春動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶tostudents解析

第三章動(dòng)、植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶與微生物細(xì)胞相比，動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞具有各自不同的特性，需采用各自不同的培養(yǎng)工藝。

植物、動(dòng)物、微生物細(xì)胞的特性比較細(xì)胞種類植物細(xì)胞微生物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞大小/um200～3001～1010～100倍增時(shí)間/h﹥120.3-6﹥15營(yíng)養(yǎng)要求簡(jiǎn)單簡(jiǎn)單復(fù)雜光照要求大多數(shù)要求不要求不要求對(duì)剪切力敏感大多數(shù)不敏感非常敏感主要產(chǎn)物色素、藥物、香精、酶等醇、有機(jī)酸、氨基酸、抗生素、核苷酸、酶等疫苗、激素、單克隆抗體、酶等三者之間的差異主要有：植物細(xì)胞>動(dòng)物細(xì)胞>微生物細(xì)胞。動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞的生產(chǎn)周期比微生物長(zhǎng)。植物細(xì)胞和微生物細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)要求較簡(jiǎn)單。植物細(xì)胞的生長(zhǎng)以及次級(jí)代謝物的生產(chǎn)要求一定的光照。植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞對(duì)剪切力敏感。植物、微生物和動(dòng)物細(xì)胞的主要目的產(chǎn)物各不相同。雪蓮中黃酮類化合物為主要成分。黃酮類化合物以黃酮（2-苯基色原酮）為母核而衍生的一類黃色色素。黃酮化合物具有多種生物活性，抗菌、消炎、抗突變、降壓、清熱解毒、鎮(zhèn)靜，在抗氧化、抗癌、防癌等方面也有顯著效果；是大多數(shù)氧自由基的清除劑，對(duì)治療冠心病、心絞痛、高血壓等有顯著效果；對(duì)降低舒張壓，防治心律失常、心血管病和活血化瘀也起重要作用。自然資源有限，生長(zhǎng)條件苛刻，很難人工栽培。通過水母雪蓮細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)黃酮有著重要意義。動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶本章主要內(nèi)容動(dòng)植物細(xì)胞中酶生物合成的調(diào)節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞及其培養(yǎng)特點(diǎn)植物細(xì)胞培養(yǎng)及產(chǎn)酶的工藝控制動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞及其培養(yǎng)特點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)及產(chǎn)酶的工藝控制動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶第一節(jié)動(dòng)植物細(xì)胞中酶生物合成的調(diào)節(jié)從基因到蛋白質(zhì)有關(guān)微生物細(xì)胞中酶合成的調(diào)節(jié)理論也基本適用于動(dòng)植物細(xì)胞動(dòng)植物細(xì)胞具有比微生物更多的調(diào)節(jié)方式轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)翻譯水平調(diào)節(jié)激素、神經(jīng)調(diào)節(jié)動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)植物細(xì)胞中酶生物合成的調(diào)節(jié)一、細(xì)胞分化改變酶的生物合成——端粒（telomere）端粒是真核生物染色體的末端結(jié)構(gòu)由富含G、T的DNA簡(jiǎn)單重復(fù)序列不斷重復(fù)而成人端粒序列：……TTAGGG……保護(hù)真核生物染色體免遭破壞犧牲自我，填補(bǔ)DNA復(fù)制后在5’-端留下的空隙端粒隨細(xì)胞年齡的增長(zhǎng)而逐漸縮短端粒酶（telomerase）——催化端粒合成和延長(zhǎng)核糖核蛋白，其中的RNA部分含核苷酸模板序列，可構(gòu)建端粒重復(fù)序列端粒酶一般存在于分化程度較低的細(xì)胞中動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)植物細(xì)胞中酶生物合成的調(diào)節(jié)二、基因擴(kuò)增加速酶的生物合成通過增加基因的數(shù)量調(diào)節(jié)基因表達(dá)，可以發(fā)生在個(gè)體發(fā)育某一階段或細(xì)胞分化某一過程細(xì)胞的一種應(yīng)急方式基因擴(kuò)增可以由選擇壓力引起耐藥性細(xì)胞的抗藥性產(chǎn)生例：CHO（中國(guó)田鼠卵巢）細(xì)胞為對(duì)抗氨甲基喋呤對(duì)二氫葉酸還原酶的抑制，編碼這種酶的基因急劇擴(kuò)增動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)植物細(xì)胞中酶生物合成的調(diào)節(jié)三、增強(qiáng)子促進(jìn)酶的生物合成增強(qiáng)子（modulator）——能高效增強(qiáng)或促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列增強(qiáng)子能促進(jìn)同源或異源啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄活性，可高效增強(qiáng)某些酶基因的表達(dá)具有細(xì)胞或組織特異性，在不同細(xì)胞或組織中增強(qiáng)效果不同抗原和抗體

