GB/T 19438.1-2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法

ICS11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionofayianinfluenzavirus2004-02-14發(fā)布2004-02-15實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國國家標準禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法GB/T19438.1-2004中中國標準出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復興門外三里河北街16號郵政編碼：100045電話：63787337.637874472004年2月第一版2004年11月電子版制作書號：155066·1-20518如有排版錯誤本本社負責解決版權(quán)專有侵權(quán)必究舉報電話：010)68533533

GB/T19438.1一2004前GB/T19438-2004《禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法》分為以下四個部分：-GB/T19438.1一2004《禽流感病毒通用熒光RTPCR檢測方法》;-GB/T19438.2—2004《H5亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法》；B/T19438.3—2004H7亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法》；-GB/T19438.4—2004《H9亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法》本部分的附錄A、附錄C是規(guī)范性附錄，附錄B是資料性附錄。本部分由中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局提出。本部分起草單位：中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局、深圳市匹基生物工程股份有限公司本部分主要起草人：賴平安、張鶴曉、谷強、王甲正、周琦、楊偉、賴少梅。

GB/T19438.1一2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法1范圍本部分規(guī)定了禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測的操作方法本部分適用于活禽及其產(chǎn)品中禽流感病毒的檢測2縮略語下列縮略語適用于本部分21英光RT-PCR熒光反轉(zhuǎn)錄-集合酶鏈反應(yīng)。2.2C值每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的閩值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)2-3RNA24DEPC焦碳酸乙二酯、2.5PBS磷酸鹽緩沖鹽水（配方見附錄A）2.6T0g酶T4gDNA聚合酶原理禽流感病毒各亞型均屬A型流感病毒,根據(jù)A型流感病毒共有基因特定的序列，合成一對特異性引物和一條特異性的熒光雙標記探針。該探針與禽流感病毒特有的共同基因特異性結(jié)合，結(jié)合部位位于引物結(jié)合區(qū)域內(nèi)。探針的5°端和3端分別標記不同的熒光素，如5°端標記FAM熒光素,它發(fā)出的熒光能夠被檢測儀器接收，稱為報告熒光基團(用R表示)3"端一般標記TAMRA熒光素,它在近距離內(nèi)能吸收5°端報告熒光基團發(fā)出的熒光信號，稱為浮滅熒光基團(用Q表示)。當PCR反應(yīng)在退火階段時，一對引物和一條探針同時與目的基因片段結(jié)合.此時探針上R基團發(fā)出的熒光信號被Q基團所吸收，儀器檢測不到R所發(fā)出的熒光信號：當PCR反應(yīng)進行到延伸階段時T49酶在引物的引導下,以四種核苷酸為底物，根據(jù)堿基配對的原則,沿著模板鏈合成新鏈;當鏈的延伸進行到探針結(jié)合部位時，受到探針的阻礙而無法