10克產(chǎn)品菌群含量，加樣量應(yīng)該是3.33克比較合適。

如果要求得到每100克產(chǎn)品菌群含