GB/T 17999.10-2008SPF雞微生物學監(jiān)測第10部分：SPF雞間接免疫熒光試驗

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜１７９９９．１０—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１７９９９．９—１９９９

犛犘犉雞微生物學監(jiān)測

第１０部分：犛犘犉雞間接免疫熒光試驗

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２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜１７９９９．１０—２００８

前言

ＧＢ／Ｔ１７９９９《ＳＰＦ雞微生物學監(jiān)測》分為１０個部分：

———第１部分：ＳＰＦ雞微生物學監(jiān)測總則；

———第２部分：ＳＰＦ雞紅細胞凝集抑制試驗；

———第３部分：ＳＰＦ雞血清中和試驗；

———第４部分：ＳＰＦ雞血清平板凝集試驗；

———第５部分：ＳＰＦ雞瓊脂擴散試驗；

———第６部分：ＳＰＦ雞酶聯(lián)免疫吸附試驗；

———第７部分：ＳＰＦ雞胚敏感試驗；

———第８部分：ＳＰＦ雞雞白痢沙門氏菌檢驗；

———第９部分：ＳＰＦ雞試管凝集試驗；

———第１０部分：ＳＰＦ雞間接免疫熒光試驗。

本部分為ＧＢ／Ｔ１７９９９的第１０部分。

本部分代替ＧＢ／Ｔ１７９９９．９—１９９９《ＳＰＦ雞間接免疫熒光試驗》。

本部分與ＧＢ／Ｔ１７９９９．９—１９９９相比主要變化如下：

———增加了規(guī)范性附錄Ａ“試劑的配制”和資料性附錄Ｂ“細胞計數(shù)方法”；

———詳細界定了試驗成立條件和待檢樣品的判定標準。

本部分的附錄Ａ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本部分由全國動物防疫標準化技術(shù)委員會（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本部分起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所、中國動物衛(wèi)生與流行病學中心、濟南斯帕法

斯家禽有限公司。

本部分主要起草人：曲連東、劉家森、韓凌霞、邵衛(wèi)星、朱果、單忠芳、姜騫、司昌德、于海波、孟慶文。

本部分所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１７９９９．９—１９９９。

Ⅰ

書

犌犅／犜１７９９９．１０—２００８

犛犘犉雞微生物學監(jiān)測

第１０部分：犛犘犉雞間接免疫熒光試驗

１范圍

ＧＢ／Ｔ１７９９９的本部分規(guī)定了間接免疫熒光試驗的技術(shù)要求等。

本部分適用于對ＳＰＦ雞進行雞傳染性貧血病毒（ＣｈｉｃｋｅｎＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＡｎａｅｍｉａＶｉｒｕｓ，ＣＩＡＶ）抗體的

檢測。

２原理

間接免疫熒光試驗，以病毒感染細胞作抗原，與待檢血清中的特異抗體結(jié)合，再與熒光色素標記的

抗抗體結(jié)合，形成抗原—抗體—抗抗體復(fù)合物。熒光色素在紫外光或藍紫光的作用下，激發(fā)出可見的熒

光，因此出現(xiàn)熒光就說明標記物的存在，同時也反映了特異性抗體的存在。常采用已知抗原及熒光色素

標記的抗抗體檢測相應(yīng)的抗體。

３試劑和器材

３．１試劑

３．１．１ＣＩＡＶ病毒ＤＥＬＲＯＳＥ株。

３．１．２陰性、陽性血清。

３．１．３被檢血清。

３．１．４磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）（見附錄Ａ）。

３．１．５異硫氰熒光素（ＦＩＴＣ）標記抗雞ＩｇＧ（按說明稀釋使用）。

３．１．６緩沖甘油或封片劑（見附錄Ａ）。

３．１．７丙酮。

３．２器材

３．２．１抗原片。

３．２．２濕盒。

３．２．３３７℃培養(yǎng)箱。

３．２．４熒光顯微鏡。

４操作程序

４．１感染細胞的制備

用含１５％新生牛血清的ＤＭＥＭ培養(yǎng)基在３９℃和５％二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)ＭＤＣＣＭＳＢ１細胞。

細胞長至每毫升５×１０６個時（細胞計數(shù)參見附錄Ｂ），接種ＣＩＡＶ，并換成含５％新生牛血清的ＤＭＥＭ

培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)３６ｈ～４８ｈ。

４．２抗原片的制備

４．２．１細胞病變（細胞體積增大２倍～３倍）約達５０％～７５％時，收集細胞培養(yǎng)物，以１５００ｒ／ｍｉｎ離心

１０ｍｉｎ，棄上清液，用ＰＢＳ洗滌細胞沉淀物３次，并細胞計數(shù)，用ＰＢＳ重懸細胞濃度。