標準解讀

《GB/T 19915.4-2005 豬鏈球菌2型三重PCR檢測方法》是中國國家標準化管理委員會發(fā)布的一項國家標準，旨在為豬鏈球菌2型的檢測提供一個統(tǒng)一、準確、高效的技術手段。這份標準詳細規(guī)定了使用聚合酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction, PCR）技術，尤其是三重PCR方法，來識別和鑒定豬鏈球菌2型的具體操作流程、試劑要求、質(zhì)量控制以及結果判定標準。

標準內(nèi)容概覽：

  1. 范圍：明確了本標準適用于豬組織樣本、臨床樣本以及其他相關樣本中豬鏈球菌2型的檢測。

  2. 規(guī)范性引用文件：列出了實施該標準時需要參考的其他相關國家標準或國際標準，確保檢測過程的一致性和準確性。

  3. 術語和定義：對涉及的專業(yè)術語進行了解釋，幫助讀者理解標準中的具體要求。

  4. 試劑與材料：詳細描述了進行三重PCR檢測所需的各類化學試劑、引物序列、DNA模板制備所需的材料及其質(zhì)量要求，確保實驗的重現(xiàn)性。

  5. 儀器設備：列舉了實施PCR檢測所必需的儀器設備，如PCR擴增儀、離心機、電泳設備等，并對其性能指標提出具體要求。

  6. 樣本采集與處理：提供了樣本采集、保存、前處理的方法步驟，確保樣本質(zhì)量滿足檢測要求，避免污染和降解。

  7. PCR反應體系與條件：詳細說明了三重PCR反應的混合物組成、反應體積、循環(huán)參數(shù)等關鍵信息，這是實現(xiàn)特異性擴增的基礎。

  8. 操作步驟：從DNA提取、PCR反應準備到擴增、產(chǎn)物檢測（通常包括凝膠電泳分析），每一步驟均有詳細的操作指導。

  9. 結果判斷：制定了基于PCR產(chǎn)物大小或特異性條帶出現(xiàn)與否的結果判定標準，以區(qū)分豬鏈球菌2型及可能的其他類型或非目標微生物。

  10. 質(zhì)量控制：強調(diào)了實驗過程中的質(zhì)量控制措施，包括陰性對照、陽性對照的設置，以及如何監(jiān)控和減少假陽性和假陰性結果的產(chǎn)生。

  11. 安全要求：提醒操作人員遵循實驗室生物安全規(guī)程，特別是在處理潛在感染性樣本時。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2005-09-27 頒布
  • 2005-11-01 實施
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文檔簡介

ICS07.100.30C53中華人民共和國國家標準GB/T：19915.4—2005豬鏈球菌2型三重PCR檢測方法MethodofdetectingStreptococcussuistype2bytriple-PCR2005-09-27發(fā)布2005-11-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標準化管理委員會

GB/T19915.4—2005豬鏈球菌2型是鏈球菌屬的成員，其致病菌株可致豬鏈球菌病,引起豬敗血癥、腦膜炎等。人可通過傷口感染該苗.并導致死亡。為了區(qū)別正常豬所攜帶的豬鏈球菌2型無毒苗林與發(fā)病豬分離的致病菌林，特制定本標準。本標準是采用現(xiàn)代分子生物學診斷技術制定的。本標準由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口本標準起草單位：南京農(nóng)業(yè)大學。本標準主要起草人：陸承平、姚火春、范紅結、何孔旺、

GB/T19915.4—2005豬鏈球菌2型三重PCR檢測方法范圍本標準規(guī)定了豬鏈球菌2型英膜基因(cp.2）、溶菌酶釋放蛋白基因(mrp)和or/2這三個毒力基因的三重PCR檢測技術。本標準適用于由豬鏈球菌2型致病基因和致病菌株的檢測范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件.其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標準.然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T6682—1992分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義下列術語和定義適用于本標準豬鏈球菌2型Sirepiococcussuistype2豬鏈球菌是屬于鏈球菌屬的一種細菌,根據(jù)其英膜多糖抗原的差異,可分為1～34及1/2共35個血清型。豬鏈球菌2型是豬鏈球菌的一個血清型,不僅對豬致病性很強，而且可以感染特定的人群.是一種重要的人畜共患病病原菌。側(cè)定方法4.1方法提要挑取可疑細菌培養(yǎng)物菌落，加入PCR反應管中,進行PCR擴增.瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物.與標準分子量標記比較，來確定擴增產(chǎn)物的大小。4.2試劑和材料除另有規(guī)定,所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682-1992的滅菌雙蒸水。4.2.1CDs2、"rp和or/2的上下游引物，按合成說明書使用。4.2.2TagDNA聚合酶。4.2.3瓊脂糖：電泳級。4.2.4溴化乙鍵。4.2.5分子量標記：DL-2000.4.2.6TE緩沖液：10mmol/LTris-HCI(pH8.0),1mmol/LEDTA(pH8.0)4.2.710×PCR緩沖液：100mmol/L.KCl,160mmol/L（NH,)SO,,20mmol/LMgSO,,200mmol/LTris-HCl(pH8.8).1%TritonX-100,1mg/mLBSA4.2.8電泳緩沖液：242gTris堿，57.1mL冰乙酸,100mL0.5mol/LEDTA(pH8.0)，加蒸水至1000mL.使用時10倍稀釋。4.2.9加樣緩沖液:0.25%溴酚藍.40%蔗糖4.2.10陽性對照豬鏈球

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