GB/T 17999.9-2008SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測第9部分：SPF雞試管凝集試驗(yàn)

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜１７９９９．９—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１７９９９．８—１９９９

犛犘犉雞微生物學(xué)監(jiān)測

第９部分：犛犘犉雞試管凝集試驗(yàn)

犛犘犉犮犺犻犮犽犲狀—犕犻犮狉狅犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾狊狌狉狏犲犻犾犾犪狀犮犲—

犘犪狉狋９：犜狌犫犲犪犵犵犾狌狋犻狀犪狋犻狅狀狋犲狊狋犳狅狉犛犘犉犮犺犻犮犽犲狀

２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書

犌犅／犜１７９９９．９—２００８

前言

ＧＢ／Ｔ１７９９９《ＳＰＦ雞微生物學(xué)監(jiān)測》分為１０個(gè)部分：

———第１部分：ＳＰＦ雞微生物學(xué)監(jiān)測總則；

———第２部分：ＳＰＦ雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)；

———第３部分：ＳＰＦ雞血清中和試驗(yàn)；

———第４部分：ＳＰＦ雞血清平板凝集試驗(yàn)；

———第５部分：ＳＰＦ雞瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)；

———第６部分：ＳＰＦ雞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；

———第７部分：ＳＰＦ雞胚敏感試驗(yàn)；

———第８部分：ＳＰＦ雞雞白痢沙門氏菌檢驗(yàn)；

———第９部分：ＳＰＦ雞試管凝集試驗(yàn)；

———第１０部分：ＳＰＦ雞間接免疫熒光試驗(yàn)。

本部分為ＧＢ／Ｔ１７９９９的第９部分。

本部分代替ＧＢ／Ｔ１７９９９．８—１９９９《ＳＰＦ雞試管凝集試驗(yàn)》。

本部分與ＧＢ／Ｔ１７９９９．８—１９９９相比主要變化如下：

———增加了附錄Ａ“試劑的配制”；

———修改了凝集試驗(yàn)結(jié)果的判定；

———?jiǎng)h除了雞傷寒沙門氏菌檢測內(nèi)容；

———在范圍中進(jìn)一步明確了本部分使用的情況。

本部分的附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本部分由全國動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本部分起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心、濟(jì)南斯帕法

斯家禽有限公司。

本部分主要起草人：曲連東、姜騫、韓凌霞、邵衛(wèi)星、朱果、單忠芳、劉家森、司昌德、郭東春、于海波、

孟慶文。

本部分所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１７９９９．８—１９９９。

Ⅰ

書

犌犅／犜１７９９９．９—２００８

犛犘犉雞微生物學(xué)監(jiān)測

第９部分：犛犘犉雞試管凝集試驗(yàn)

１范圍

ＧＢ／Ｔ１７９９９的本部分規(guī)定了試管凝集試驗(yàn)的技術(shù)要求。

本部分適用于對(duì)ＳＰＦ雞進(jìn)行雞白痢沙門氏菌血清抗體檢測。

用血清平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行雞白痢沙門氏菌的抗體檢測，結(jié)果難以判斷時(shí)，可采用本部分進(jìn)行復(fù)檢。

２原理

細(xì)菌性抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，在適量電解質(zhì)參與下，經(jīng)過一段時(shí)間出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，

結(jié)果判定以凝集價(jià)表示。

３試劑和器材

３．１試劑

雞白痢抗原（含菌１０９ＣＦＵ），標(biāo)準(zhǔn)陽性、陰性血清，被檢血清，０．５％石炭酸生理鹽水（配制方法見

附錄Ａ）。

３．２器材

試管（口徑８ｍｍ～１０ｍｍ）。

４操作程序

４．１?。抵г嚬?，第１管加石炭酸生理鹽水１．８ｍＬ，其余各管加１ｍＬ，第１管加被檢血清０．２ｍＬ，與

石炭酸生理鹽水混勻（１∶１０稀釋），取１ｍＬ移至第２管，連續(xù)倍比稀釋至第４管，從第４管吸出１ｍＬ

棄去，各管血清最后稀釋度依次為１∶２０，１∶４０，１∶８０，１∶１６０，１∶３２０。

４．２每管加入抗原液１ｍＬ。

４．３抗原對(duì)照：在試管中加抗原液１ｍＬ，加０．５％石炭酸生理鹽水１ｍＬ。

４．４陽性血清對(duì)照：將陽性血清稀釋至工作濃度（按說明使用）。在試管中加抗原液１ｍＬ，加稀釋的陽

性血清１ｍＬ。

４．５陰性血清對(duì)照：同陽性血清稀釋度使用。

４．６試管振蕩后，置３７℃溫箱中孵育，２４ｈ后移入４℃～８℃冰箱過夜。

４．７結(jié)果觀察：抗原對(duì)照結(jié)果與陰性血清對(duì)照，均呈“－”，陽性血清對(duì)照呈不同程度凝集，表明試驗(yàn)成立。

凝集結(jié)果判定見表１。凝集效價(jià)以呈現(xiàn)“＋＋”凝集試管的血清最高稀釋倍數(shù)作為該血清的凝集效價(jià)。

表１凝集試驗(yàn)結(jié)果判定

類別試管所見結(jié)果判定

１出現(xiàn)大的凝集塊，上層液體完全透明＋＋＋＋

２出現(xiàn)明顯凝集塊，上層液透明度達(dá)７５％＋＋＋陽性

３出現(xiàn)可見的凝集顆粒，上層液透明度達(dá)５０％＋＋

４出現(xiàn)輕微可見的凝集