當(dāng)外源物性物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、毒素、糖蛋白、脂蛋白、核酸、多糖、顆粒（細(xì)菌、細(xì)胞、病毒）進(jìn)入人或動(dòng)物體內(nèi)時(shí)，機(jī)體的免疫系統(tǒng)便產(chǎn)生相應(yīng)的免疫球蛋白（immuneglobin），并以之結(jié)合，以消除異物的毒害。此反應(yīng)稱為免疫反應(yīng)，此異物便是抗原，此球蛋白便是抗體?？贵w酶（Abzyme)是具有酶催化功能的抗體分子。

本質(zhì)為免疫球蛋白，在可變區(qū)被賦予了酶的屬性。四、抗原誘導(dǎo)抗體酶的生物合成動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)植物細(xì)胞中酶生物合成的調(diào)節(jié)四、抗原誘導(dǎo)抗體酶的生物合成抗體酶（abzyme）：催化性抗體，是具有生物催化功能的抗體分子，是人工改造的對(duì)抗體可變區(qū)賦予催化特性的特殊抗體修飾法在抗體與抗原結(jié)合部位引進(jìn)催化基團(tuán)誘導(dǎo)法（主要方法）半抗原誘導(dǎo)酶蛋白誘導(dǎo)第二節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物來源物質(zhì)的生產(chǎn)方法有兩種：1、提取分離法：原料有限2、細(xì)胞培養(yǎng)法在人工控制條件的植物細(xì)胞反應(yīng)器中進(jìn)行優(yōu)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，從而獲得各種所需產(chǎn)物。植物材料提取分離純化產(chǎn)品動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶1902年，Haberlandt首次提出分離植物單細(xì)胞并培養(yǎng)成植株的設(shè)想植物細(xì)胞的全能性Haberlandt哈勃蘭德動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶一、植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶種類產(chǎn)酶植物細(xì)胞產(chǎn)酶品種胡蘿卜細(xì)胞糖苷酶紫苜蓿細(xì)胞-半乳糖苷酶甜菜細(xì)胞過氧化物酶、酸性/堿性轉(zhuǎn)化酶、糖化酶大豆細(xì)胞過氧化物酶、苯丙氨酸裂合酶花生細(xì)胞苯丙氨酸裂合酶假挪威槭細(xì)胞漆酶利馬豆細(xì)胞-葡萄糖苷酶番木瓜細(xì)胞木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶大蒜細(xì)胞超氧化物歧化酶菠蘿細(xì)胞菠蘿蛋白酶劍麻細(xì)胞劍麻蛋白酶動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶二、植物細(xì)胞的主要特點(diǎn)體積較大：比動(dòng)物細(xì)胞和微生物細(xì)胞都大細(xì)胞生長(zhǎng)速率和代謝速率低于微生物細(xì)胞，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)要求較動(dòng)物細(xì)胞簡(jiǎn)單細(xì)胞生長(zhǎng)及合成次級(jí)代謝產(chǎn)物需要光照條件對(duì)剪切力較敏感主要用于產(chǎn)天然產(chǎn)物、色素、香精等有機(jī)物（次級(jí)代謝物）動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶三、植物細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)提高目標(biāo)物的產(chǎn)率縮短生產(chǎn)周期木瓜蛋白酶：木瓜生長(zhǎng)期8個(gè)月，木瓜細(xì)胞培養(yǎng)約1個(gè)月易于管理，不受自然因素控制可以提高產(chǎn)物質(zhì)量通過嚴(yán)格的培養(yǎng)條件控制，減少植株病蟲害和污染四、缺點(diǎn)培養(yǎng)條件要求高——光照、剪切力影響顯著植物細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢——相對(duì)于微生物五、工藝條件及控制1、工藝流程外植體獲取細(xì)胞（誘導(dǎo)愈傷組織）細(xì)胞培養(yǎng)分離純化酶外植體：

