GB/T 19915.6-2005豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測(cè)方法

ICS07.100.30C53中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T：19915.6—2005豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測(cè)方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofSireptococcussuis2005-09-27發(fā)布2005-11-01實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T19915.6-2005前本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是規(guī)范性附錄·附錄B是資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國(guó)北京出入境檢驗(yàn)檢疫局、中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張鶴曉、宋立、高志強(qiáng)、寧宜寶、周琦、喬彩霞、楊承槐、吳丹、谷強(qiáng)本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T19915.6—2005豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測(cè)方法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測(cè)方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及生豬執(zhí)子、豬組織樣品中豬源鏈球菌的檢測(cè)規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測(cè)方法縮略語(yǔ)本標(biāo)準(zhǔn)采用下列縮略語(yǔ)：熒光PCR熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)C值每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)量達(dá)到設(shè)定的閩值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)圈數(shù)DNA脫氧核糖核酸TagDNA聚合酶PBS磷酸鹽緩沖生理鹽水原理采用TagMan方法.在比對(duì)豬源鏈球菌16SrDNA基因序列的基礎(chǔ)上.設(shè)計(jì)針對(duì)該基因的特異性引物和特異性的熒光雙標(biāo)記探針進(jìn)行配對(duì)。探針5"端標(biāo)記FAM熒光素為報(bào)告熒光基團(tuán)(用R表示）3"端標(biāo)記TAMRA熒光素為渾滅熒光基團(tuán)(用Q表示）,它在近距離內(nèi)能吸收5°端熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)。PCR反應(yīng)進(jìn)入退火階段時(shí),引物和探針同時(shí)與目的基因片段結(jié)合，此時(shí)探針上R基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)被Q基團(tuán)所吸收.儀器檢測(cè)不到熒光信號(hào);而反應(yīng)進(jìn)行到延伸階段時(shí).Taq酶的5"→3"的外切核酸酶功能將探針降解。這樣探針上的R基團(tuán)游離出來(lái),所發(fā)出的熒光不再為Q所吸收而被檢測(cè)儀所接收。隨著PCR反應(yīng)的循環(huán)進(jìn)行,PCR產(chǎn)物與熒光信號(hào)的增長(zhǎng)呈現(xiàn)對(duì)應(yīng)關(guān)系。5豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)置與管理豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)貿(mào)與管理見(jiàn)GB/T19438.1—2004中附錄C。試劑和材料6.1除另有說(shuō)明.所用試劑均為分析純。6.1.1無(wú)水乙醇：-20℃預(yù)冷6.1.275%乙醇;用新開(kāi)啟的無(wú)水乙醇和無(wú)DNA酶的滅菌純化水