從植株取出，經(jīng)過預(yù)處理后，用于植物組織培養(yǎng)的植物組織（包括根、莖、葉、芽、花、果實(shí)、種子等）片段或小塊。愈傷組織：一種能迅速增殖、無特定結(jié)構(gòu)和功能的薄壁細(xì)胞團(tuán)

將上述外植體植入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于25℃左右培養(yǎng)一段時(shí)間，從外植體的切口部位長(zhǎng)出小細(xì)胞團(tuán)。動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)——外植體選擇和處理外植體（explant）從植株取出，經(jīng)預(yù)處理后用于組織和細(xì)胞培養(yǎng)的植物組織片段或小塊根、莖、葉、芽、花、果實(shí)、種子等選擇：無病蟲害、生長(zhǎng)旺盛、生長(zhǎng)有規(guī)則切片：0.5～1cm消毒70%乙醇5%次氯酸鈉/10%漂白粉0.01～0.1%HgCl2水稻的外植體（幼胚）動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)——獲取植物細(xì)胞：直接分離法直接分離法即直接從外植體中分離機(jī)械法將外植體搗碎，過濾或離心分離細(xì)胞質(zhì)壁未分離；細(xì)胞破碎率高，完整細(xì)胞數(shù)量少酶解法利用果膠酶、纖維素酶等處理外植體，分離具有代謝活性的細(xì)胞能降解細(xì)胞壁，必須對(duì)細(xì)胞給予滲透壓保護(hù)動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)——獲取植物細(xì)胞：愈傷組織誘導(dǎo)法愈傷組織（callus）由外植體組織增生的細(xì)胞產(chǎn)生的團(tuán)狀不定型的疏散排列的薄壁細(xì)胞群體；本意是指植物體的局部受到創(chuàng)傷刺激后，在傷口表面新生的可幫助傷口愈合的組織誘導(dǎo)過程配制半固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基滅菌、植入外植體1～3周后繼代培養(yǎng)動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)——獲取植物細(xì)胞：原生質(zhì)體再生法一般采用酶解法分離原生質(zhì)體，使用纖維素酶和果膠酶混合物保持溶液的高滲狀態(tài)防止原生質(zhì)體脹裂滲透壓穩(wěn)定劑：糖、鹽、甘露醇、山梨醇等原生質(zhì)體培養(yǎng)，再生細(xì)胞壁動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)——懸浮培養(yǎng)將游離的單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)按照一定的細(xì)胞密度懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的方法懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞一般來源于愈傷組織，選擇較松散的為宜植物細(xì)胞培養(yǎng)——產(chǎn)物分離純化收集培養(yǎng)液，從中獲得所需的產(chǎn)物2、培養(yǎng)基的特點(diǎn)（1）需大量無機(jī)鹽（2）需維生素和生長(zhǎng)激素：硫胺素、吡哆素、鹽酸、肌醇、生長(zhǎng)素、分裂素等（3）一般為無機(jī)氮源：硝酸鹽和銨鹽（4）一般以蔗糖為碳源動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶3、工藝條件及其控制溫度室溫范圍（25oC左右）最適產(chǎn)酶溫度和最適生長(zhǎng)溫度不同pH微酸性（pH5～6）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，pH一般變化不大溶解氧植物細(xì)胞需氧量不高，供氧不宜過量對(duì)剪切力敏感，通風(fēng)攪拌不宜太劇烈動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶工藝條件及其控制光照光照對(duì)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)和產(chǎn)物合成具有重要影響（植物特色）光照有時(shí)也抑制產(chǎn)物合成添加前體前體：處于目的代謝物代謝途徑上游的物質(zhì)添加前體相對(duì)于添加了反應(yīng)的底物刺激劑（elector）引導(dǎo)物質(zhì)朝特定的代謝方向進(jìn)行，強(qiáng)化次級(jí)代謝產(chǎn)物的生物合成常用微生物細(xì)胞壁碎片和果膠酶、纖維素酶等胞外酶動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶六、產(chǎn)酶實(shí)例——大蒜細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)SOD超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD，）生物體內(nèi)清除超氧化物陰離子自由基（O2·-）的重要金屬酶類SOD和過氧化氫酶(catalase)、過氧化物酶(peroxidase，POD)一起構(gòu)成了生物體內(nèi)重要的酶促反應(yīng)防御體系，從而維護(hù)生物體內(nèi)細(xì)胞正常的生理代謝和生化反應(yīng)動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶產(chǎn)酶實(shí)例——大蒜細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)SOD大蒜愈傷組織的誘導(dǎo)選取結(jié)實(shí)、飽滿、無病蟲害的大蒜蒜瓣，去除外皮先用70%乙醇消毒20s，再用0.1%升汞消毒10min，然后無菌水漂洗3次在無菌條件下，切成0.5cm3

的小塊，植入含有3mg/L2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和1.2mg/L6-BA（卞基腺嘌呤）的半固體MS培養(yǎng)基中25oC，600lux，12h/d光照條件下培養(yǎng)18天，誘導(dǎo)得到愈傷組織，每18天繼代一次動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶產(chǎn)酶實(shí)例——大蒜細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)SOD大蒜細(xì)胞懸浮培養(yǎng)將上述在半固體MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)18天的愈傷組織，在無菌條件下轉(zhuǎn)入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA的液體MS培養(yǎng)基中，加入滅菌的玻璃珠，25oC，600lux，12h/d光照條件下振蕩培養(yǎng)10～12天，使愈傷組織分散成為小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞無菌條件下，經(jīng)過篩網(wǎng)將小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA的液體MS培養(yǎng)基中，25oC，600lux，12h/d光照條件下振蕩培養(yǎng)18天SOD分離純化收集細(xì)胞，破碎，用pH7.8磷酸鹽緩沖液提取七、現(xiàn)狀：

1、產(chǎn)率低

2、周期長(zhǎng)，易染菌

3、光照難控制，放大難

4、成本高，生產(chǎn)高價(jià)值產(chǎn)品動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶第二節(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞特性沒有細(xì)胞壁，細(xì)胞脆弱（區(qū)別于植物和微生物）體積比微生物細(xì)胞大幾千倍，但稍小于植物細(xì)胞在肌體內(nèi)相互粘連，以群體形式存在在培養(yǎng)時(shí)具有群體效應(yīng)、貼壁依賴性、接觸抑制性、功能全能性營(yíng)養(yǎng)要求復(fù)雜（血清培養(yǎng)基）動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)主要用于生產(chǎn)蛋白質(zhì)生長(zhǎng)緩慢容易受污染（細(xì)菌、支原體），培養(yǎng)過程中需添加抗生素對(duì)剪切力特別敏感（胞外缺少保護(hù)結(jié)構(gòu)）大部分具有貼壁依賴性——

貼壁培養(yǎng)培養(yǎng)基成分復(fù)雜，價(jià)格高昂細(xì)胞生命有限，一般最多繼代培養(yǎng)50代即退化死亡動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)方式——懸浮培養(yǎng)適用于非貼壁依賴型細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、體液（血液、淋巴液）細(xì)胞類似于微生物細(xì)胞的深層發(fā)酵，但工藝條件有較大差別對(duì)通氣、攪拌耐受性差對(duì)氧氣的要求較微生物低，培養(yǎng)時(shí)需通入一定比例CO2優(yōu)點(diǎn)（相對(duì)于貼壁培養(yǎng)）細(xì)胞在培養(yǎng)液中均勻分散，生長(zhǎng)情況良好傳代培養(yǎng)容易，無需消化分散細(xì)胞培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成分利用率高動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)方式——貼壁培養(yǎng)適用于貼壁依賴型細(xì)胞上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞細(xì)胞在培養(yǎng)容器表面迅速鋪展并分裂滾瓶培養(yǎng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，但比表面積小微載體培養(yǎng)系統(tǒng)由葡聚糖凝膠等聚合物制得的微球兼具單層培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境均一動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)方式——固定化培養(yǎng)貼壁或非貼壁依賴型細(xì)胞均適用吸附法載體為多孔性顆粒，如陶瓷顆粒、玻璃珠及硅膠顆粒貼壁型細(xì)胞的微載體培養(yǎng)即屬此類包埋法將細(xì)胞包埋于瓊脂、瓊脂糖、膠原及血纖維等海綿狀基質(zhì)中細(xì)胞不易脫落固定化培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)細(xì)胞損傷程度低，可重復(fù)使用產(chǎn)物分離容易動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程種質(zhì)細(xì)胞體細(xì)胞（動(dòng)物體內(nèi)組織取出）雜交瘤細(xì)胞基本工藝過程動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶培養(yǎng)基（1）加血清或代用品（2）水用雙蒸水（3）用無機(jī)鹽調(diào)節(jié)滲透壓（4）一般加抗生素（青霉素&鏈霉素）動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制溫度哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般控制在36.5±0.25oC溫度也影響CO2

溶解度，從而影響培養(yǎng)液pH值滲透壓保持細(xì)胞內(nèi)外等滲狀態(tài)，一般700～850kPa溶解氧供氧不足：細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制過量供氧：容易產(chǎn)生較多氧自由基，殺傷細(xì)胞用混合氣代替空氣（空氣、O2、N2、CO2）動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制pH值與CO2

濃度動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液pH在7.0～7.6之間，以pH7.4為最佳最常用的緩沖體系為CO2/HCO3-動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)缺少CO2，培養(yǎng)液中的HCO3-

會(huì)被耗盡；CO2

保持了HCO3-

的濃度，以提供穩(wěn)定的緩沖環(huán)境通常CO2

濃度維持在2～10%之間指示劑：酚紅動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制pH值——HEPES緩沖體系HEPES：4-羥乙基哌嗪乙磺酸4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazine-1-ethanesulfonicacidHEPESisazwitterionicorganicchemicalbufferingagent.HEPESiswidelyusedincellculture,largelybecauseitisbetteratmaintainingphysiologicalpHdespitechangesincarbondioxideconcentration(producedbycellularrespiration)whencomparedtobicarbonatebuffers,whicharealsocommonlyusedincellculture.HEPESislikewaterinthatitsdissociationdecreasesasthetemperaturedecreases.ThismakesHEPESamoreeffectivebufferingagentformaintainingenzymestructureandfunctionat lowtemperatures.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶相關(guān)問題——

為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分離、稀釋并接種到新培養(yǎng)基上繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)的階段體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性，也就是說當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候，它就會(huì)停止生長(zhǎng)當(dāng)細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)器皿的表面時(shí)，正常的細(xì)胞停止生長(zhǎng)，但是轉(zhuǎn)化（即發(fā)生遺傳物質(zhì)突變）的、對(duì)接觸抑制不敏感的細(xì)胞會(huì)繼續(xù)生長(zhǎng)如果不及時(shí)傳代，這些轉(zhuǎn)化的細(xì)胞就會(huì)逐步取代正常的細(xì)胞，導(dǎo)致正常細(xì)胞的退化動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶?動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶產(chǎn)酶實(shí)例——

人黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)tPA（組織纖溶酶原激活劑—催化纖溶酶原水解，生成纖溶酶。纖溶酶催化血栓中的血纖維蛋白水解，對(duì)血栓性疾病有顯著療效）Tissueplasminogenactivator(abbr.tPA)isaproteininvolvedinthebreakdownofblo